- •Введение
- •Хроматография. Общая информация
- •Тонкослойная хроматография. Достоинства и недостатки
- •Достоинства метода тонкослойной хроматографии
- •Недостатки метода тонкослойной хроматографии
- •Тсх и вэжх – конкуренты или соратники?
- •Эффективность разделения.
- •Количественное определение.
- •Качественный анализ
- •Хроматографическая подвижность веществ
- •Общие теоретические закономерности
- •Влияиние стркуктуры вещества на его хроматографические свойства
- •Техника тсх
- •Основные “участники” хроматографического процесса
- •Подложка
- •Сорбент
- •Растворители в тсх
- •Камеры для тсх
- •Методы нанесения пробы анализируемого вещества на пластинку
- •Методы проявления
- •Практика тсх
- •Формирование тонкого слоя
- •Незакрепленный слой и его особенности
- •Техника нанесения
- •Нанесение образца
- •Особенности качественного и количественного тсх-анализа
- •Качественный анализ
- •Количественный анализ
- •Ошибки и проблемы в тонкослойной хроматографии
- •“Ложно-отрицательные” ошибки в тсх
- •“Ложно-положительные” ошибки в тсх
- •Ошибки, связанные с каталитическими свойствами сорбентов
- •Тезаурус
- •Где об этом прочитать
- •Предметный указатель Список рекомендуемой литературы Справочные материалы
Особенности качественного и количественного тсх-анализа
Качественный анализ
В области качественного анализа ТСХ отвечает на вопросы:
представляет ли собой данный образец индивидуальное вещество или смесь разных веществ;
идентично ли анализируемое вещество имеющемуся образцу.
При получении на хроматограмме образца нескольких пятен вывод о наличии примесей в основном веществе является однозначным (следует методом двумерной ТСХ убедиться, что вещество не претерпевает химических превращений в процессе анализа). Наличие единственного пятна на хроматограмме не является однозначным результатом – не исключено наличие двух или более веществ с одинаковыми значениями Rfв выбранных условиях. Поэтому принято считать, что чистым является вещество, на хроматограммах которого присутствует единственное пятно при использовании не менее трех различных сочетаний сорбент-элюент. Следует обращать внимание на форму пятна. Чем больше форма пятна анализируемого объекта отличается от формы пятна нанесения, тем ниже достоверность вывода о чистоте вещества. Указанием на неэффективность разделения вещества и примеси при наличии единственного пятна служит вытянутая вдоль направления элюции форма пятна и его “гантелеобразная” форма, “шапочки” на основных пятнах и градиент окраски пятна вдоль направления элюции. Исключением в этом случае являются “кометообразные” пятна, образование которых является следствием высокой сорбции анализируемого вещества на высокоаффинных центрах (например, при хроматографировании оснований на силикагеле в некислых средах). Вытянутые вдоль “веретенообразные” пятна симметричные по обеим осям без градиента окраски не следует рассматривать как указание на загрязненность вещества – такая форма характерна для средних и слабых оснований и кислот при использовании кислых или основных элюентов, соответственно.
Аналогично, анализируемое вещество можно считать идентичным образцу в том случае, если при использовании не менее трех сочетаний элюент-сорбент значения Rfи цвет пятен анализируемого вещества и образца совпадают с ошибкой, не превышающей общую ошибку эксперимента.
Анализ сложных смесей может оказаться затруднительным из-за большого количества пятен и недостаточной разрешающей способности. В этом случае проблема может быть решена двумерной хроматографией с применением разных элюентов. При элюции в одном направлении, как правило образуются зоны, содержащие смеси близких по своствам веществ, при элюции во втором – разделение внутри каждой группы. Если не удается одним элюентом разделить все группы на составляющие, хроматограмму можно разрезать на отдельные полоски и каждую из них элюировать во втором направлении, применяя отдельно подобранные элюенты.
Рисунок |
1.8 |
– Пример двумерной ТСХ смеси 1 мкг ДНФ-производных амино- |
кислот (13 13 см). Первое направление – элюирование толуольной смесью (см. текст); второе направление – элюирование смесью хлороформ–метанол–уксусная кислота (95 : 5 : 1). Выделенные соединения: ОН – 2,4-динитрофенол; Ди – ди-ДНФ-производные; NH2 — 2,4-динитроани-лин; AM – а-аминомасляная кислота; АК –-аминокаприловая кислота; Ала – аланин; Асп – аспарагиковая кислота; (Цис2 – цистин; Глу – глутаминовая кислота; Гли – глицин; Гис – гистидин; Илей – изолейцин; Лей – лейцин; Илей – норлейцин; Лиз – лизин; Мет – метионин; Мет-О2 – метионинсульфон; Орн – орнитин; Фен – фенилаланин; Про – пролин; Сар – саркозин; Сер – серии; Тр – треонин; Три – триптофан; Тир – тирозин; Вал – валин; Нвал – норвалин (Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография: В 2-х т. Т. 1: Пер. с англ. – М.: Мир, 1981. – 617 с., рисунок со стр. 497).