Санитарный кодекс наземных животных МЭБ том 1

Глава 4.10. – Отбор и обращение с яйцеклетками / эмбрионами лабораторных грызунов и кроликов

Статья 4.10.2.

Требования к бригаде по отбору эмбрионов

Бригада по отбору эмбрионов – это группа квалифицированных техников, работающих под управлением ведущего специалиста, обладающего доказанным опытом ведения операций, которая занимается отбором, обращением и консервацией овоцитов и эмбрионов.

Требуется соблюдение следующих условий:

1.Бригада должна находиться под прямым контролем ведущего специалиста, обладающего документами, подтверждающими его опыт.

2.Ведущий специалист бригады несет ответственность за деятельность бригады, в частности, за проверку санитарного статуса колоний, санитарное состояние животных-доноров и соблюдение санитарных правил при манипуляциях и хирургических вмешательствах, а также за процедуры дезинфекции и гигиены. Ведущий специалист бригады должен находиться под общим контролем ветеринарного врача учреждения.

3.Ветеринарный врач учреждения должен обладать сертификатом или лицензией на ведение ухода за лабораторными животными, а также быть абилитирован для проведения операций на эмбрионах, предназначенных для международной торговли. Ответственность за проверку эффективного соблюдения санитарных протоколов в колониях также возлагается на ветеринарного врача учреждения. Он несет ответственность за сертификацию процедур манипуляции эмбрионами и лабораторных помещений согласно положениям настоящей главы.

4.Персонал бригады должен обладать надлежащей квалификацией в области методик и принципов профилактики болезней и обучен применению методов асептики при обращении с эмбрионами. Возможность того, что некоторые патогенные возбудители могут вызывать зоонозы должна быть доведена до сведения персонала и усвоена им для недопущения контаминации колоний переносчиками болезней человека (и наоборот).

5.Строгие меры гигиены должны действовать для недопущения передачи инфекций животнымдонорам, в колонии, помещения и оборудованию. Следует принимать меры для недопущения свободного доступа персонала в отделение отбора и обращения с эмбрионами после того, как он пребывал в других помещениях, где ведутся манипуляции с животными.

6.Бригада должна располагать помещениями и оборудованием, необходимым для:

a)отбора эмбрионов;

б) манипуляций и обработки эмбрионов в стационарном пункте или в мобильной лаборатории;

в) временного хранения эмбрионов.

7.Ветеринарный врач учреждения обязан следить за ведением полных досье по животным и

эмбрионам, в которые вносятся, среди прочего, сведения о ходе проведения операций по отбору, обработке и хранению эмбрионов. Карточки по образцу тех, что представлены в Руководстве IETS2 , адаптированные к категории животных, должны использоваться в случае необходимости для регистрации такой информации, как идентификация генотипа доноров, а также категории качества и морфологической стадии эмбриона. Журнал о проведенной работе бригада по отбору обязана хранить минимум в течение 2 лет после экспорта эмбрионов, для представления его Ветеринарным органам (властям) в случае проверки.

8.Бригада по отбору, если она ведет экспорт эмбрионов, должна обладать лицензией Компетентного органа и подвергаться периодическим проверкам, проводимым официальным ветеринарным врачом, для гарантии соблюдения санитарных процедур, применимых к отбору, обращению и хранению эмбрионов.

Кодекс здоровья наземных животных МЭБ 2010 г. 162

Глава 4.10. – Отбор и обращение с яйцеклетками / эмбрионами лабораторных грызунов и кроликов

Статья 4.10.3.

Требования, предъявляемые к лабораториям, занимающимся обращением с эмбрионами

Лаборатория, в которой бригада по отбору эмбрионов ведет манипуляции, представляет собой помещение, где эмбрионы извлекают из самок-доноров (или из репродуктивного аппарата), и где они извлекаются из среды отбора, подвергаются исследованиям и надлежащим обработкам (промывке, криоконсервации), а затем постановке на хранение и карантинирование в ожидании результатов диагностической процедуры. Лаборатория по обращению с эмбрионами может либо представлять собой либо корпус, специально построенный для отбора и обработки, либо часть уже существующего помещения, переоборудованного для этих целей. Она может находиться в месте содержания самокдоноров.

