2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Экзаменационные_вопросы_и_ответы_по_микробиологии_Первый_мед_Сеченова

О местном иммунитете речь идёт тогда, когда говорят о механизмах специфической защиты слизистых оболочек и кожи от антигенов. Благодаря селезёнке и регионарным лимфатическим узлам, все органы местного иммунитета объединены в единую функциональную систему (т.н. феномен «иммунной солидарности слизистых» Mucosaassociated lymphoid tissue —

MALT).

Установлено, что введение антигена через одну из слизистых человеческого организма приводит к появлению антител и лимфоцитов во всех слизистых оболочках и коже, а не только в зоне первичного проникновения патогена. Это предотвращает формирование множественных очагов поражения одним и тем же возбудителем и предупреждает повторное заражение идентичным микроорганизмом посредством другого механизма передачи.

Под системным иммунитетом понимают комплексную защиту организма в целом.

4.Различают также стерильный и нестерильный иммунитет.

О стерильном иммунитете говорят тогда, когда в организме поддерживается иммунная память к антигену и осуществляется продукция антител даже после его элиминации из организма. Классический пример – некоторые вирусные инфекции. Нестерильный иммунитет поддерживается только при наличии антигена в организме и исчезает при уничтожении последнего (т.е. не формируется иммунная память).

Нестерильный иммунитет наблюдается практически при всех гельминтозах, большинстве протозойных инвазий, инфекциях, вызванных микобактериями.

5.По сроку поддержания иммунной памяти различают транзиторный, кратковременный, долгосрочный и пожизненный адаптивный иммунитет.

К большинству условно-патогенных микроорганизмов поддерживается транзиторный (преходящий) или кратковременный иммунитет (от нескольких недель до нескольких месяцев), так как такие возбудители не представляют серьёзной опасности для здорового человека.

Долгосрочный (от нескольких лет до нескольких десятилетий) и пожизненный иммунитет формируется в ответ на патогенные возбудители, которые способны вызывать тяжёлые, а порой – и фатальные поражения человеческого организма. Речь, прежде всего, идёт о вирусных инфекциях. Обычно ввиду пожизненного иммунитета иммунологически здоровый человек болеет корью, краснухой, эпидемическим паротитом и ветряной оспой всего один раз в жизни.

По объекту, на который направлена иммунная реакция, различают противоинфекционный, противоинвазивный, противоопухолевый, антитрансплантационный и антитоксический иммунитет. В свою очередь, противоинфекционный иммунитет можно разделить на антибактериальный, противогрибковый и противирусный, а противоинвазивный – на антигельминтный и антипротозойны

3. ОКИ общий вопрос

Острые кишечные инфекции (ОКИ) – группа острых инфекционных заболеваний, которые характеризуются различными этиологическими факторами (вирусы, бактерии и т.д.), имеют сходный путь и механизм передачи, а также характеризуются общностью клинико-морфологических проявлений.

Острые кишечные инфекции имеют широкое распространение.

путь передачи в основном фекально-оральный или контактно-бытовой.

Они локализуются в основном в кишечнике.

Это группа этиологически полиморфных заболеваний, возбудители которых принадлежат к различным группам микроорганизмов: бактериям, вирусам, простейшим.

Все бактериальные и вирусные инфекции имеют сходные клинические формы в виде гастроэнтероколитов, но их специфика различна.

Патогенные микроорганизмы дают отдельные характерные нозологические формы кишечных инфекций: холера, брюшной тиф. Условно-патогенные микроорганизмы обладают общей симптоматикой, и сходны по клиническим проявлениям.

1.Протозойные кишечные инфекции: лямблиоз, амебиаз, криптоспоридоз.

2.Вирусные кишечные инфекции: ротавирусы, вирус Норволка, некоторые серо-вары аденовирусов, энтеровирусы (семейства пикорнавирусов), в том числе вирус гепатита А и вирус гепатита Е

3.Бактериальные кишечные инфекции:

Представители семейства Enterobacteriaceae – прямые, Гр (-), оксидазо (-), неспорообразующие палочки, факультативные анаэробы.

Род Shigella – антропонозное заболевание дизентерия

Род Salmonella – антропонозное заболевание тифы и паратифы, и зооантропонозное заболевание сальмонеллез.

