Лабораторная работа №2. Получение казеина из молока. Метод формольного титрования. Материал, реактивы, оборудование.

1. Молоко свежее.

2. Казеин в порошке.

3. 10%-ный раствор уксусной кислоты.

4. Реактивы для цветных реакций.

5. 5%-ный раствор едкого натра.

6. Концентрированная азотная кислота.

7. Молибденовый реактив.

8. Лакмус красный.

9. Пробирки обыкновенные.

10. Колбы с воздушным холодильником.

11. Водяная баня.

12. Воронки диаметром 3-5см.

13. Стеклянные палочки.

14. Пипетки.

15. Фильтры бумажные.

16. Весы технические.

а) Выделение казеина молока.

К 2 мл молока добавляют 2 мл дистиллированной воды и 2 капли 10%-ной уксусной кислоты. Выпавший осадок казеина отфильтровывают и 2-3 раза промывают дистиллированной водой. После чего осадок снимают с фильтра стеклянной палочкой, помещают в пробирки.

Для доказательства белковой природы казеина с осадком поделывают цветные реакции на белок: биуретовую, Милона и Фоля.

б) Гидролиз казеина и открытие в гидролизате фосфорной кислоты.

Техника определения.

100 мг казеина растворяют в 8 мл 5%-ного раствора едкого натра, закрывают колбу пробкой с воздушным холодильником и кипятят на водяной бане в течение часа на слабом огне . После окончания гидролиза жидкость охлаждают и нейтрализуют концентрированной азотной кислотой, добавляя её по капля до слабокислой реакции на лакмус. При этом выпадает осадок пентонов (продукты неполного гидролиза белка), который отфильтровывают или отделяют центрифугированием.

Наличие фосфорной кислоты в фильтрате определяют по реакции с молибденовым реактивом: выпадает осадок жёлтого цвета, обусловленный образованием фосфорномолибденовокислого аммония.

Лабораторная работа №4. Определение содержания белков колометрическими методами. Материал, реактивы, оборудование.

1. Пшеница, горох, солод, клубни картофеля.

2. 0,1 н. HCl.

3. ТХУ – 10%-ный раствор.

4. 0,35%-ный раствор соды.

5. Реактивы для определения белка по Лоури.

Работа проводится в несколько этапов:

1. Зерно и солод измельчают на лабораторной мельничке, клубни картофеля измельчают на тёрке и отжимают сок.

2. Экстракцию белков из зернового сырья осуществляют водой или раствором соды.

10 г измельчённого материала экстрагируют 150 см³ выбранного экстрагента при интенсивном перемешивании на мешалке в течение 3 минут. Растворённые белки отделяют от осадка центрифугированием. Надосадочную жидкость используют в опытах по осаждению белков.

1. Осаждение белков раствором тху.

В пробирки вносят растворы в количествах, указанных в табл. 1.2.

Таблица 1.2

№ п/п	Раствор белка, см3	H2O, см3	ТХУ, см3	Кратность разведения исходного раствора	Показание ФЭКа	Содержание белка, мг/см3
						в надосадочной жидкости	в осадке
1	5	5	0				0
2	5	4	1
3	5	3	2
4	5	2	3
5	5	0	5

Содержимое пробирок встряхивают и оставляют на некоторое время для формирования осадка.Если осадок не формируется, пробирки прогревают в воде с температурой 30-40⁰С.

В надосадочной жидкости после фильтрации определяют содержание белка по методу Лоури. При необходимости испытуемый раствор разводят в 2 или 4 раза.

Полученные результаты вносят в табл. 1 и по ним строят график осаждения белка нарастающими концентрациями ТХУ. Определяют концентрацию ТХУ, достаточную для максимального осаждения белков.