Раздел 1. Определение чувствительности животных к инсулину

Вновь поступивших животных содержат в карантинном помещении на стандартном рационе вивария (кроликов – не менее 20 дней, мышей – не менее 10 дней по 15 шт. в клетке). Затем проводят определение чувствительности животных к инсулину.

Методика определения чувствительности кроликов к инсулину

За 18–20 часов до эксперимента животных лишают корма.

Перед экспериментом готовят рабочий раствор СО инсулина с концентрацией 2,5 МЕ/мл путем разведения основного раствора СО, содержащего 100 МЕ/мл. В качестве растворителя используют раствор № 2 (примечание 3 к общей части).

Кроликам подкожно в холку вводят рабочий раствор СО в объеме 0,2 мл/кг. Взятие крови из краевой вены уха проводят трижды: непосредственно перед введением раствора СО и через 1 и 2,5 часа после инъекции. Около 50 мкл крови собирают в центрифужную пробирку объемом 0,5 мл, содержащую 10 мкл раствора гепарина (5000 МЕ/мл).

У каждого животного определяют среднюю величину, на которую снижается концентрация глюкозы в крови через 1 и 2,5 часа после введения рабочего раствора СО инсулина, и выражают ее в процентах по отношению к исходной.

Из дальнейших опытов исключают животных, которые отвечают судорогами на введение инсулина и тех, у которых снижение концентрации глюкозы в крови составляет менее 15 % по отношению к исходному уровню.

Кроликов можно использовать для биологических испытаний не ранее, чем через 4 недели после определения их чувствительности к инсулину.

Методика определения чувствительности мышей к инсулину

До и во время опыта животным должен быть обеспечен свободный доступ к корму и воде. В опыт берут не менее 40 мышей с отклонением массы тела не более 1,0 г. Мышей распределяют на 4 равные группы способом случайного отбора и метят по порядку каждую особь внутри группы. Животным первой, второй и третьей группы через каждые 15 секунд подкожно в холку вводят рабочие растворы СО, приготовленные из основного раствора СО, в объеме 0,1 мл/10 г массы тела животного. Рекомендуются следующие концентрации рабочих растворов, которые готовят непосредственно перед экспериментом: 0,06; 0,15; 0,35 МЕ/мл соответственно. Временной интервал между введением каждого рабочего раствора должен составлять не менее двух минут. Четвертой (контрольной) группе вводят раствор № 2 (примечание 3 к общей части) в том же объеме и по той же схеме, что и опытным животным.

Взятие крови (около 50 мкл) проводят из орбитального венозного синуса с помощью стерильного гепаринизированного капилляра через (40  1) мин после инъекции инсулина в соответствии с номером каждого животного внутри группы, соблюдая те же временные интервалы, что и при введении растворов. Пробы крови помещают в центрифужные пробирки объемом 0,5 мл.

Если разность между средней концентрацией глюкозы в крови животных контрольной группы и средней концентрацией глюкозы в крови мышей одной из трех групп, получивших рабочий раствор СО, статистически значима (р<0,05), то данную дозу инсулина принимают в качестве малой дозы для СО и ИП при определении биологической активности. Большая доза рабочих растворов СО и ИП должна превышать малую не менее чем в 3 раза.