2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Микра

6. Особенности организации клеточной стенки

кислотоустойчивых бактерий. Метод Циля-Нильсена, его

сущность, методика окраски.

Кислотоустойчивая клеточная стенка:

-Crunebacterialis

-Mycobacterium tuberculosis (возбудитель туберкулёза) (грам+)

•Массивный слой пептидогликана

•Над ним слой арабиногалактана

•Над ним гидрофобный липидный слой (миколовые кислоты, корд-фактор (димиколат трегалозы), фтиоцерол димикоцерозат, сульфолипиды, липоманнан, другие липидные молекулы). Благодаря этому слою возбудитель туберкулеза обладает высокой устойчивостью к высыханию, кислотам и щелочам, антибиотикам.

-окраска по Цилю-Нильсену

-люминисцентная микроскопия (краситель – ауромин-родомин,ауромин- фенол), флюрохромные красители удерживаются в липидном слое, а в окружающих клетках вымываются кислотно-спиртовым раствором, обесцвечиваются перманганатом калия. На темном фоне – золотистые клетки.

Метод Циля-Нильсена.

Красящие растворы: концентрированный карболовый фуксин Циля, раствор метиленового синего, протравы, высокая температура.

Дифференцирующее вещество: 5% раствор H2SO4

Фиксация: в пламени горелки

Этапы:

8.Мазок + белая фильтровальная бумажка + раствор карболового фуксина Циля

9.Подогреть препарат на горелке до появления паров (3-4 раза)

Счастье любит смс и зачисление денег: 89015052596 (сбербанк онлайн)

Спасите нас от тараканов и моли, они сожрали всю крупу и все нервы

10.Снять бумажку, остудить, промыть водой

11.Опустить в серную кислоту 2-3 раза

12.Промыть водой

13.Препарат + метиленовый синий = 5 минут

14.Промыть водой, высушить, микроскопировать

Сущность метода: высокая температура плавит липиды, краска проникает внутрь клетки. После охлаждения липиды застывают, краска остается (рубиново-красный). Остальные бактерии обесцвечиваются, докрашиваются метиленовым синим.

Результат: рубиново-красные туберкулезные палочки, остальные – голубого

цвета.

7. Капсула бактерий, химический состав, значение.

Капсула (простой метод или по Грамму, метод Бурри-Гинса)

-поверх клеточной стенки

-защита от механического повреждения, высыхания, фагоцитоза

-большинство полисахаридные (Staphylococcus, Streptococcus, Neisseria, Klepsiella)

-полипептидная (Bacillus, из D-глутаминовой кислоты Bacillus anthracicus)

-микрокапсула (меньше 0,2 мкм)

8. Жгутики бактерий, строение, химический состав.

Подразделение жгутиковых бактерий. Пили бактерий,

виды и функции.

Жгутики бактерий, флагеллы (метод серебрения)

Счастье любит смс и зачисление денег: 89015052596 (сбербанк онлайн)

Спасите нас от тараканов и моли, они сожрали всю крупу и все нервы

-придает бактериям способность быстрого движения в жидкой среде, медленного – по поверхности плотных сред

-спиральная ить из белка флагеллина, у поверхности клеточной стенки переходит в крючок

-нить с помощью крюка прикреплена к базальному телу (встроено в ЦП мембрану и клеточную стенку, состоит из системы вращающихся белковых колец

Классификация бактерий по жгутикам

Пилли, фимбрии

-полимерные белковые образования

-большинство для адгезии бактерий к различным субстратам и клеткам, формирование биопленок

-сократимые пилли 4 типа (у Neisseria, притягивает бактериальные клетки к поверхности, формируют особый тип подвижности; могут притягивать молекулы ДНК из окр. среды, позволяют транспортировать их внутрь – трансформация)

-конъюгативные пилли (F-пилли Escherichia coli, процесс коньюгации – перенос молекул ДНК между бактериями)

9. Строение цитоплазматической мембраны, ее функции.

Счастье любит смс и зачисление денег: 89015052596 (сбербанк онлайн)

Спасите нас от тараканов и моли, они сожрали всю крупу и все нервы

Цитоплазматическая мембрана – обязательный структурный элемент любой

клетки, нарушение целостности которого приводит к потере клеткой

жизнеспсобности.

