Биологические методы контроля

31. Биологические испытания инсулина

(ОФС 42-0126-09)

Настоящая статья распространяется на стандартные образцы, субстанции и лекарственные формы инсулина, а также его аналоги^*).

Методы определения биологических показателей основаны на сопоставлении гипогликемического (сахаропонижающего) действия испытуемого препарата (ИП) с гипогликемическим действием стандартного образца инсулина, или соответствующих стандартных образцов его аналогов. Биологические методы используют для определения следующих показателей качества:

1. Биологическая активность;

2. Биоидентичность;

3. Пролонгированное действие;

4. Инсулин в растворе.

Общая часть

Биологическая активность инсулина и его аналогов отражает их терапевтическое действие. Контроль этих лекарственных средств по показателю «Биологическая активность» является обязательным при аттестации стандартных образцов инсулина различной видовой специфичности, при отработке новых технологий производства, на режиме предварительного и выборочного контроля, при оценке качества и проверке стабильности лекарственных форм в процессе установления срока годности (раздел 2).

Показатель «Биоидентичность» является полуколичественным и используется для контроля подлинности лекарственных препаратов инсулина. Его проводят также в случае невозможности определения биологической активности аналогов инсулина ввиду их физико-химических свойств и/или особенностей терапевтического действия (раздел 3).

* ) В дальнейшем, для удобства, субстанции и лекарственные формы инсулина, а также его аналоги будут называться «испытуемый препарат»

«Пролонгированное действие» – показатель качества лекарственных препаратов инсулина удлиненного действия, который характеризует их гипогликемический эффект во времени. Данный показатель является обязательным для всех лекарственных препаратов инсулина удлиненного действия (раздел 4).

Стандартный образец (СО) инсулина для биологических испытаний представляет собой субстанцию инсулина человека (активность не менее 27,5 МЕ/мг в пересчете на сухое вещество), инсулина свиного или инсулина крупного рогатого скота (активность не менее 26 МЕ/мг в пересчете на сухое вещество), аттестованную в качестве государственного стандартного образца (ГСО) или Международный стандарт инсулина соответствующей видовой специфичности. Аттестацию СО проводят путем сравнения с Международным стандартом инсулина соответствующей видовой специфичности с последующим утверждением результатов Компетентным органом в установленном порядке.

Для проведения биологических испытаний используют животных одного пола: кроликов массой тела 2,2–3,5 кг или мышей массой тела 20–30 г, предварительно определив их чувствительность к инсулину для повышения точности и достоверности результатов (раздел 1).

Повторные биологические испытания на кроликах следует проводить не ранее, чем через 4 недели, а на мышах – не ранее, чем через 7 дней после окончания предыдущего испытания. При сохранении чувствительности животных к инсулину, кроликов можно использовать в течение 6 месяцев, а мышей – в течение 4 месяцев после первого испытания.

Определение концентрации глюкозы в крови животных проводят в соответствии с разделом 6.

Примечания

1. Приготовление основного раствора СО. Для проведения биологических испытаний готовят основной раствор СО инсулина соответствующей видовой специфичности. Точную навеску СО растворяют в растворе консерванта до концентрации 100 МЕ/мл (раствор №1). Раствор консерванта (рН 2,5–3,5) представляет собой 0,03 М раствор хлористоводородной кислоты, содержащий 1,6–1,8 % глицерина и 0,25–0,30 % фенола или м-крезола.

Срок годности основного раствора СО – 4 месяца при температуре хранения от 2 до 8 С. Замораживание не допускается.

2. При определении биологической активности субстанции инсулина основной раствор ИП готовят таким же образом, что и основной раствор СО.

3. Приготовление рабочих растворов СО и ИП. Для приготовления рабочих растворов СО и ИП в качестве растворителя используют раствор № 2 (0,1 М раствор хлористоводородной кислоты, разведенный в 3 раза 0,9 % раствором натрия хлорида).

4. При определении биологической активности лекарственных препаратов инсулина пролонгированного действия, представляющих собой суспензии, ИП осторожно взбалтывают и отбирают 1,0 мл, к которому добавляют 0,2 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты для полного растворения суспензии. Таким образом, если исходная концентрация ИП равна 100 МЕ/мл, то полученный раствор ИП будет иметь концентрацию 83,3 МЕ/мл, а при исходной концентрации ИП 40 МЕ/мл – 33,3 МЕ/мл. В дальнейшем эти растворы используют для приготовления рабочих растворов ИП.

5. Для введения растворов применяют одноразовые шприцы соответствующего объема. В случае использования стеклянных шприцев, проводят их стерилизацию.