Серогруппа Escherichia coli – эшерихиоз

Род Yersinia – иерсиниоз.

Условно-патогенные бактерии Род Klebsiella, Proteus, Enterobacter, Citrobacter – вызывают пищевые токсикоинфекции

Представители семейства Vibrionaceae – род Vibrio – слегка изогнутые Гр (-), оксидазоположительные палочки, неспорообразующие, аэробы.

Вид V.cholerae серогруппы О1, 0139 – возбудители холеры, другие условно-патогенные представители вызывают диарею

Представители семейства Campylobacteraceae – род Campylobacter – извитые Грам «-», оксидазоположительные палочки, неспорообразующие, микроаэрофилы.

Вид Campylobacter jejuni, Campylobacter coli – зооантропонозное заболевание кампилобакетриоз.

Представители семейства Bacillaceae – род Bacillus – Грам «+», спорообразующие анаэробные палочки.

Вид B.cereus – вызывают диарею

Представители семейства Clostridiaceae – род Clostridium - Грам «+», спорооб-разующие анаэробные палочки.

Вид Clostridium botulinum – вызывает ботулизм

Условно-патогенный вид Clostridium difficile – антибиотикоиндуцированный эндогенный псевдомембранозный колит.

Представители семейства Staphylococcaceae – род Staphylococcus – Грам «+»

S. aureus – стафилококковый пищевой токсикоз.

АНТИБИОТИКАССОЦИИРОВАННЫЕ ДИАРЕИ

АБ-ассоциирующее поражение кишечника – один или более эпизодов неоформленного стула, развившихся на фоне применения АБ, т.е. ААПК можно рассматривать как проявление дисбактериоза, когда на фоне резкого уменьшения представителей НМ идет усиленные размножение других м\о.

Clostridium difficile – ведущий возбудитель нозокомиальных кишечных инфекций – энтеритов, колитов, псевдомембранозных колитов (ПМК), возникновение которых связано с неадекватным приемом антибиотиков.

Морфологические свойства:

Гр (+) спорообразующий анаэроб, продуцирующий два сильнодействующих токсина — токсин А-энтеротоксин и токсин В- цитотоксин; действие токсинов синергическое.

Механизм развития

С. Difficile — ассоциированного колита связан с нарушением микрофлоры кишки на фоне антибиотикотерапии, колинизацией кишечника токсигенными клостридиями и продукцией возбудителей токсинов, вызывающих повреждение слизистой оболочки толстой кишки и развитие воспалительного процесса.

Токсины, воздействуя на слизистую оболочку, снижают ее резистентность к влиянию внешних факторов и непосредственно повреждают колоноциты.

Патогенное действие токсинов приводит к альтерации сосудов, кровоизлияниям, воспалению и некрозу.

Клинические симптомы:

Легкое течение в виде водянистой диареи до 5–7 раз в сутки без системных проявлений.

Среднетяжелое течение – водянистая диарея достигает 10–15 раз в сутки, сопровождается болями в животе, лихорадкой до 38 °C, умеренной дегидратацией, лейкоцитозом крови. Развитие диареи возможно, как в первые дни приема антибиотиков, так и в последние дни курса лечения антибиотиками

Тяжелое течение – диарея до 20 раз в сутки, иногда с примесью крови, сопровождается лихорадкой до 39–40 °C, тяжелым обезвоживанием, ослаблением, высоким лейкоцитозом крови, образование плотных связанных с подлежащими тканями фибринозных наложений на слизистой оболочке толстой кишки.

Диагностика:

определение в кале токсинов А и В, С. Difficile методом иммуноферментного анализа. Микробиологический метод диагностики с выявлением культуры С. Difficile и оценкой ее токсичности применяется редко из-за большей длительности проведения.

Лечение этого колита осуществляется ванкомицином, метронидазолом, бацитрацином.

