2.4.1.2Среды, пригодные для культивирования s.Pyogenes.

Все вышеперечисленные среды, за исключением сред на декстрозной основе, картофельного агара, так как они являются селективными для S.pneumoniae и подавляют рост S.pyogenes.

• Бульон Б.А.Г.Г. (Забуференный азидо-глюкозо-глицериновый бульон)

• Агар ЦЛНЭ (цистин, лактоза, низкие электорлиты) с индикатором Андреде;

• Колумбийский бульон;

• Агар для определения ДНК-азы;

• Жидкая тиогликолатная среда;

Селективные добавки:

• Селективная добавка №3 для выделения стрептококков (Санкт-Петербург);

• Добавка стрепто (Strepto Supplement FD031);

Таблица 3

Сравнительная характеристика морфологических признаков культуры пневмококка, выделенного на различных средах.

Среда	Время, необходимое для инкубации	Характер роста
Кровяной агар (5-10%) на основе 1,5% питательного агара	До 2 суток	Слабый, альфа-гемолиз заметен, при получении отдельных колоний: небольшие (до 1 мм), круглые, с четкими ровными контурами, сероватые, действие аутолизинов заметить сложно.
Кровяной агар на основе колумбийского агара (5-10%)	1 сутки (рост через 16 часов)	Отличный, альфа-гемолиз выражен меньше, особенно при 10% КА; даже при посеве газоном заметны отдельные колонии размером до 0,5 мм; при получении отдельных колоний- сероватые, полупрозрачные, вытянутой формы, иногда уплощены в середине под действием аутолизинов.
Шоколадный агар на основе 1,5% питательного	Через 1.5 суток	Колонии крупные светло-желтые ,с характерным желто-зеленым ореолом.
Шоколадный агар на основе колумбийского агара	1 сутки (рост через 8 часов)	Крупные колонии, с желто-зеленым ореолом.
Кровяной агар (5-10%) на основе агара Мюллер-Хинтона	1 сутки (рост через 24 часа)	Хорошо выражен альфа-гемолиз; поверхность среды часто коррозируется
Бульон Мюллер-Хинтона	1 сутки (рост через 24 часа)	В прозрачном бульоне заметен облаковидный воздушный рост;
Сахарный бульон 2%	До 1,5 –2-х суток	Ватообразный рост; в зависимости от сероштамма может меняться на крошковидный.

2.4.1.3Среды, пригодные для культивирования h.Influenzae

H.influenzae отличается высокой прихотливостью при культивировании на искусственных питательных средах. Обязательным условием для их роста является наличие в среде X и V факторов.

На КА, приготовленном на основе лошадиной или кроличьей крови, гемофильные палочки могут расти в виде мельчайших точечных колоний. Исключение составляет КА, содержащий нативные бараньи или человеческие эритроциты, в связи с присутствием в них ферментов, инактивирующих V фактор. Поэтому КА не подходит для выделения H.influenzae.

Для улучшения выделения H.influenzae из клинического материала рекомендуется использовать шоколадный агар или селективный агар для гемофил.

Шоколадный агар приготавливается добавлением крови к обогащенной агаровой основе, имеющей температуру около 80^оС, для того чтобы разрушить эритроциты и высвободить Х и V факторы. При этом следует избегать чрезмерного и/или длительного нагревания для предупреждения инактивации термолабильного V фактора. Для улучшения ростовых свойств питательной среды рекомендуется в охлажденный до температуры 45–50^оС шоколадный агар добавлять НАД до получения конечной концентрации 15 мкг/мл .

Коммерческие готовые чашки с шоколадным агаром (bioMerieux, BBL) обычно содержат смесь гемина (Х фактор) и "коктейль" ростовых факторов, добавленных к основе – гонококковому агару .

Гонококковый агар содержит пептон, кукурузный крахмал, моно- и диосновные фосфатные буферы, хлорид натрия и агар. Ростовые факторы включают НАД (V фактор), витамины (В₁, В₁₂), цистеин, глютамин и глюкозу.

Ряд компаний предлагает готовые добавки, содержащие перечисленные ростовые факторы: PolyVitex (bioMerieux), IsoVitalex (BBL) и Supplement B (Difco Laboratories).

Недостатком шоколадного агара является невозможность наблюдать гемолитические свойства гемофил, которые позволяют дифференцировать H.haemolyticus и H.parahaemolyticus от H.influenzae и H.parainfluenzae.

Селективный агар для выделения бактерий рода Haemophilus. Для селективного выделения гемофил из клинического материала НДП могут быть использованы питательные среды, содержащие бацитрацин. Высокая концентрация этого антибиотика подавляет рост большинства других микроорганизмов, являющихся представителями микрофлоры дыхательных путей (стафилококков, микрококков и стрептококков), что позволяет получить рост гемофильной палочки из сильно контаминированного клинического материала. Помимо готовых коммерческих Вместо содержащих антибиотик сред при выделении гемофильной палочки из контаминированного материала (например, мокроты) могут быть использованы коммерческие диски с бацитрацином (10 ЕД). Природно устойчивые к бацитрацину гемофилы будут расти вокруг диска.

Предложена селективная среда для выделения и дифференцирования H.influenzae и H.parainfluenzae (Taylor D.C. и др.). Она состоит из гемин- и НАД-обогащенного сердечно-мозгового агара, сахарозы (10 мг/мл), индикатора – фенолового красного (100 мкг/мл) и бацитрацина (300 мкг/мл). На этой среде колонии H.parainfluenzae имеют желтую окраску в связи с их способностью продуцировать кислоту из сахарозы, а колонии H.influenzae – бесцветные, так как не ферментируют сахарозу. Недостаток данной среды состоит в невозможности наблюдать гемолитические свойства гемофил.

Условия инкубации H.influenzae. Оптимальными условиями инкубации H.influenzae являются влажная атмосфера с повышенным содержанием СО₂ (5–10%) и температура 35–37^оС. Подобные условия могут быть созданы в СО₂-термостате или при инкубации чашек в эксикаторе с зажженной свечой. В результате горения свечи уменьшается концентрация кислорода и повышается уровень СО₂, достигая 3%.