- •Методы исследования
- •Методы исследования в микробиологии
- •Список сокращений
- •Техника безопасности при работе с биологическим материалом
- •Характеристика уровней биобезопасности
- •Забор, хранение и транспортировка материала для микробиологического исследования
- •Микроскопический (бактериоскопический)
- •Сложные методы окраски клеточных структур бактерий
- •Сравнение электронного и светового микроскопов
- •4 Этап бсми. Заключение.
- •Культивирование микроорганизмов на питательных средах
- •Классификации питательных сред
- •I. По происхождению:
- •II. По составу:
- •III. По консистенции:
- •IV. По назначению:
- •Наиболее часто используемые индикаторы рН в питательных средах
- •Признаки колоний микроорганизмов
- •Методы выделения чистых культур аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов
- •I. Методы механического разобщения бактерий.
- •Методы выделения чистых культур облигатно-анаэробных микроорганизмов
- •Культуральный (бактериологический) метод исследования
- •I. Этапы блми при выделении чистой культуры аэробов и факультативных анаэробов.
- •1 Этап.
- •2 Этап.
- •3 Этап.
- •Признаки, учитываемые при идентификации микроорганизмов (критерии вида)
- •4 Этап.
- •II. Этапы блми при выделении чистой культуры облигатных анаэробов.
- •1 Этап.
- •2 Этап.
- •1 2 3 5 4
- •1 2
- •6 3
- •5 4
- •Биохимическая идентификация микроорганизмов
- •Определение биохимических свойств микроорганизмов
- •Идентификация микроорганизмов без выделения чистой культуры
- •Принципы молекулярно-генетического анализа
- •Классификация молекулярно-генетических методов
- •Примеры некоторых рестриктаз и их рестрикционных сайтов
- •Методы, основанные на гибридизации нуклеиновых кислот.
- •III. Методы, основанные на амплификации нуклеиновых кислот.
- •Характеристика стадий пцр
- •Анализ результатов пцр
- •IV. Методы анализа амплифицированных фрагментов.
- •V. Методы, основанные на определении последовательности нуклеотидов в днк, рнк и аминокислот в белках.
- •VI. Методы, основанные на модификации генетической информации.
- •Характеристика штаммов e. Сoli, участсвующих в процессе конъюгации
- •Определение факторов патогенности бактерий
- •5. Капсула.
- •7. Изучение неизвестных токсинов и других факторов патогенности микроорганизмов, механизмы действия которых недостаточно изучены.
- •Методы изучения чувствительности бактерий к антибиотикам
- •Классификация методов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
- •Основные понятия
- •Дискодиффузионный метод
- •Пропорционален антибиотикочувствитель-ности микроорганизма
- •Метод разведений в агаре
- •Метод разведений в жидких средах
- •Е-тест (эпсилометрический метод)
- •Ускоренный метод
- •Автоматизированнный метод с использованием автоматических микробиологических анализаторов
- •Генетические методы
- •Некоторые резистентные формы микроорганизмов, получающие эпидемическое распространение.
- •1 Этап эсми. Взятие и обработка материала.
- •2 Этап эсми. Выбор и заражение лабораторного животного.
- •3 Этап эсми.
- •Общие принципы серологического метода исследования
- •I. Достоинства слми:
- •II. Недостатки слми:
- •Общие принципы аллергологического метода исследования
- •I этап алми. Сбор аллергологического анамнеза с целью:
- •II. Недостатки алми:
- •Литература
- •Электронные источники научной информации
- •Оглавление
Сравнение электронного и светового микроскопов
Параметр |
Электронный микроскоп |
Световой микроскоп |
Источник излучения |
электроны |
свет |
Длина волны |
0,005 нм |
400-700 нм |
Максимальное полезное увеличение |
х2500 |
х1500
|
Максимальное разрешение |
0,2 нм |
200 нм |
Линзы |
электромагниты |
стеклянные |
Объект |
не живой, обезвоженный, маленький или тонкий |
живой или неживой |
Красители |
содержат цветные металлы, которые отражают электроны |
цветные |
Рис. 11.Электронный микроскоп
Рис. 12.Схема электронного микроскопа
Принцип ЭМ. В качестве источника электронных лучей применяют электронную пушку, основой которой служит вольфрамовая нить, нагретая электрическим током (рис. 12). Электронные лучи обладают малой длиной волны. Прохождение электронных лучей в вакууме через электромагнитные поля, создаваемые электромагнитными линзами, концентрирует и направляет электронный поток. Это обеспечивает резкое повышение разрешающей способности электронного микроскопа до 0,2 нм и увеличение до 109.
В трансмиссионных (просвечивающих) электронных микроскопах электроны проходят через образец, затем собираются и фокусируются электромагнитными линзами. Электроны невидимы для глаза, поэтому они направляются на флюоресцентный экран, который воспроизводит видимое плоскостное изображение, или на фотоплёнку, чтобы получить постоянный снимок (электронную микрофотографию).
Проходя через объект, части которого имеют различную толщину, электроны больше или меньше задерживаются, а объект приобретает контрастность. Создаёт изображение только та часть электронов, которая проходит через объект и попадает на экран микроскопа. Участки клеток, слабо рассеивающие электроны, выглядят на экране светлыми, а участки, сильно рассеивающие электроны, – тёмными (рис. 13).
В сканирующих электронных микроскопах пучок электронов фокусируется в тонком зонде и им сканируют образец, а отраженные от поверхности образца электроны собираются и формируют на экране объемное изображение (рис. 14-17). При сканирующей электронной микроскопии изучают поверхность различных объектов, напыляя на них в вакуумной камере электронно-плотные вещества, и исследуют реплики, повторяющие контуры образца.
Рис.13.ВИЧ в трансмиссионном электронном микроскопе
Рис. 14.ВИЧ в сканирующем электронном микроскопе
Рис. 15.Trichomonas vaginalisв сканирующем электронном микроскопе
Рис. 16. Staphylococcus aureus в сканирующем электронном микроскопе
Рис. 17.Макрофаги и фагоцитируемые ими
E. coli в сканирующем электронном микроскопе
Преимущества электронной микроскопии:
высокая разрешающая способность электронного микроскопа позволяет наблюдать объекты, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности светового микроскопа. Поэтому ЭМ применяется для изучения ультраструктур микроорганизмов и макромолекулярных структур;
сочетание ЭМ с другими методами позволяет проводить электронно-радиоавтографические, электронно-гистохимические, электронно-иммунологические исследования. ЭМ нашла широкое применение в морфологии, микробиологии, вирусологии, иммунологии, генетике, биохимии, онкологии.