Помимо этого:

1.Лаборатория должна находиться под прямым надзором ветеринарного врача учреждения и регулярным надзором официального ветеринарного врача.

2.В лаборатории запрещается вести любые операции более низкого санитарного уровня, когда в ней находятся экспортные эмбрионы, подготовленные для помещения в ампулы, флаконы или пипетки.

3.Использованные для отделки лаборатории облицовочные материалы должны позволять эффективную уборку и дезинфекцию, которую проводят с регулярной частотой и в обязательном порядке перед началом и по окончанию каждой операции с экспортными эмбрионами.

Статья 4.10.4.

Управление риском

С точки зрения заноса болезней, пересадка эмбрионов, отобранных in vivo, представляет собой метод с низким риском передачи животного генетического материала. К какому бы виду не относилось животное, процесс пересадки эмбрионов делится на три этапа, которые определяют окончательный уровень риска:

1.На первом этапе имеется вероятность рисков заражения эмбрионов, что зависит от:

a)зоосанитарного положения в экспортирующей стране и/или экспортной зоне;

б) микробного статуса колонии (колония с определенной флорой, обычная колония или колония с неопределенным статусом) и зоосанитарного состояния самок-доноров, у которых отбирают эмбрионы;

в) патогенной силы специфических возбудителей, от которых Ветеринарные органы (власти)

импортирующей страны стремятся защититься.

2.На втором этапе ведется снижение риска с помощью международно признанных процедур обработки эмбрионов, которые определены в Руководстве IETS*. Эти процедуры являются следующими:

a)В зависимости от микробного статуса колонии эмбрионы промывают минимум десятикратно при минимальном разведении 1/100 между каждой промывкой; для перемещения эмбрионов между промывками каждый раз должна использоваться новая пипетка.

б) допускается групповая промывка исключительно эмбрионов, взятых у одной самки, а количество одновременно промываемых эмбрионов не должно превышать десяти;

в) в случае, когда требуется проведение операций по инактивации или уничтожению вирусов (герпесвирус, например), стандартная процедура промывки должна быть изменена путем включения дополнительной промывки раствором трипсина, как то указано в Руководстве

IETS**;

Кодекс здоровья наземных животных МЭБ 2010 г. 163

Глава 4.10. – Отбор и обращение с яйцеклетками / эмбрионами лабораторных грызунов и кроликов

г) после промывки пеллюцидную зону каждого эмбриона исследуют по всей поверхности при минимальном увеличении 50Х для признания ее неповрежденной и не имеющей никаких посторонних включений (за исключением муцина, если речь идет об эмбрионах кроликов.

3.Третий этап, относящийся к болезням, от которых Ветеринарные органы (власти) импортирующей страны стремятся защититься, касается средств снижения рисков благодаря следующим операциям:

а) надзору после отбора за микробным статусом колонии животных-доноров в течение нормальных сроков инкубационного периода болезней, от которых требуется защититься, с тем чтобы ретроспективно определить санитарное состояние доноров в период хранения эмбрионов в экспортирующей стране (в отношении видов, по которым возможна эффективная криоконсервация);

б) лабораторное исследование жидкостей отбора эмбрионов (промывка), непригодных эмбрионов или других образцов, например, крови – на предмет определенных патогенных возбудителей.

Статья 4.10.5.

Требования, предъявляемые к ветврачу бригады по отбору эмбрионы и/или учреждения

1.Ветврач учреждения несет ответственность за обеспечение соблюдения надлежащих процедур санитарного обследования для гарантии микробного статуса колонии (то есть колонии с определенной флорой, обычной колонии, или колонии с неопределенным статусом). Микробный статус колонии должен быть утвержден ветеринарным врачом учреждения перед отправкой эмбрионов.

2.В обязанности ветеринарного врача вменяется сертификация процедур обращения с эмбрионами и условий работы лаборатории согласно Статьям 4.10.2. и 4.10.3.

