2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Микра

Среда Эндо

-для выделения Enterobacteriaceae (роды: Escherichia, Shigella, Salmonella, Yersinia)

-фуксинсернистая кислота (реактив ШИФФА) выступает как селективный компонент, подавляет рост посторонних грам+ организмов

-розовый цвет среды

-лактозанегативные бактерии (не сбраживают лактозу) образуют прозрачные колонии)

-лактозапозитивные бактерии – пурпурные с металлическим блеском

-аналог среды Эндо – среда Левина (EMB-агар), вместо фуксинсернистой кислоты содержит красители: эозин, метеленовый синий, формирующие темный осадок с металлическим блеском при снижении рН вокруг лактозапозитивных колоний

27. Способы выделения чистых культур.

Бактериологический метод, основные этапы и цели

каждого этапа.

Чистая культура – совокупность микроорганизмов, полученных in vitro, на

питательной среде из одной микробной клетки (генетически идентичны и

схожи по биологическим свойствам)

Методы механического разобщения микроорганизмов (для выделения

чистых культур):

1.Метод Пастера

-последовательное разведение исследуемого материала в жидкой питательной среде до уровня, при котором в пробирках остаются единичные клетки

2. Метод Коха

- последовательное разведение исследуемого материала в пробирках с расплавленной плотной питательной среде, затем содержимое пробирок выливают в стерильные чашки Петри, где среда с микроорганизмами застывает

Счастье любит смс и зачисление денег: 89015052596 (сбербанк онлайн)

Спасите нас от тараканов и моли, они сожрали всю крупу и все нервы

-после инкубации внутри питательной среды вырастают изолированные колонии

-применялся для подсчета количества бактерий в исходном материале

3. Метод Дригальского

-основан на посеве микроорганизмов на поверхность питательной среды

-материал наносят на поверхность с помощью пипетки или петли

-после стерильным шпателем распределяют последовательно по поверхности одной или нескольких чашек

-можно проводить посев на плотные питательные среды бактериологической петлей (ее стерилизуют в пламени спиртовки, остужают и отбирают небольшое количество материала из пробирки)

-потом наносят последовательно в сектора чашки Петри

-разобщение клеток и получение изолированных колоний (чистых культур)

4. Классический бактериологический метод

- для выделения чистой культуры и ее идентификации

Этапы:

1 этап

-рассев исследуемого материала по поверхности плотной питательной среды для получения изолированных колоний

-инкубация в термостате (сутки)

-перед посевом предварительная микроскопия (помогает в выборе питательной среды)

2 этап

-изучение выросших колоний (макро и микроскопическое)

-последующий отбор и пересев колоний типичных для возбудителей заболеваний, для получения чистой культуры

3 этап

Счастье любит смс и зачисление денег: 89015052596 (сбербанк онлайн)

Спасите нас от тараканов и моли, они сожрали всю крупу и все нервы

-полученную чистую культуру идентифицируют до вида (классическая биохимическая идентификация, секвенирование гена 16 S Ррнк или MALDITOF масс-спекторометрию

-внутривидовое типирование классическими (фаготипирование, серотипирование) и современными (мультилоуксусное секвенировнаие, пульс-электрофорез) методами

-для некоторых бактерий определяются токсины и ферменты патогенности

-в медицинской микробиологии обязательно определяют чувствительность к антибиотикам

28. Изучение культуральных свойств микроорганизмов.

Деление бактерий на группы по отношению к кислороду,

температуре, pH среды.

Счастье любит смс и зачисление денег: 89015052596 (сбербанк онлайн)

Спасите нас от тараканов и моли, они сожрали всю крупу и все нервы

29. Кривая роста периодической микробной популяции,

характеристика фаз (периодов).

Бактерии, засеянные в жидкую питательную среду, размножаются до тех пор, пока не наступит истощение среды и накопление токсических продуктов жизнедеятельности. После этого рост прекращается – периодическая

культура.

Кривая роста отражает зависимость числа живых клеток от культивирования.

