Бактериологический метод. Питательные среды. Методы стерилизации и дезинфекции. План лекции

1. Бактериологический метод и его основа

2. Понятия "чистой культуры", "штамма", "колонии"

3. Требования, предъявляемые к питательным средам

4. Основные компоненты питательных сред

5. Классификация питательных сред

5.1. По происхождению

5.2. По консистенции

5.3. По целевому назначению

6. Схема проведения бактериологического метода

7. Температура культивирования

8. Состав газовой среды

9. Культуральные свойства

10. Идентификация бактерий (биохимическая, серологическая, фагоидентификация, генетическая)

11. Методы дезинфекции и стерилизации

11.1. Физические

11.1.1. Пастеризация

11.1.2. Стерилизация сухим жаром

11.1.3. Автоклавирование

11.1.4. Высушивание

11.1.5. Излучение

11.1.6. Осмотическое давление

11.1.7. Фильтрация

11.2. Химические

Бактерии в ходе эволюции освоили различные экологические ниши и приспособились к соответствующим источникам неорганических и органических веществ, наличию кислорода, температуре и другим факторам окружающей среды. Создание условий подходящих для выращивания (культивирования) микробов, необходимо для изучения их свойств в лабораторных условиях. Культивирование бактерий и изучение их свойств (морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, антигенных, токсинообразования, чувствительности к фагам и антибактериальным химиопрепаратам) лежит в основе бактериологического метода.

Чистой культурой называется популяция бактерий одного вида или одной разновидности выращенная на питательной среде. Многие бактерии подразделяют по одному признаку на биологические варианты – биовары. Биовары, различающиеся по биохимическим свойствам, называют хемоварами, по антигенным свойствам – сероварами, по чувствительности к фагам – фаговарами. Культуры микроорганизмов одного и того же вида или биовара, выделенные из различных источников либо в разное время из одного и того же источника, называют штаммами, которые обычно обозначают номерами или символами. Колония представляет собой видимое изолированное сообщество микроорганизмов одного вида, образующееся в результате размножения одной бактериальной клетки на плотной питательной среде.

Для культивирования бактерий в лабораторных или промышленных условиях используют питательные среды. Любая питательная среда должна отвечать следующим требованиям:

1. Требования к составу питательной среды – содержать все необходимые для роста и размножения бактерий вещества в легкоусвояемой форме;

2. Требования к физико-химическому состоянию – рН, влажность, осмолярность и др.

Основные компоненты питательных сред

Для построения органических компонентов микробной клетки необходимы азот, углерод, водород и кислород. Снабжение водородом и кислородом осуществляется за счет воды. В качестве источника углерода гетеротрофные микроорганизмы используют органические соединения (сахара, многоатомные спирты, органические кислоты). Источником азота могут служить неорганические соединения (соли аммония), а также олигопептиды и аминокислоты – продукты гидролиза белков различного происхождения (животного – мяса, рыба, казеин; растительного – соевые бобы, горох; микробного – дрожжи и др.).

Питательные среды должны также содержать и неорганические вещества: соединения хлора, фосфора, серы, натрия, калия, кальция, магния и др.). Минеральные соли необходимы также для создания оптимальных для роста и размножения физико-химических условий (рН, ионная сила и т.д.).

Микробам для нормального развития необходимы микроэлементы, преимущественно металлы (железо, медь, марганец и др.), которые входят в состав простетических групп молекул различных ферментов.

Кроме основных компонентов питательной среды, для жизнедеятельности ауксотрофных микроорганизмов, к числу которых относятся многие патогенные бактерии, требуется присутствие факторов роста – органических соединений, входящих в состав микробной клетки, но не синтезируемых ею самостоятельно. В качестве факторов роста могут выступать различные аминокислоты, азотистые основания, витамины и др. Большинство бактерий нуждается в таких факторах роста, как витамины группы В и никотиновая кислота. Для роста некоторых патогенных бактерий в питательные среды надо добавлять нативные белки (кровь, сыворотку).

Для жизнедеятельности микробной клетки, безусловно, необходима вода как основной растворитель и среда для протекания всех биохимических реакций.