3.Он также несет ответственность за исполнение процедур управления риском, как они описаны в Статье

4.10.4

4.Ветеринарный врач обязан выдавать разрешение на любые отправки эмбрионов и следить, чтобы досье отбора эмбрионов и пакет сертификационных документов был надлежащим образом составлены и сопровождали отправляемые партии.

Статья 4.10.6.

Требования, предъявляемые к донорам колоний животных в зависимости от их микробного статуса

Следует отметить, что требования, предъявляемые к самкам-донорам, варьируют в зависимости от микробного статуса колонии, из которых они поступили, а именно: колонии с определенной флорой, обычной колонии и ли колонии с неопределенным статусом.

Контрольные животные, находящиеся в какой-либо колонии с определенной флорой или обычной колонии, должны подвергаться систематической проверке путем бактериологических исследований, предпочтительно с месячной регулярностью или, как минимум, раз в три месяца. Выявление отдельных возбудителей варьирует в зависимости от вида животных, а также от географической зоны. Рекомендации по отдельным бактериальным возбудителям, исследование на предмет которых проводят

улабораторных животных разных видов, неоднократно публиковались1.

1.Положение, когда микробный статус определен

a)Животные в составе колонии, санитарный статус которой является определенным (Статья 4.10.1), представляют собой наиболее чистый источник гамет и эмбрионов, которые, будучи получены из таких животных, могут быть признаны свободными от возбудителей.

б) Принимая во внимание, что доноры, давшие семя, и самки-доноры свободны от возбудителей, диссекция репродуктивного аппарата самок-доноров и изоляция эмбрионов могут проводиться в

Кодекс здоровья наземных животных МЭБ 2010 г. 164

Глава 4.10. – Отбор и обращение с яйцеклетками / эмбрионами лабораторных грызунов и кроликов

асептических условиях путем использования, в случае необходимости, безопасной вытяжки для биологических работ.

в) Хотя и не обязательно проводить промывку эмбрионов по рекомендациям, указанным во втором параграфе Статьи 4.10.2.ter, все же следует подвергать эмбрионы процедуре 2-3-кратной промывки. Промывая, эмбрионы осторожно встряхивают в среде.

г) Эмбрионы должны быть сертифицированы как происходящие из гнобиотической колонии или микробиологически определенной в изолированной емкости, что снимает необходимость обращения к процедурам управления отдельными рисками (Статья 4.10.4) для удаления патогенных возбудителей. Импортирующим учреждениям следует рассматривать вопрос карантинирования приемных самок.

2.Обычные условия

a)Колонии с обычным микробным статусом соответствуют закрытым колониям, санитарное состояние которых подвергается регулярному контролю (Статья 4.10.1.). Животные могут быть подвержены разным возбудителям, что может привести к заражению, сопровождающемуся выделением антител, или появлением клинических признаков, при этом возбудитель или возбудители, от которых требуется защита в какой-либо колонии, должны быть хорошо известны.

б) Репродуктивный аппарат (матка, маточные трубы и/или яичники) должны извлекаться в отдельное место перед отправкой в лабораторию по работе с эмбрионами. Эта операция должна проводиться техниками, не входящими в состав персонала лаборатории, а если это невозможно – следует, как минимум, сменить защитную одежду при переходе из помещений. Если животные должны подвергаться манипуляциям в лаборатории, репродуктивные аппараты разрезают в безопасной биологической вытяжке для недопущения распространения возбудителей по лаборатории.

в) После отбора репродуктивного аппарата, взятие эмбрионов должно осуществляться в асептических условиях. В зависимости от характера возбудителя, о присутствии которого в колонии известно, эмбрионы должны подвергаться манипуляциям в соответствии с процедурами управления риском, в частности, теми, что касаются промывки, как они описаны в статье

4.10.2. ter и Руководстве IETS2.