Пищевые токсикоинфекции и пищевые токсикозы – ПИЩЕВЫЕ ОТРАВЛЕНИЯ

Пищевые отравления бактериальной природы относят к кишечным инфекциям, распространяющимся алиментарным путем, и по патогенетическому принципу подразделяют на

пищевые токсикоинфекции

пищевые токсикозы (интоксикации)

Пищевые токсикоинфекции обусловлены одновременным попаданием в организм человека и микроорганизмов-возбудителей, и их токсинов, накопившихся в пищевом продукте, поскольку особенностью возбудителей является способность продуцировать экзотоксины и эндотоксины (в результате разрушения микробных клеток) не только в организме человека, но и в пищевых продуктах.

Клинически они характеризуются симптомами гастроэнтерита с достаточно длительным (8-12 часов) инкубационным периодом (необходим для вторичного развития бактерий в желудочно-кишечном тракте) и нарушением водно-солевого обмена (выраженный диарейный синдром).

Среди возбудителей пищевых токсикоинфекций помимо наиболее известных патогенных бактерий – сальмонелл (Salmonella), довольно часто встречаются условно-патогенные микроорганизмы – другие энтеробактерии (рода Escherichia, Proteus, Citrobacter,Enterobacter, Klebsiella),а также представители родов Bacillus, Clostridium, Aeromonas.

Необходимо иметь в виду, что при выделении в качестве этиологического фактора ПТИ условно-патогенных возбудителей проведение количественного анализа является обязательным.

Токсикоинфекции характеризуются:

1.Массовостью;

2.Внезапным началом;

3.Территориальной ограниченностью;

4.Прекращением вспышки после изъятия продукта

Пищевые токсикозы вызываются экзотоксином микроорганизмов, который образовался и накопился при размножении возбудителя в пищевых продуктах, при этом самих бактерий в них может уже и не быть.

Клинически они характеризуются более коротким (3-4-часа) инкубационным периодом и более выраженным болевым синдромом (боли имеют спастический характер), диарейный синдром менее выражен.

Возбудителями пищевых токсикозов являются штаммы S. aureus, продуцирующие экзотоксин – энтеротоксин, и C. botulinum, хотя вызываемое им заболевание описывается как самостоятельная нозологическая форма – ботулизм, относящийся к сапронозным (зоонозным) инфекциям.

4. Больной поступил в клинику инфекционных болезней с подозрением на холеру. Какой материал от больного направляется на БАКисследование? В какие сроки может быть получен окончательный «-» и «+» ответ?

Материал для исследования: рвотные массы, промывные воды, испражнения

Ответ может быть получен в течение 30-36 часов

Билет 3

1. персисторы

КЛЕТКИ-ПЕРСИСТОРЫ (в переводе означает «выносливые/живучие») – это особые бактерий, находящихся в состоянии метаболического покоя

Именно из-за этих клеток возникают хронические процессы!!!

В составе биопленок недоступны для АТ и клеток иммунной системы

Толерантны к АБ:

Сохраняют свою активность в присутствии лекарств

Способны вырабатывать ферменты, разрушающие лекарства

Создают вокруг себя барьер

Выбрасывают из себя молекулы АБ

Образуются при окислительном стрессе

Накапливаются в процессе иммунодепрессивных воздействий

Существуют также такие понятия как БАКТЕРИОНОСИТЕЛЬСТВО – носительство возбудителя какого-либо инфекционного заболевания без клинических проявлений, и ПЕРСИСТЕНТНОСТЬ - микроорганизмы попадают в организм человека и могут существовать в нем, не проявляя себя достаточно долгое время, как это происходит, например, с вирусом герпеса.

Отличие носительства от персистентности состоит в том, что при носительстве человек выделяет возбудитель в окружающую среду и является опасным для окружающих, а при персистентности - микроорганизм в окружающую среду не выделяется.

Клетка, проявляющая свойство персистенции, не имеет специализированных генов или мутаций для защиты от определённого антибиотика. Вместо этого она запускает свои внутренние защитные механизмы: до воздействия антибиотика клетка впадает в состояние замедления метаболизма, что позволяет в некоторых случаях предотвратить повреждение клеточной мишени антибиотика.