-бислой фосфолипидов, в который погружены белки

-обычно НЕ содержит стеролы, сфинголипиды

-в н.у. липиды мембраны находятся в жидкостно-кристаллическом состоянии

-возможна диффузия липидов и белков в плоскости мембраны

-высокая эластичность мембран

Функции ЦП мембраны:

-барьерная

-избирательный активный и пассивный транспорт молекул

-содержит ферменты синтеза, сборки, модификации поверхностных структур бактериальной клетки (клеточная стенка, жгутики, пили, капсула)

-содержит рецепторы

-может содержать электронтранспортную дыхательную цепь

-принимает участие в делении клетки

10. Цитоплазма бактерий, состав.

Цитоплазма:

-коллоидный раствор

-содержит ДНК, РНК, ферменты, субстраты, продукты обмена веществ

-в центральной части нуклеоид (мало рибосом, бактериальные хромосомы)

-плазмиды (необязательно, маленькие молекулы кольцевой двухцепочечной ДНК, кодируют синтез белков)

11. Нуклеоид бактерий, его отличия от ядер

эукариотических клеток.

Счастье любит смс и зачисление денег: 89015052596 (сбербанк онлайн)

Спасите нас от тараканов и моли, они сожрали всю крупу и все нервы

Бактериальные хромосомы, нуклеоид (метод Романовского-Гимзы):

-суперспирализованная молекула двуцепочечной ДНК, замкнута в кольцо, компактно упакована, образует петли

-стабилизация бактериальной хромосомы осуществляется с помощью гистоноподобных белков (нет гистонов, типичных для эукариот)

-суперспирализация осуществляется с помощью ферментов топоизомераз

(ДНК-гираза)

-размер 0,5-10 млн п.н.

-линейные хромосомы (Borrelia, Streptomyces)

-2 одинаковых по размеру хромосомы (Vibrio)

-плазмиды (необязательно, маленькие молекулы кольцевой двуцепочечной ДНК, кодируют синтез белков)

Метод Романовского-Гимзы.

-для визуализации нуклеоида

-для окраски спирохет, риккетсий, хламидий, простейших, мазков крови

-смесь красителей (основный метиленовый синий, азур, кислотный эозин)

-ДНК: сине-фиолетовый (метиленовый синий и азур)

-цитоплазма: розовый (эозин)

12. Рибосомы бактерий, химический состав, строение,

функция.

Рибосомы:

-рРНК + белки

-на них синтезируются все белки клетки

-константа синдементации 70S (2 субъединицы 30S и 50S)

-каждая субъединица содержит РНК (16S – в малой, 23S и 5S - в большой), 1 молекула 20-30 видов белков

-большая часть рибосомальных белков – структурная функция

Счастье любит смс и зачисление денег: 89015052596 (сбербанк онлайн)

Спасите нас от тараканов и моли, они сожрали всю крупу и все нервы

-рибосомы в диссоциированном состоянии, сборка на стадии инициации, трансляции

-ген, кодирующий 16S рРНК – маркер для индентификации филогенетической систематики, есть у всех бактерий

-у эукариот рибосома 80S

13. Цитоплазматические включения бактерий, их

химическая природа, значение.

Цитоплазматические включения:

-поли-бета-гидроксимасляная кислота, гликоген, сера, липиды

-зёрна волютина (фосфорная кислота в виде гранул полифосфата), это фосфатное депо, у коринебактерий и спирилл, окрашиваются различными красителями, метахромазия (метод Нейссера и метод Леффлера)

Метод Нейссера

-фиксация зёрнами волютина уксусно-кислой синьки Нейссера

-дальше окрашивают везувином

-зёрна волютина тёмно-синего цвета, а цитоплазма – жёлтого

Метод Леффлера

-мазок фиксируют в пламени горелки

-окраска щелочным метиленовым синим

-тела бактерий голубого цвета, зёрна волютина – тёмно-синего

(окрашивают крунебактерии)

14. Эндоспоры бактерий, их строение и особенности

химического состава. Методы окраски.