г) Эмбрионы, полученные от животных, обладающих антителами, или показывающих другие признаки контаминации отдельными возбудителями, должны поступать в новую колонию с обязательным проходом через систему карантинирования и путем использования приемных самок с определенным микробным статусом. Карантинирование также рекомендуется в случае сомнения в санитарном состоянии колонии или самок-доноров. В некоторых ситуациях, когда эмбрионы могут подвергаться угрозе бактериальной инфекции, перед отправкой их на криоконсервацию, или в период между размораживанием и помещением в контейнеры их помещают в культуру на 24 часа, в среду, содержащую подходящие антибиотики. Если учреждение-получатель решает провести карантин приемных самок и новорожденных до момента подтверждения их санитарного статуса, следует вести поиск возбудителей, от которых требуется защита, у приемных самок по окончании кормления молоком, а их потомство вводят в

колонию только в случае поступления удовлетворительных результатов.

3.Неопределенный микробный статус

a)Эмбрионы, которые получены от животных, выращенных на свободе, или происходят из

колоний, санитарное состояние которых не известно, должны пройти процедуры управления риском, как они описаны в Статье 4.10.2. ter и Руководстве IETS2. Эти процедуры близки тем, что рекомендуются для эмбрионов, отбираемых у фермерских животных (см. главы 4.7. и 4.8.) Наземного кодекса). В идеальных условиях самцы-производители и самки-доноры должны быть изолированы от других животных и быть подвергнуты обследованию за 15 дней до случки и в день случки (самцы) или в момент отбора эмбрионов (самки). Также возможно вводить этих животных в обычную колонию, где было бы возможным с течением времени отследить факты их санитарной биографии для снижения строгих требований, касающихся надзора за ними и обращения с эмбрионами.

Кодекс здоровья наземных животных МЭБ 2010 г. 165

Глава 4.10. – Отбор и обращение с яйцеклетками / эмбрионами лабораторных грызунов и кроликов

б) При осуществлении манипуляций с донорами и тканями, полученными из репродуктивных органов, а также при манипуляциях с эмбрионами должна использоваться безопасная лабораторная вытяжка.

в) После отбора эмбрионов/овоцитов может потребоваться проведение аутопсии самок-доноров для поиска отдельных болезней или возбудителей, от которых импортирующая страна стремится защититься. В случае необходимости, если эмбрионы были взяты путем хирургического вмешательства, аликвотная часть жидкости промыва, полученная от каждой из самок-доноров, или проба меланжа должны быть исследованы на предмет опасных возбудителей.

г) Эмбрионы должны подвергаться минимум 10-кратной промывке по протоколам, указанным в Руководстве IETS2, а в случае подозрения на присутствие некоторых герпесвирусов проводят обработку эмбрионов трипсином.

д) Замороженные эмбрионы должны сохраняться в экспортирующей лаборатории до завершения анализов проб из колоний, образцов тканей или жидкостей, а также до формирования пакета документов для обоснования сертификата, который составляется и подписывается

ветеринарным врачом учреждения.

е) По прибытии в импортирующую страну эмбрионы должны быть пересажены приемным самкам, которым они предназначены, с использованием системы карантина. Приемных самок подвергают обследованию в сроки, отвечающие известным инкубационным периодам тех болезней, от которых импортирующая страна стремится защититься. Кроме этого, контролю следует подвергать приемных самок после пересадки, и их потомство в возрасте 12 недель и перед заселением в репродуктивные колонии за пределами карантинного отделения.

Статья 4.10.7.

Требования, предъявляемые к временному хранению и транспортировке эмбрионов

1.Экспортные эмбрионы должны замораживаться в жидком азоте и сохраняться в очищенных и дезинфицированных флаконах или контейнера, заполненных жидким азотом.

2.Эмбрионы хранят в стерильных и запечатанных ампулах, флаконах или пипетках с соблюдением строгих гигиенических требований, в месте хранения, сертифицированном Ветеринарными органами (властями) экспортирующей страны, где отсутствует риск контаминации эмбрионов. В одну ампулу, флакон или пипетку помещают эмбрионы, полученные только от одной самки-донора.