Фазы:

1.Лаг-фаза

-период адаптации культуры к питательной среде и условиям культивирования

-необходима для синтеза индуцибильных ферментов и других изменений физиологии микробных клеток

2.Экспоненциальная фаза (логарифмическая)

-интенсивное деление клеток

-увеличение популяции бактерий в геометрической прогрессии

-определяется время генерации культуры (время, за которое концентрация микробных клеток удваивается)

Счастье любит смс и зачисление денег: 89015052596 (сбербанк онлайн)

Спасите нас от тараканов и моли, они сожрали всю крупу и все нервы

3. Стационарная фаза

-концентрация бактерий максимальна

-скорость образования клеток равна скорости гибели бактерий

4. Фаза отмирания

- гибель бактериальной популяции из-за нехватки питательных веществ и

токсического действия продуктов метаболизма

30. Стерилизация, определение. Методы стерилизации и

применяемая аппаратура. Термические методы

стерилизации, их характеристика, стерилизуемые

материалы.

Стерилизация – полное освобождение какого-либо вещества или предмета от всех форм микроорганизмов

- подлежат все объекты, контактирующие с тканями, слизистыми оболочками, полостными, кровяным руслом организма (инструменты, перевязочные материалы, лекарственные растворы, шприцы, катетеры и т.д.)

Методы термической стерилизации:

- основаны на способности высоких температур вызывать денатурацию белков и нуклеиновых кислот, приводящую к гибели живых объектов

Виды термической стерилизации:

1.Прокаливание

-в пламени горелки (5-7 секунд)

-бактериологические петли, препаровальные иглы

-НЕ рекомендуется прокаливать режущие инструменты

-гибнут вегетативные клетки и споры

-при стерилизации пинцетов и шпателе окунают в спирт и затем поджигают

Счастье любит смс и зачисление денег: 89015052596 (сбербанк онлайн)

Спасите нас от тараканов и моли, они сожрали всю крупу и все нервы

* глассперленовая стерилизация: инструмент погружают в камеру со стеклянными шариками, нагретыми до 200-250 градусов, для стерилизации стоматологических и маникюрных инструментов

2. Стерилизация сухим жаром

-в воздушных стерилизаторах (сухожаровый шкаф: металлический шкаф с решетчатыми полками, электроподогревом и терморегулятором, 160-200 градусов)

-НЕрежущие инструменты, другие металлические изделия, стеклянная посуда (160 градусов), силиконовая резина, масла

-убивает вегетативные микробные клетки и споры

Недостатки: нельзя стерилизовать объекты с водой, долгий процесс стерилизации и замедленная подача тепла

3.Стерилизация паром под давлением

-в паровых стерилизаторах (автоклав: герметичные сосуды, в которых нагреватели передают тепло воде, вызывая ее кипение)

-пар повышает давление в камере автоклава, смещая точку кипения воды до 110-135 градусов

-насыщенный пар передает тепло стерилизуемым предметам

-быстрая гибель всех форм микроорганизмов

-величина температуры зависит от давления (15-60 минут)

-наиболее универсальный

-питательные среды и растворы, белье и перевязочный материал, лабораторную посуду, большинство металлических изделий, термостойкие пластмассы и резины

4. Кипячение

-100 градусов

-выживают споры

5. Метод дробной стерилизации (тиндализация)

- нагревание до 60-100 градусов по 20-30 минут (несколько дней)

Счастье любит смс и зачисление денег: 89015052596 (сбербанк онлайн)

Спасите нас от тараканов и моли, они сожрали всю крупу и все нервы

-в промежутках между стерилизациями материал держат при комнатной температуре (дают прорасти спорам в вегетативные формы)

-эти формы уничтожаются при последующем нагревании

6. Пастеризация

-в пищевой промышленности

-неполная стерилизация, при которой погибают вегетативные формы многих патогенных микробов (энтеробактерии, туберкулезные палочки, бруцеллы), но остаются споры бактерий

-температура меньше 100 градусов

-последующее быстрое охлаждение для сохранения состава и органолептических свойств

31. Методы холодной стерилизации, характеристика.

Химическая стерилизация, методы, характеристика.

Методы холодной стерилизации:

1.Радиационная стерилизация

-проводится гамма-излучение, испускаемое изотопами кобальта и цезия

-ионизирующее излучение вызывает одноцепочечное и двуцепочечное разрывы ДНК

-приводит к радиолизу воды (образование активных форм кислорода, могут повреждать практически все биологические молекулы)

-обеззараживание одноразовых инструментов, лабораторной посуды, медицинских устройств, лекарственных веществ

-выоскоэффективен для всех форм медицински значимых микроорганизмов

2. Ультрафиолетовое излучение

-ртутно-кварцевыми лампами

-длина волн 250-260 нм

Счастье любит смс и зачисление денег: 89015052596 (сбербанк онлайн)