Такие клетки-персисторы представляют собой лишь небольшую часть любой популяции бактерии (например, одна клетка-персистор на 100 тысяч обычных). Во временном состоянии торможения метаболизма клетки-персисторы способны пережить действие антибиотика, а по окончании лечения антибиотиком могут восстановить активный метаболизм, размножиться и спустя долгое время вновь привести к возобновлению инфекции. При этом потомство персисторных клеток будет состоять из обычных,

чувствительных к антибиотикам клеток. При персистенции бактерия особым образом изменяет экспрессию генов или активность

белков — такое изменение нестойкое и не будет проявляться у потомков этой клетки. Напротив, резистентные клетки всегда сохраняют свое свойство нечувствительности в ряду поколений, так как оно обусловлено изменением генов, а не метаболизма

2. Иммунная система, ее функции. Органы иммунной системы Иммунная система — система органов, существующая у позвоночных животных и объединяющая органы и ткани, которые защищают

организм от заболеваний, идентифицируя и уничтожая опухолевые клетки и патогены.

Функции иммунной системы:

1.Защитная - реализуется через специфическое распознавание, деструкцию и элиминацию чужеродного агента.

2.Морфогенетическая - контроль и регуляция процессов регенерации тканей: уничтожение старых, дефектных и поврежденных собственных клеток;

3.Регуляторная - действие на другие системы организма через прямые межклеточные контакты и опосредованно через медиаторные молекулы (цитокины, хемокины, гормоны тимуса, пептиды и др.)

Отделы иммунной системы:

1.Центральный отдел – органы, в которых происходит образование, созревание и первичная дифференцировка лимфоцитов.

***ККМ (основной орган лимфопоэза, созревание В-лимфоцитов и место сосредоточения эффекторных клеток адаптивного иммунитета - плазмоцитов) и тимус (место созревания Т-лимфоцитов)

2.Периферические отдел – вторичные лимфоидные органы (селезенка, ЛУ, пейеровы бляшки, островки Лангерганса, лимфатические ткани кишечника)

3.Стафилококковые инфекции (все про него) ну и MRSA MRSE VRSA GRSA

Возбудители относятся к семейству Staphylococcaceae, роду Staphylococcus.

Морфология и тинкториальные свойства:

Стафилококки – неподвижные кокки, грамположительные.

В мазках располагаются одиночно, парами или гроздьями.

Не образуют спор, не имеют жгутиков, у некоторых есть капсулы.

Культуральные свойства:

Устойчивы к повышенному содержанию хлорида натрия и хорошо растут на средах с содержанием 5–10% NaCl.

Элективная среда – желточно-солевой агар.

На плотных средах через 18–24 ч культивирования в аэробных условиях бактерии формируют мутные круглые ровные колонии кремового, жёлтого или оранжевого цвета.

Температурный оптимум роста стафилококков – 30–37 °С.

Биохимическая активность:

Имеют высокую биохимическую активность: восстанавливают нитраты, вырабатывают Н2S, разлагают мочевину и ферментируют многие углеводы с образованием кислоты.

Факультативные анаэробы.

Антигенная структура:

1. Целлюлярные антигены – это поверхностные антигены клеточной стенки (пептидогликан, белок А, тейхоевые кислоты) и глубокие антигены.

По специфичности различают антигены: родовые, видовые, типоспецифические, перекрестнореагирующие

2. Экстрацеллюлярные антигены: экзотоксины и экзоферменты.

Факторы вирулентности:

факторы адгезии. Отвечающие за осуществляющие прикрепление стафилококков к клеткам тканей;

ферменты агрессии и защиты: плазмокоагулаза (главный фактор патогенности), гиалуронидаза, фибринолизин, ДНК–аза, лизоцимоподобный фермент, лецитиназа, фосфатаза, протеиназа и т.д.

комплекс секретируемых экзотоксинов:

а) мембраноповреждающие токсины – гемолизины, некротоксины, лейкоцидины, летальные токсины – по характеру их действия: гемолиз эритроцитов, некроз при внутрикожном введении кролику, разрушение лейкоцитов;

б) эксфолиативные токсины А и В различают:

по антигенным свойствам

отношению к температуре (А – термостабилен, В – термолабилен);

локализации генов, контролирующих их синтез (А контролируется хромосомным геном, В – плазмидным). С этими токсинами связана способность стафилококков вызывать пузырчатку у новорожденных, буллезное импетиго, скарлатиноподобную сыпь;

в) лейкоцидин – токсин, избирательно действует на лейкоциты, разрушая их;

г) экзотоксин, вызывающий синдром токсического шока;

факторы, угнетающие фагоцитоз

энтеротоксины;

Резистентность. Стафилококки хорошо переносят высушивание, сохраняя вирулентность; быстро погибают при прямом воздействии солнечного света.