3.Ампулы, флаконы или пипетки должны запечатываться в момент замораживания (или перед

отправкой на экспорт, если криоконсервация не возможна), на них наносят четкую маркировку в форме этикеток, согласно стандартам Руководства IETS2. На ней должны быть указаны: вид / генотип доноров, микробный статус (колония с определенной флорой, обычная колония, или колония с неопределенным статусом), дата отбора /криоконсервации, количество эмбрионов и стадия их развития, номер емкости, а также использовавшиеся специфические процедуры (оплодотворение in vitro или микроманипуляция, например).

4.Контейнеры с жидким азотом должны быть опечатаны под контролем официального ветеринарного врача до отправки из экспортирующей страны.

5.Эмбрионы не должны отправляться на экспорт до завершения составления обязательных ветеринарных сертификатов.

Статья 4.10.8.

Процедуры оплодотворения и микроманипуляции in vitro

Если эмбрионы производят путем оплодотворения in vitro овоцитов, рекомендуется использовать исключительно промытую сперму, с тем чтобы снизить до минимума риск заноса возбудителей. Если эмбрионы должны подвергнуться микроманипуляциям, включающим проникновение сквозь зону

Кодекс здоровья наземных животных МЭБ 2010 г. 166

Глава 4.10. – Отбор и обращение с яйцеклетками / эмбрионами лабораторных грызунов и кроликов

пеллюцида, перед их началом следует провести полную процедуру управления риском (в частности, процедуру промывки), как она расписана в Главе 4.9.

______________________

1Recommendations for the health monitoring of mouse, rat, hamster, guineapig and rabbit breeding colonies.- Report of the Federation of European Laboratory Animal Science Associations (FELASA), Working Group on Animal Health accepted by the FELASA Board of Management, November (1992).

2Руководство Международного общества пересадки эмбрионов.

Кодекс здоровья наземных животных МЭБ 2010 г. 167

Глава 4.11. – Ядерная пересадка соматических клеток сельскохозяйственных животных и непарнокопытных

Такой первоначальный круг вопросов ни в коей мере не исключает важных добавлений в перспективе. На сегодняшний день настоящие рекомендации включают следующие пункты:

−идентификация рисков для здоровья животных и рекомендации по управлению ими у эмбрионов, рецептивных животных, клонированных животных и потомства клонированных животных;

−риски и профилактические меры, связанные с техниками клонирования TNCS;

−отдельные вопросы благосостояния животных.

Принимая во внимание, что рекомендации по следующему списку уже разработаны другими организациями и являются сутью других инструментов (или должны быть таковыми), или же то, что они могут стать предметом нормотворчества МЭБ в перспективе, в настоящем документе не рассматриваются:

−санитарная безопасность и питательные свойства кормов, полученных из TRA (трансгенные продукты питания, которыми занимается Codex Alimentariux);

−риски, связанные с проникновением в окружающую среду клонированных животных;

−риски, связанные с трансгенными животными, которые не были получены путем ядерной пересадки соматических клеток или других техник клонирования;

−биотехнологии, применяемые к нерепродуктивным животным;

−риски, связанные с животными, производимыми для целей ксенотрансплантации или для донорских органов;

−технологии, касающиеся стволовых клеток;

−риски, связанные со здоровьем водных животных (в т.ч. клонирование рыбы);

−риски, связанные с другими наземными животными, а именно – дикими (млекопитающими и др.), в том числе птицей и насекомыми.

Статья 4.11.4.

Общие рамки: Анализ риска. Основные принципы.

1.Традиционно анализ риска включает идентификацию опасностей, определение риска, управление риском и информирование о риске. Определение риска – это тот этап, на котором оцениваются риски,

связанные с какой-либо опасностью (см. Главу 2.1). Эти принципы на систематической основе используются организациями, осуществляющими надзор, перед принятием решений об отказе от какоголибо экспериментального исследования или конкретной торговой операции. На втором этапе анализ используют для определения того, требуется ли принятие мер управления или регламентации или нет. На этапе управления риском эксперты оценивают целесообразность других возможных мер или политик в ответ на результаты определения риска с учетом различных социальных, экономических и юридических аспектов, образующих рамки, в которых будут приниматься практические действия.