Эндоспоры (метод Ожешко):

-покоящиеся, метаболически не активные формы бактерий

Счастье любит смс и зачисление денег: 89015052596 (сбербанк онлайн)

Спасите нас от тараканов и моли, они сожрали всю крупу и все нервы

-высокая устойчивость к факторам внешней среды

-расположение: центрально, субтерминально, терминально

-не для размножения

-для переживания неблагоприятных условий

-обычно 1 спора, иногда 2 и более

-у бацилл споры не превышают размер клетки

-у клостридий в месте нахождения споры клетки раздуваются, веретенообразная форма

-при гибели наружной клетки созревшая спора попадает во внешнюю среду

-зрелые споры устойчивы к высыханию, высоким температурам (кипячению), окислителям, спиртам, кислотам, щелочам, уф-излучению

-при попадании споры в благоприятные условия – метаболическая активация (разрушение наружных оболочек, впитывание воды, формирование полноценной вегетативной клетки)

-плохо воспринимает окраску (по Граму, бесцветная)

Образование эндоспор:

1.Ассиметрическое бинарное деление клетки

2.Более крупная обволакивает и поглощает более мелкую клетку

3.Результат: спора внутри бактериальной клетки, окружена собственной цитоплазматической мембраной, модифицированным пептидогликаном, второй мембраной (образована в ходе процесса обволакивания

4.Поверх них образуются кристаллоподобные белковые слои – споровые оболочки

5.Над ними могут быть белковые экзоспориумы

6.При созревании споры – обезвоживание, накопление дипиколината кальция

7.ЦП мембрана споры латерально сжимается, переходит в фазу геля,

теряет текучесть и проницаемость для воды

Счастье любит смс и зачисление денег: 89015052596 (сбербанк онлайн)

Спасите нас от тараканов и моли, они сожрали всю крупу и все нервы

8.ДНК компактизируется, связывается с малыми кислоторастворимыми белками

9.Обмен веществ практически прекращается

Метод Ожешки.

-мазок высушивают на воздухе (не фиксируют)

-наливают 0,5% HCl, греют 2 минуты (оболочки спор размягчаются, лучше окрашиваются)

-промывают, высушивают, фиксируют в горелке

-затем по Цилю-Нильсену

Результаты:

Вегетативные клетки голубого цвета, споры – рубиново-красные

Метод Циля-Нильсена.

Красящие растворы: концентрированный карболовый фуксин Циля, раствор метиленового синего, протравы, высокая температура.

Дифференцирующее вещество: 5% раствор H2SO4

Фиксация: в пламени горелки

Этапы:

1.Мазок + белая фильтровальная бумажка + раствор карболового фуксина Циля

2.Подогреть препарат на горелке до появления паров (3-4 раза)

3.Снять бумажку, остудить, промыть водой

4.Опустить в серную кислоту 2-3 раза

5.Промыть водой

6.Препарат + метиленовый синий = 5 минут

7.Промыть водой, высушить, микроскопировать

Счастье любит смс и зачисление денег: 89015052596 (сбербанк онлайн)

Спасите нас от тараканов и моли, они сожрали всю крупу и все нервы

15. Основные отличия в организации клеток эукариот и

прокариот.

Счастье любит смс и зачисление денег: 89015052596 (сбербанк онлайн)

Спасите нас от тараканов и моли, они сожрали всю крупу и все нервы

16. Морфологические особенности спирохет. Способы

окраски спирохет. Роль в инфекционной патологии

человека.

Спирохеты:

-форма спирали или плоской волны

-тип Spirochaetes

-грамбактерии (цитоплазматический цилиндр + пептидогликан + наружная мембрана)

-внутриклеточное расположение двигательного аппарат (2 пучка эндофлагелл, схожих со жгутиками, в периплазматическом пространстве, начало базальных телец на концах клетки, направленных к середине)

-эндофлагеллы цитоплазматический цилиндр взаимно закручены (обуславливают извитую форму, позволяют совершать различные движения: колебательные, вращательные, сгибательные)

-особый тип подвижности способствует передвижению в вязких средах

-размножение поперечным делением

-атипические морфологические формы: клетки со вздутиями, округлые тела, биопленкоподобный агрегат

Тип Spirochaetes

Счастье любит смс и зачисление денег: 89015052596 (сбербанк онлайн)

Спасите нас от тараканов и моли, они сожрали всю крупу и все нервы