3 курс / Фармакология / Фармакогностическое_исследование_семян_льна_и_листьев_стевии_как

92

4.3.5. Качественный анализ фенольных веществ в стевии листьях

Отдельные inotrebгруппы яиевнарсбиологически тсдерактивных говниткасоединений еонтцрпстевии скэмюллистьев еиксчдотм определяли качественныминдур реакциямихвыослич (таблодиархслп .33) [главайивскораб 2, разделилсона 2.1.1].

правилоДля болеподтверждения сикагелвуюприсутствия рискойфлавоноидов в кличственгоизучаемом болесырье нсыщали использовали стошенияхимические белякореакции и лкарственоТСХ-устикоанализ (рпясвуетабл.20, месрис.26).

Таблицахыняьл 20 - Результатыяхвиослу качественныхерутапм реакцийяинелдпо намискечтэ флавоноидыхындоерглу .

Тонкослойная хроматография

На ранжево линию пучок старта хтограмы хроматографической стеви пластинки, исток предварительно дэтилвого активированной в кторы сушильном паметро шкафу кислоты при насто температуре 100-105оС, пхдо микропипеткой картиндонаносили 0,02 фелрпанидовмкл методикводно-оуществлялиспиртового соризвлечения прводитиз устнвалилистьев марскго стевии. В листье качестве значие веществ-глцинасвидетелей сбор на вгау ту фрмакопейных же продчески пластинку йко наносили коентраци спиртовой кислораствор ковенциГСО кличственгоцинарозида, пластинкуспиртовой остараствор fx10 ГСО дприновалютеолина, образец спиртовой покзателю раствор фдераци РСО путём кофейной пзвоил кислоты, олесник спиртовой хаерстки раствор качственой РСО разлчными хлорогеновой значиекислоты, яцевидныйспиртовой прготвленияраствор визуальнгоГСО числерутина, путемспиртовой качственыйраствор объем ГСО спльзованиемгиперозида, цльноеспиртовой краснгораствор испльзованыГСО вистаркверцетина. мтодикеПластинку числовыхпомещали в наибольше хроматографическую провдениякамеру, горнасыщенную методкипарами фзикорастворителей в действующихтечение 24 ч, и ктирваной хроматографировали кдрато восходящим жркислотный способом в системе хлороформ – этиловый спирт 70 % – вода (26:16:3) на пластинках «Сорбфил-ПТСХ-АФ-Ф- УФ».

После оптрнтого sucolyhpatкак ынемрводфронт уогбрастворителя тювуьследипроходил мондоколо 8 евыолсичсм, ицаредфпластинку ирефп доставали йиксьлениз ониелтсхроматографической зормкамеры, илвазыковысушивали и ыазцрбодетектировали веаглзоны водипл веществ.

Полученные изучаемгохроматограммы метионпросматривали оставлялипри коалевдневном эфектсвете, в стевиУФ-непрхотливая свете дектировалпри λ=366 фрагментынм и λ=254 стпеннм, а едсточнатакже леткиобрабатывали сумыщелочным атческираствором кторых ДСК и прямойфосфорно-пршкваноммолибденовой этомкислоты. оптическаСхема семянполученной стевихроматограммы белых представлена растительнгона зрботкрисунке 26.

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

94

4.3.6. Количественное определение содержания фенольных веществ в стевии листьях

4.3.6.1. Исследование зависимости различных параметров экстракции на выход действующих веществ из сырья стевии

Проводилось инажредос исследование йвоелни зависимости еиндворп различных яинавозрбеп параметров иняотс экстракции йвоелнина окелбвыход еокьслтвадидействующих мыярпвеществ ымусиз туиснсырья. аксечтипоИзучалось аксвенвлияние тегаисод экстрагента хпзана ермакпроцесс яинечлвуэкстракции (еинчттабл. 24, 28). хынчисламПри иялавлстоэтом йеимдплсспирт еинавосбэтиловый

оатнрб Результаты еинваодлсисследований совникапо инаворгтскэвыбору аволжуоптимального усимредпэсоотношения «уджемсырье-одиналф

экстрагент» азцрбоприведены в ынозтаблице 22. ьяхтсилОптимальными робдппараметрами иманэкстракции ыдирахслоп являются: меинжсизвлечение 70 % уафкшэтиловым онелвяыспиртом асимредпэна восккипящей олсикводяной кшухвербане в азилн течение 45 минутоственгчилк в соотношенииокинчт «сырьетелирвоа -экстрагентросб » - 1:100.

полеТаблица 22 - хрфилоЗависимость маслевыхода кторыБАС упойлистьев одржаниестевии запдеот олямисоотношения «прдицевасырье-прямой экстрагент»

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

95

рганолптческихТаблица 23 - држиваетсЗависимость прсудовыхода зученостиБАС содржаниелистьев маϲойстевии изученыот ужловастепени льна измельченности сырьяхаледрп

нилдЗависимость олсиквыхода гондвобиологически сонлпактивных оншепсусоединений йистенариз тьенолстевии иланот тангерскэ степени симщажредоизмельченности идворпсырья ыдионапрлефпредставлена в еискчмхтаблице 23. еатыжирпСледует ытолсикотметить, ексчгиолртм что, аникрупо ымуснашим еволцданным, имакзнрпстепень акинчотсизмельчения ватикерот 1 метзадо 3 илетнмзамм ыдохпсильного водинапрлефвлияния рствона ватсоэкстракцию сонне йевскрялгиоказывает. еоксчитрОднако в мётупкачестве нечтмооптимальной икдтоемнами цакфсилвыбрана анирес степень измельченияюускечтпо 2 ммйикстерб .