2.В том, что касается болезней животных (в первую очередь тех, что включены в Наземный кодекс), имеется общее соглашение о характере потенциальных рисков; риски могут быть качественными или количественными (см. Главу 2.1.). В случае появления болезней сценарии подразумевают большую

(а иногда - единственную) возможность именно качественного определения риска. Качественные оценки не требуют обращения к математическому моделированию для принятия рутинных решений. Качественная или полукачественная оценка выражает риски в цифровом показателе (напр., 1/1 000 000) или словесном показателе (высокий / средний / низкий).

3.В контексте клонирования животных определение риска разделяют на две большие категории: абсолютное определение риска и сравнительный анализ рисков. Абсолютное определение риска

Кодекс здоровья наземных животных МЭБ 2010 г. 169

Глава 4.11. - Ядерная пересадка соматических клеток сельскохозяйственных животных и непарнокопытных

позволяет характеризовать риск вне привязки к какому-либо базовому элементу (напр., вероятности того, что какое-либо животное передаст болезнь другому животному). При сравнительном анализе рисков (относительном определении рисков) риск помещают в сравнительный контекст: напр., вероятность того, что какое-либо животное, полученное путем репродуктивной технологии, передаст данную болезнь другому животному одного вида - сравнительно с вероятностью того, что сходное животное, полученное по другой репродуктивной технологии, передаст ту же болезнь животному того же вида).

4.Какой бы ни была методология, идентификация опасностей – лишь предварительный этап определения риска, строящегося на научных критериях. В рамках определения рисков, связанных с клонированием животных (TNCS) (от эмбриона – до развития клонированного животного, а затем его потомства), важно уже на этом этапе четко указать, что единственно возможным является компаративное полуколичественное определение риска. В то время как систематическое, абсолютное, количественное определение потенциальных рисков трудноисполнимо по причине относительно нового характера самой технологии и вариативности результатов, получаемых в разных лабораториях и у разных видов клонируемых животных. Примечательно, что при обращении к техникам TNCS отсутствует опасность из-за введения новых генов (что имеет место в случае с трангенными технологиями). Таким образом анализ факторов, приводящих к рискам для здоровья животных, проводится путем анализа имеющихся референтных элементов.

5.Резюмируя, можно сказать, что следует идентифицировать критические пункты, на изучение которых должно быть направлено определение риска. Как то иллюстрирует диаграмма, главное внимание уделяют изучению основных элементов создания эмбриона (как это принято называть в современной терминологии), начиная с селекции овоцит-донора и клеток – до создания эмбриона методом клонирования. На втором этапе главное внимание уделяют рецептору клонированного эмбриона и аспектам, связанным с здоровьем и уходом за животными. Клонированный эмбрион, от которого ожидается получение потомства, составляет третью часть системы, требующую четких рекомендаций, наконец, на четвертом (заключительном) этапе главным предметом внимания является следующее поколение: либо клонированного животного (и которое может быть получено путем нормального полового размножения), либо реклонированного животного (т.н. «клоны клонов»).

Статья 4.11.5.

Менеджмент рисков для здоровья животных, связанных с эмбрионами

Производство эмбрионов методом in vitro ведется долгие годы. И хотя дополнительные этапы, которых требует клонирование, несколько усложняют эту технику, все риски, связанные с TNCS, были заранее идентифицированы в том, что касается ассистированных методов репродукции (см. Главу 4.8.). Анализ прикладной методологии TNCS позволяет классифицировать ее элементы следующим порядком:

а) Овоциты (полученные на бойне, отобранные путем трансвагинальной пункции или с помощью лапаротомии)

Основные риски связаны с состоянием здоровья животного, у которого отбирают яичники, и с качеством овоцитов.