Эпидемиология:

Источники инфекции – больные и бактерионосители;

Пути передачи возбудителя: воздушно-капельный, контактно-бытовой, алиментарный; артифициальный;

Восприимчивый коллектив – дети первого года жизни, пациенты с сахарным диабетом, иммунокомпрометированные.

Этиопатогенез:

Наиболее часто вызывают заболевания у человека следующие условно патогенные виды: S.aureus, S.epidermidis, S.

Haemolyticus

Стафилококки легко проникают в организм через мельчайшие повреждения кожи и слизистых оболочек.

Стафилококки вызывают абсцессы, флегмоны и т.д.

Обладая аллергическими свойствами, они могут стать причиной геморрагического васкулита, неспецифического полиартрита.

Инфицирование стафилококками пищевых продуктов – частая причина пищевых отравлений.

Стафилококки – основные возбудители сепсиса, в том числе новорожденных. При сепсисе различают гнойный очаг, из которого в кровь периодически попадает возбудитель, разносится по организму и поражает ретикулоэндотелиальную систему, в клетках которой возбудитель размножается, выделяя токсины, при этом клиническая картина сепсиса слабо зависит от вида возбудителя, а определяется поражением тех или иных органов.

Микробиологическая диагностика:

Материал для БАК-исследования – кровь, гной, слизь из зева, носа, мокрота, рвотные массы, испражнения, промывные воды желудка.

Методы исследования – основной метод исследования – бактериологический, в ходе которого при вспышке внутрибольничных гнойно–воспалительных заболеваний стафилококковой этиологии проводят внутривидовую дифференцировку.

Профилактика. Для создания искусственного антитоксического иммунитета против стафилококковой инфекции применяют стафилококковый анатоксин. С помощью стафилококковой плазмы и противостафилококкового иммуноглобулина создают пассивный антитоксический противостафилококковый иммунитет, в том числе у контактных лиц.

Комплекс мер, направленных на ликвидацию источника инфекции:

выявление и лечение больных и носителей;

раздельное ведение больных с ГВЗ и без ГВЗ.

Внастоящее время проблемными для лечения являются инфекции, вызванные МRSА, МRSЕ, VRSА, GRSА.

МRSА – метициллинрезистентный S. aureus

МRSE – метициллинрезистентный S. epidermidis

VRSA – ванкомицинрезистентный S. aureus

GRSА – S. aureus, устойчивый к гликопептидам

Смертность от инфекций, вызванных МRSА и МRSE в США, Китае и Японии превышает смертность от ВИЧ-инфекции. Метициллинрезистентность — это маркер, свидетельствующий о том, что эти стафилококки устойчивы ко всем В-лактамным АБ, в том числе и защищенным. Исключение составляют цефалоспорины 5 поколения. Кроме того, они обладают перекрестной устойчивостью к большинству АБ-ингибиторов синтеза белка. На современном этапе для лечения ГВЗ, вызванных МRSА, МRSЕ, применяют такие АБ как, гликопептиды, оксазолидиноны, цефалоспорины 5 поколения и тигециклин, рекомбинантные фаги, лантобиотики.

4. В инфекционное отделение больницы поступил больной с подозрением на тифопаратифозное заболевание, болен 3 дня. На основании каких клинических симптомов был поставлен предварительный диагноз? Какой материал направляется на БАКисследование? Обоснуйте выбор материала.

Характерные симптомы: помрачённость сознания, розеолозная сыпь на коже. Также лихорадка, головная боль

Исследуют кровь, так как по срокам заболевания это соответствует бактериемии

Билет 4

1. Питание бактерий, механизмы и типы секреций ПИТАНИЕ – это процесс поступления в клетку питательных веществ и выделение продуктов метаболизма.

По типу питания, т.е. в зависимости от характера источника получения углерода и азота (прото-/ауксотрофы):

Автотрофы используют в качестве получения углерода неорганические вещества

Гетеротрофы – используют в качестве получения углерода органические вещества.

