3 курс / Фармакология / Диссертация_Гильдеева_Г_Н_Формирование_междисциплинарного_подхода

231

компоненты матрицы, метаболиты, продукты разложения). В том числе образец

гемолизированной и липемической плазмы.

Полученные результаты (таблица 5.1) удовлетворяют критериям приемлемости (Area d-bl/QC0 < 20% для аналита и < 5% для внутреннего

стандарта).

Таблица 5.1 - Определение селективности

5*, 6* - липимическая и гемолизная плазма соответственно

Линейность и чувствительность Определение предела обнаружения

Критерием нижнего предела количественного определения (НПКО)

являлось превышение отношения сигнал/шум в нижних калибровочных точках значения 5. Нижний предел количественного определения проверялся по результатам анализа 6 повторностей нижних калибровочных точек (таблица 5.2).

Линейность

Калибровочная кривая состояла из 10 ненулевых калибровочных стандартов, охватывающих диапазон концентраций 0,1 - 6 мкг/мл для митотана.

Зависимость отношения величин площадей пиков аналита от концентраций калибровочных стандартов была линейной и описывалась уравнением типа

Y=aX+b c коэффициентом корреляции R2 не менее 0,99. Образцы калибровочных кривых представлены на рис. 6.12 – 6.14.

Для оценки воспроизводимости результатов были получены 3

калибровочные кривые и проведен обратный расчет концентраций используемых стандартов по всем кривым и определены статистические данные. В таблицах 5.3-

5.4 представлен обратный расчет концентраций используемых стандартов по всем кривым и определены статистические данные. Воспроизводимость результатов с учетом критерия приемлемости достигается во всем интервале концентраций.

233

Таблица 5.3 - Параметры калибровочных кривых митотана в плазме крови

человека

Таблица 5.4 - Концентрации стандартов, рассчитанные по уравнениям

калибровочных кривых для митотана

Area Ratio

Рис 5.12 - Калибровочная прямая в диапазоне концентраций 0,1-6 мкг/мл для

митотана. Первый аналитический цикл

234

Area Ratio

Рис. 5.13 - Калибровочная прямая в диапазоне концентраций 0,1-6 мкг/мл для

митотана. Второй аналитический цикл

Area Ratio

Рис. 5.14 - Калибровочная прямая в диапазоне концентраций 0,1-6 мкг/мл для

митотана. Третий аналитический цикл

Прецизионность и правильность внутри одной аналитической серии

Прецизионность и правильность метода внутри одной серии оценивались по результатам параллельных анализов образцов контроля качества QC0; QCL; QCM; QCH в составе одной аналитической серии. Каждый образец готовился в 6

повторах. Расчет концентраций образцов контроля качества проводился по калибровочной кривой, полученной в составе той же аналитической серии.

Данные по прецизионности и правильности определения митотана в плазме крови человека внутри одной серии представлены в таблице 5.5 и удовлетворяют критериям приемлемости.

235

Таблица 5.5 - Данные по прецизионности и правильности определения

митотана в плазме крови человека внутри одной аналитической серии

Прецизионность и правильность между аналитическими сериями

Прецизионность и правильность метода между аналитическими сериями оценивались по результатам параллельных анализов образцов контроля качества

QC0; QCL; QCM; QCH, выполненных в трех аналитических сериях. Каждый образец готовился в 6 повторах. Расчет концентраций образцов контроля качества проводился по калибровочной кривой, полученной в составе той же аналитической серии. Данные по прецизионности и правильности определения митотана в плазме крови человека между аналитическими сериями представлены в таблице 5.6 и удовлетворяют критериям приемлемости.

236

Таблица 5.6 - Данные прецизионности и правильности определения Митотана

в плазме крови человека между аналитическими сериями

Стабильность

Для оценки стабильности митотана в плазме крови человека использовали образцы контроля качества QCL и QCH, которые хранили в автосэмплере в течение 72 часов, в течение 6 часов при комнатной температуре, и образцы контроля качества после трёх циклов заморозки и последующей разморозки.

Также перед постановкой аналитических серий оценивалась стабильность сток

237

растворов. Далее проводился анализ образцов вместе со свежеприготовленными образцами в составе одной аналитической серии. Рассчитанные концентрации образцов после хранения сравнивались со средними значениями концентраций свежеприготовленных образцов контроля качества. Результаты представлены в

Разница по полученным результатам не превышает 15%.

Таблица 5.7 - Данные по стабильности митотана после пробоподготовки в

автосэмплере в течение 72 часов

238

Таблица 5.8 - Данные по стабильности митотана в плазме крови при хранении

при комнатной температуре в течение 6 часов

Таблица 5.9 - Данные по стабильности митотана плазме крови после трёх

циклов заморозки и последующей разморозки

240

Для оценки кросс-переноса были сделаны следующие инжекции в хроматографическую систему: 6 повторений последовательности QCH => double_blank => QC0. Перенос пробы в double_blank не должен превышать 20%

НПКО аналита и 5% внутреннего стандарта. На хроматограммах растворителя после инжекций высоких пробы с высокой концентрацией аналита отсутствуют пики аналита и внутреннего стандарта. Полученные результаты удовлетворяют критериям приемлемости (таблицы 5.11- 5.12).

Отклик детектора на аналиты был на уровне шума, что свидетельствует об отсутствии переноса данных веществ при переходе от большей концентрации к меньшей.

Таблица 5.11 - Оценка кросс-переноса митотана

Таблица 5.12 - Оценка кросс-переноса 4-4-ДДТ (IS)

Тест на разбавление

Возможность разбавления образцов, содержащих митотан в концентрациях,

превышающих верхний предел калибровочной кривой, изучалась на модельном образце с концентрацией митотана 8 мкг/мл. После разбавления образца плазмой человека в 2 раза проводилась пробоподготовка и анализ образца. Для