б) Донорские клетки (клетки, отобранные у животного, селекционированного для клонирования – путем биопсии, отобранные на бойне или после смерти)

В настоящее время не выявлено никаких новых особых рисков, связанных с клонированием TNCS. Предполагалось, что имеется риск, связанный с активацией эндогенных ретровирусов при использовании методики клеточной пересадки, но этот риск признан скорее теоретическим нежели реальным. В некоторых современных экспериментальных техниках донорская клетка может быть подвергнута воздействию химических агентов для модификации ее состава (например, воздействию ингибиторов клеточного цикла или модификаторов хроматина).

в) Постановка выращенных эмбрионов на культуру in vitro (техника, используемая для слияния донорского материала с материалом рецептора и для культивирования выращенных эмбрионов)

Кодекс здоровья наземных животных МЭБ 2010 г. 170

Глава 4.11. – Ядерная пересадка соматических клеток сельскохозяйственных животных и непарнокопытных

г) Риски, связанные с методом слияния донорских клеток с изъятыми овоцитами-рецепторами, и теми, что обусловлены условиями культуры.

Помимо этого, оператор должен учитывать, что созревание клона зависит от породы, анатомии и физиологии суррогатной матери.

1.Овоциты

Лаборатория или производитель должны составить подробное досье, касающееся яичников, в котором указать их происхождение, состояние здровья животного, у которого они были отобраны, сведения о системных поражениях, наблюдаемых у этого животного, и данные о стаде, из которого оно происходит. Эта информация чрезвычайно необходима, когда имеется риск перекрестной контаминации тканей яичников из-за их смешения.

Фолликулярные жидкости могут содержать различные инфекционные возбудители (напр., вирус вирусной диареи бовинных) и контаминировать слитую фолликулярную жидкость, полученную от здоровых животных. Помимо этого, выбор методики отбора овоцитов (аспирация или декупаж на транши фолликул яичников) определяет степень заражения крови или качество вносимого материала. Следует взять репрезентативную пробу для доказательства отсутствия зараженного биологического материала в каждой из смесей.

Проводится созревания овоцитов, рассматриваемых в этом случае как комплекс овоцит-кумулюс (COC), после чего их помещают (в большинстве случаев) в культурную среду или в среду созревания. Особое внимание и меры предосторожности принимают, проводя селекцию и созревание овоцитов, взятых из смесей, отвечающих требованиям с точки зрения морфологии; также подвергают исследованию качество используемой культурной среды. Следует отказаться от использования сывороточных и протеиновых элементов, происходящих из неопределенных или непроверенных источников. Может требоваться добавление подходящих и безопасных антибиотиков в культурную среду во избежание пролиферации оппортунистических бактерий.

Принятие санитарных мер и использование надлежащих методов дезинфекции чрезвычайно важно и должно соблюдаться во всех лабораториях, занимаюшихся оплодотворением in vitro. Следует добиваться правильного обращения с эмбрионами и соблюдения санитарных протоколов в процессе их созревания и посадки на маточную культуру.

2.Донорские клетки Для снижения рисков соблюдают следующие требования:

–Донорские клетки отбирают у животного полагающимся порядком и ставят на культуру в надлежащих санитарных условиях согласно «хорошим лабораторным практикам».

–В случае необходимости пересадка клеток, используемых для клонирования, должна документироваться, помимо чего на разных этапах процесса может требоваться отбор образцов на предмет присутствия хромосомных элементов клеточных линий. По возможности должна существовать процедура регулярного отбора клеток для определения морфологических или других характеристик.

–Линии стволовых клеток (предназначенные для клонирования на последующих этапах) должны сохраняться в оптимальных условиях, позволяющих поддерживать их жизнеспособность. Отсутствие внешних агентов доказывают путем исследования на бактерии, грибы, микоплазмы и вирусы, для чего используют принятые тесты (см. Руководство Международного общества пересадки эмбрионов).

3.Техники клонирования или реконструкции

Методику клонирования, требующую обращения к химическим веществам или другим реактивам, следует прописывать с особой тщательностью в том, что касается качества эмбрионов и общей эффективности.

Кодекс здоровья наземных животных МЭБ 2010 г. 171