Прототрофы – это микроорганизмы, способные самостоятельно синтезировать все необходимые органические соединения.

Ауксотрофы – это микроорганизмы, не способные самостоятельно синтезировать необходимые соединения; они получают их в готовом виде из окружающей среды или организма хозяина

Гетеротрофы делятся на:

паратрофы (источник питательных веществ –объекты живой природы)

метатрофы (источник питательных веществ – органические вещества неживой природы).

По способу усваивания азота:

Азотфиксирующие – микроорганизмы, способные усваивать молекулярный азот атмосферы.

Аммонифицирующие, нитрат- и нитрит-редуцирующие бактерии – ассимилируют неорганический азот из солей аммония, нитратов или нитритов. Однако патогенные для человека МО способны ассимилировать только азот органических соединений

ОСОБЕННОСТИ ПИТАНИЯ БАКТЕРИЙ:

бактериальные клетки лишены специальных органов для захвата и переваривания пищи. Поступление питательных веществ у них происходит путем всасывания через всю поверхность.

бактерии выделяют во внешнюю среду экзоферменты, с помощью которых они и расщепляют сложные вещества до простых.

МЕХАНИЗМЫ ПИТАНИЯ: пассивная диффузия, облегченная диффузия, активный транспорт.

Простая диффузия

Переход питательных веществ (вода) из среды в клетку происходит в направлении от большой концентрации к меньшей, т.е. по градиенту концентрации. Таким путем в клетку проникает и выходит из нее вместе с растворенными в ней различными мелкими молекулами, способными проходить через мелкие поры мембраны. Не требует затраты энергии.

Облегченная диффузия

Протекает при участии специфических белков, локализованных в мембране либо через мембранные каналы. Белки распознают и связывают молекулу субстрата на внешней стороне мембраны и обеспечивают ее перенос через мембрану. Облегченная диффузия происходит только по градиенту концентрации – поэтому не требует затрат энергии.

Активный транспорт

Растворенные вещества могут поступать в клетку против градиента концентрации, поэтому активный транспорт требует от клетки затрат энергии. У бактерий этот механизм преобладает.

СЕКРЕЦИЯ – это активный транспорт белков из цитоплазмы во внешнюю среду.

Это необходимо:

Для построения клеточной стенки, жгутиков, ворсинок.

Прикрепления бактерий к клетке за счет ворсинок.

Патогенные бактерии выделяют в окружающую среду, либо в пространство клетки - эффекторные молекулы.

УГр (+) бактерий выделение идет в один этап.

УГр (-) – обнаружены системы секреции. 5 систем – отличаются по

строению и конечной локализации белка.

ТИПЫ СЕКРЕЦИИ:

1 тип секреции – транспорт образовавшихся эффекторных молекул во внешнюю среду. В этой системе участвуют три белка:

А. делают порины в ЦПМ

Б. протягивают молекулу белка через периплазматическое пространство.

В. делают поры в клеточной стенке – через которые белок выделяется во внешнюю среду.

2 тип секреции – транспортировка в два этапа:

1 этап – белок проникает в периплазматическое пространство и там остаются;

2 этап – некоторые белки через пору клеточной стенки поступает во внешнюю среду.

3 тип секреции: Принимают участие 20 белков.

Белки первой группы образуют структуру напоминающую шприц.

2 группа белков протягивает эффекторную молекулу по этому каналу в клетку макроорганизма.

4 группа – секреторные белки попадают непосредственно в цитозоль эукариотической клетки.

Т.о., секреция 3 типа доставляет факторы вирулентности непосредственно в клетку человека, вызывая нарушения ее жизнедеятельности.

4 тип секреции – осуществляется особыми белками - автотранспортерами. Во внешнюю среду

***рисунки собственные (схематично все представлено), так я пыталась запомнить типы секреции

2. Клетки, участвующие в реализации адаптивного ИО. Иммунокомпетентные клетки, классификация.

ИКК – клетки, входящие в состав ИС, способные специфически распознавать АГ и отвечать на него иммунной реакцией Различают:

АГ-распознающие (Т-/В-лимфоциты) – на Т-лимфоцитах АГ-рецептор – TCR, на В-лимфоцитах – BCR.