Спасите нас от тараканов и моли, они сожрали всю крупу и все нервы

-эффективно поглощается ДНК

-образование пиримидиновых димеров (ковалентная сшивка рядом стоящих пиримидиновых (обычно тиминовых) остатков с образованием циклобутановых колец)

-высокоэффективно уничтожает вегетативные формы и менее эффективно споры

-обеззараживание воздуха и поверхностей в лабораторных помещениях, боксах, операционных

3. Фильтрация

-с помощью мелкопористых бактериальных фильтров

-задерживает большинство микроорганизмов

-многие фильтры проницаемы для вирусов, микоплазм и L-форм

-мембранные фильтры – тонкие пластинки из сложных эфиров целлюлозы, полиамида и других веществ с известным размером пор

-глубинные фильтры – толстые асбестовые диски, пористые стеклянные фильтры или фильтры-свечи (фарфоровые или керамические)

-шприцы или насосы

- стерилизуют не выдерживающие нагревание жидкости (плазма, сыворотка крови, белковые растворы)

4. Газовая стерилизация

-в газовых стерилизаторах (больших герметичных камерах, в них помещают аппаратуру и приборы медицинского назначения, пластмассовые изделия)

-заполняют газом с высокой химической активностью

-этиленоксид, реже NO2 и газообразный фармальдегид

-6-10 часов, потом дегазация

-метод надежный, но сложный и долгий

5. Плазменная стерилизация

- схожа с газовой

Счастье любит смс и зачисление денег: 89015052596 (сбербанк онлайн)

Спасите нас от тараканов и моли, они сожрали всю крупу и все нервы

-в герметичную камеру с низким давлением вносится и испаряется H2O2 c образованием низкотемпературной плазмы

-образующиеся свободные радикалы и УФ излучение уничтожают все микроорганизы на стерилизуемых объектах

-отсутствие токсичных отходов

-конечные продукты – кислород и водяной пар

Стерилизация химическими растворами:

1.Щелочной водный раствор глутарового альдегида (2%)

2.Раствор формальдегида (20%)

3.Этанол (70%)

4.Перекись водорода (6%)

-растворы наливают в стерильные контейнеры и помещают туда стерилизуемые объекты (эндоскопы, трубки и маски для анестезии, резиновые и пластмассовые изделия, 5-6 часов)

-потом предметы тщательно промывают стерильной водой, соблюдая правила асептики

-метод надежен, но возможна вторичная обсеменение микробами в процессе отмывания

32. Антисептика, определение. Примеры антисептиков.

Антисептика – уничтожение или резкое снижение количества патогенных

микроорганизмов на поверхности тела человека и в полостях организма

-химические вещества, обладающие противомикробными свойствами

-безвредны для организма при наружном применении

Примеры антисептиков:

1. Растворители (этанол)

Счастье любит смс и зачисление денег: 89015052596 (сбербанк онлайн)

Спасите нас от тараканов и моли, они сожрали всю крупу и все нервы

- вызывают разрушение мембран, денатурацию белков вследствие снижения гидрофобного эффекта за счет изменения распределения водородных связей в растворе

2. Окислители (H2O2)

-вызывает повреждение сахорофосфатного остова и АО в молекулах ДНК

-запускают реакции перекисного окисления липидов мембран

3. Галогены (растворы йода)

-галогенирование тирозиновых остатков в белковых молекулах

4. Поерхностно активные вещества (хлоргексидин, октенидин)

-встраиваются в биологические мембраны и нарушают их целостность

33. Энергетический метаболизм микроорганизмов. Типы

дыхания. Брожения.

Энергетический метаболизм (катаболизм) - механизм утилизации углеводов

1.Начальный этап утилизации сложных углеводов: расщепление, транспорт внутри клетки (многие микроорганизмы могут расщеплять углеводы, которые не усваивает человек)

2.Моносахариды включаются в цепь последовательных реакций энергетического метаболизма (гликолиз = путь Эмбдена-Мейергофа- Парнаса = фруктозо1,6-бифосфатный путь/фосфглюканатный путь = путь Энтойнера-Дудорова

-углеводы до ПВК, энергия в виде АТФ, высвобождается избыток электронов (на специализированных переносчиках)

-необходим акцептор электронов (восстанавливает переносчики)

Варианты энергетического метаболизма в зависимости от используемого акцептора электронов:

1. Брожение

Счастье любит смс и зачисление денег: 89015052596 (сбербанк онлайн)

Спасите нас от тараканов и моли, они сожрали всю крупу и все нервы