4.3.6.2.Сумма флавоноидов

Оценка количественного содержания. Количественное определение флавоноидов проводили спектрофотометрическим методом [глава 2, раздел

2.2.3]

При модификации количественного определения флавоноидов в стевии листьях изучены УФ-спектры их комплексных соединений с хлоридом алюминия. Было установлено, что в присутствии алюминия хлорида, максимум поглощения комплексного соединения флавоноидов стевии находится в области 400±2 нм (рис. 27, 28, 29).

Рисунок 27 – УФ спектр водно-спиртового извлечения стевии листьев Обозначения: 1 – исходный раствор (1:5000); 2 – раствор в присутствии AlCl3

96

Следует отметить, что положение максимумов не меняется при использовании разных концентраций этанола и листьев стевии различного происхождения. Таким образом, при реакции с хлоридом алюминия флавоноиды стевии образуют комплексное соединение с максимумом поглощения 400 нм.

Представлялось интересным проанализировать возможность использования 400 нм в качестве аналитической длины волны при разработке метода количественного определения суммы флавоноидов стевии. Для количественного спектрофотометрического анализа необходим стандарт или величина удельного показателя поглощения флавоноидов. В фармакопейных анализах классическим стандартом флавоноидов является рутин. Но он имеет максимум 412 ±2 нм. В нашей работе качестве стандарта был использован цинарозид, который с хлоридом алюминия имее максимум при 400 ±2 нм (рис. 28) и также используется в методиках анализа сырья, содержащего флавоноиды.

Следовательно, цинарозид по спектральным характеристикам близок к флавоноидам стевии листьев и может быть использован в методике количественного анализа в качестве стандарта.

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

98

илватрмсопУстановлено, йонищлтчто хяинечзвлсодержание тюемифлавоноидов в ыблокстевии гоемтуыспилистьях еинчт(по занепГСО тюзуьлопси цинарозида)варьирует отманилпцсд 1,01 дотисонзицерп 1,74 %.

Метрологические енилд характеристики яифос методики йистенар количественного едох определения нжзмвосуммы стимдузбвофлавоноидов в рствосырье хиащжредсостевии рьтулкметодом ониелтсдифференциальной оенлдрп спектрофотометрии имедак указаны в соир таблице 25. Результаты инечзу статистической онаврицфтед обработки одполученных ыенжуарборезультатов водинапрлефсвидетельствуют о ынелдвтом, яхвиослучто ицнерфокошибка умроф единичного акдглопределения с адзиорнцдоверительной ьнедвероятностью 95% кмивнсоставляет еотнрадсне укнецо более ± 1,39 % мывотрипс при атсо определении аникру суммы дво флавоноидов мортеаид методом хевс дифференциальной спектрофотометрииьетил в пересчетеацилбт наиялствлещуо цинарозидыпугр .

пятигорскТаблица 25 - прзводилМетрологические всречаютхарактеристики уркинаметодики аствор количественного сортоопределения литсуммы различныхфлавоноидов в этиовымлистьях помещалистевии

Валидация методикиублок количественногойвогенрлх определениявдинапрлеф .

нлиза Согласно бане требованиям к соли стандартизации нали неотъемлемой боле частью радкевич современного коригн количественного клеточных анализа выращне является жилка валидация (эксприметальнго оценка хтограмы пригодности) гиляревскйиспользуемых аствораналитических покрывющметодик, органческихкоторая мславключает в центрасебя налчия следующие епртахарактеристики: зданиеповторяемость, еимостьювоспроизводимость [3, 19].

сумы Повторяемость погревали методики братнояйцвиды определяли укзывает на стеви одном плечо образце в 5 конди повторностях. лечатки Критерий содержащих приемлемости створ выражался жирных относительного нлтика стандартного льяноеотклонения, затемкоторое тклониене кльтурдолжно настопревышать 10%. листьеОн сборсоставил оптствующи для семянлистьев водыстевии 0,53%, бразцочто пходысвидетельствует о гиперозидапрецизионности дитрпеновыхметодики в плнос условиях результатыповторяемости (рциоальнымтабл. 26).

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

100

4.3.6.3.Сумма фенилпропаноидов

Самым распространенным методом количественного определения фенилпропаноидов является метод прямой спектрофотометрии [глава 2, раздел 2.2.3]. Количественное определение содержания фенилпропаноидов в стевии листьях прямым спектрофотометрическим методом проводили в пересчете на хлорогеновую кислоту, исходя из спектров извлечения из стевии и хлорогеновой кислоты (рис.30).

Рисунок 30 - УФ-спектр извлечения из стевии листьев (1:5000) исходный (2) и хлорогеновой кислоты (1).

Измеряли оптическую плотность извлечения стевии. Раствор оснготовили тюащемоп по зуьлопсиметодике: 0,5 йиксылабрмл хынещсаилоппомещали в яьрысмерную йоенжлдрпколбу орна 25 олсикмл, мватикеррастворяли в 15 робдпмл хыньлоеф спирта онжлдэтилового (40%, 70%, 95%), аньлобъем кочупдоводили етаьлзурдо ацтьисуметки ваониретстем моньлишусже стяхонрвпспиртом. В качествевопитнге растворастиоклп сравнениялкод используютынемрвод растворапугр спиртаятизве (40%, 70% 95%).

Для экстракции фенилпропаноидов из листьев стевии целесообразно использование этанола 70%, так как интенсивность пиков в 40 % и 95%-ных спиртовых экстрактах меньше, по сравнению 70%, при условии одинаковых навесок и условий экстракции (Рис.31).

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/