АГ-презентирующие (макрофаги, дендритные, В-лимфоциты) - На поверхности мембран они содержат АГ-рецепторы (PRR) – распознают патоген-ассоциированные молекулярные паттерны (PAMP)

Регуляторные (Т-хелперы)

Эффекторные (Цитотоксические Т-лимфоциты, активированные лимфоциты, плазматические клетки)

На поверхности всех клеток ИС имеются маркеры (CD) – поверхностные молекулы (белковой природы, в первую очередь), характеризующие стадию дифференцировки клетки и принадлежность ее к определенной популяции/субпопуляции

3. Методы микробиологической диагностики инфекционный заболеваний. Характеристика

Основной задачей микробиологической диагностики инфекционных заболеваний является установление их этиологической природы. Эта задача решается:

либо путем выделения из исследуемого материала микроба-возбудителя, или обнаружения его антигенов или нуклеотидных последовательностей в материале;

либо выявлением образующихся в ходе развития инфекционного заболевания иммунологических изменений или антител, или сенсибилизированных Т-лимфоцитов.

Несколько общих требований, касающихся любого вида исследуемого материала:

Его забирают в достаточном количестве, которое обеспечивало бы необходимый объем исследования;

Материал должен соответствовать заболеванию и взят из очага поражения (мазок со слизистой глубины носовых ходов, а не ноздрей; средняя, а не начальная порция мочи; мокрота, а не слюна; гной из расположенного в глубине тканей очага поражения, а не из отверстия свища (фистулы); отделяемое из глубины раны, а не с ее поверхности)

Его забирают, используя только стерильные инструменты и посуду, но не содержащую дезинфицирующие вещества, с соблюдением правил асептики, чтобы предупредить загрязнение исследуемого материала посторонней микрофлорой

Собранный материал доставляют в лабораторию и исследуют в максимально сжатые сроки. Если хранение и транспортировка длятся более 24 часов и в тех случаях, когда микроорганизмы не стабильны вне организма, для сохранения их жизнеспособности используют поддерживающие (транспортные) среды

–край (ровный, неровный);

–структура (гомогенная, негомогенная).

Изучение колоний заканчивается приготовлением мазка, окраской его по методу Грама и микроскопией. При взятии материала из колонии для приготовления мазка оценивается ее консистенция (мягкая, слизистая, сухая).

Если при микроскопии культура оказалась чистая, то ее пересевают на скошенный агар для накопления.

3 ДЕНЬ БАК ИССЛЕДОВАНИЯ:

4 ДЕНЬ БАК ИССЛЕДОВАНИЯ:

ПЦР (МЕТОД ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ)

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) являющаяся одним из методов ДНК-диагностики, позволяет увеличить число копий детектируемого участка генома (ДНК) бактерий или вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы.

Тестируемый специфический для данного генома отрезок нуклеиновой кислоты многократно умножается (амплифицируется), что позволяет его идентифицировать.

Сначала молекула ДНК бактерий или вирусов нагреванием разделяется на 2 цепи, затем в присутствии синтезированных ДНК-праймеров (последовательность нуклеотидов специфична для определяемого генома) происходит связывание их с комплементарными участками ДНК, синтезируется вторая цепь нуклеиновой кислоты вслед за каждым праймером в присутствии термостабильной ДНК-полимеразы. Получается две молекулы ДНК. Процесс многократно повторяется.

Для диагностики достаточно одной молекулы ДНК, то есть одной бактерии или вирусной частицы. Введение в реакцию дополнительного этапа - синтеза ДНК на молекуле РНК при помощи фермента обратной транскриптазы - позволило тестировать РНК-вирусы, например, вирус гепатита С.

ПЦР - это трехступенчатый процесс, повторяющийся циклично: денатурация, отжиг праймеров, синтез ДНК (полимеризация). Синтезированное количество ДНК идентифицируют методом иммуноферментного анализа или электрофореза.

ВПЦР может быть использован различный биологический материал - сыворотка или плазма крови, соскоб из уретры, биоптат, плевральная или спинномозговая жидкость и т.д.

Впервую очередь ЦПР применяют для диагностики инфекционных болезней, таких как вирусные гепатиты В, С, D, цитомегаловирусная инфекция, инфекционные заболевания, передающиеся половым путем (гонорея, хламидийная, микоплазменная, уреаплазменная инфекции), туберкулез, ВИЧ-инфекция и т.д.

Преимущество ПЦР в диагностике инфекционных заболеваний перед другими методами исследований заключается в следующем:

возбудитель инфекции может быть обнаружен в любой биологической среде организма, в т.ч. и материале, получаемом при биопсии;

возможна диагностика инфекционных болезней на самых ранних стадиях заболевания;

возможность количественной оценки результатов исследований (сколько вирусов или бактерий содержится в исследуемом материале);

высокая чувствительность метода; например, чувствительность ПЦР для выявления ДНК вируса гепатита В в крови составляет 0,001 пг/мл (приблизительно 4,0.102 копий/мл), в то время как метода гибридизации ДНК с использованием разветвленных зондов - 2,1 пг/мл (приблизительно 7,0.105 копий/мл).

СЕРОДИАГНОСТИКА

Это метод диагностики, целью которого является обнаружение в сыворотке обследуемого антител и нарастания их титра (количества).

Для его реализации используют различные реакции иммунитета как простые (агглютинация и ее разновидности), так и сложные (РСК, ИФА и др.).

Нарастание титра антител, т.е. их инфекционная природа, устанавливается при исследовании парных сывороток.

* Так называют сыворотки, взятые от одного больного в разные сроки болезни с интервалом 5-7 дней.

При исследовании сыворотки любого человека в ней можно обнаружить антитела различного происхождения - инфекционные,

постинфекционные, нормальные, поствакцинальные.

Концентрации трех последних различны, но на протяжении достаточно длительных промежутков времени титр их находится на одном и том же уровне или постепенно снижается. При инфекционных заболеваниях в связи с размножением возбудителей нарастает антигенное раздражение. В ответ на это в сыворотке возрастает количество инфекционных, связанных с заболеванием, антител. Таким образом, титр инфекционных антител нарастает в динамике заболевания, при этом абсолютно не важно, в каком количестве обнаруживаются специфические антитела при первом исследовании.

Серологический метод диагностики применяют с конца первой, начала второй недели заболевания. Для осуществления серологических реакций, т.е. взаимодействия антител с антигеном, при серодиагностике для обнаружения искомого антитела к сыворотке прибавляют известный антиген - или микроорганизмы, вызвавшие их образование, или их компоненты, обладающие иммуногенностью. В качестве известного антигена для серодиагностики используются разнообразные антигенные диагностикумы.

обычные диагностикумы – п.с. взвесь убитых микроорганизмов или их отдельных АГ

эритроцитарные диагностикумы – взвесь эритроцитов, на которых адсорбированы МО или их АГ.

Вдиагностическом варианте можно использовать почти все указанные для иммуноиндикации реакции иммунитета, но меченными радиоизотопами, флюорохромами должны быть антигены, а не антитела.

Отличие диагностического варианта ИФА будет также заключаться в использовании не антимикробной иммунной меченной ферментом сыворотки, а меченной ферментом антиглобулиновой сыворотки, воспринимающей человеческие антитела в исследуемой сыворотке как антигены.

Кроме того, для оценки напряженности антитоксического иммунитета при дифтерии и скарлатине раньше использовали реакция токсиннейтрализации in vivo (в организме здорового человека). Отсутствие гиперемии (местного действия токсина) через 24 часа после введения (в/к 1/40 DLM) токсина Шика (дифтерийный) или Дика (скарлатинозный) говорит о нейтрализации их антитоксинами, т.е. антителами против бактерийных и некоторых других токсинов, и в конечном счете о наличии антитоксического иммунитета. В настоящее время эти реакции не применяются, а для оценки напряженности антитоксического иммунитета и отбора контингента для ревакцинации при дифтерии используется РПГА с дифтерийным антигенным анатоксическим диагностикумом.

АЛЛЕРГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА

При многих инфекционных заболеваниях развивается состояние повышенной чувствительности к повторному введению возбудителя или продуктов его жизнедеятельности. Такое состояние называется инфекционной аллергией.