2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Mechnikov I.I. _Nevospriimchivost v infekcionnyx boleznjax
.pdf272 |
ГЛАВА Vlll |
твор ·поваренной соли, последняя вызывает наименее сильный фаголиз, хотя еще и достаточно явный. Тотчас после впрыс кивания жидкостей количество лейкоцитов в брюшной лимфе
очень значительно .уменьшается, и клетки эти можно найти
сое.циненными в кучки на сальнике.
Многие из них обнаруживают явные признаки ослабле ния и частичного разрушения. Рядом с лейкоцитами нахо
дятся фибринные массы; это подтверждает, что часть лейко
цитов подверглась сильному повреждению и выпустила
фибрин-фермент, вызвавший свертывание фибi>ина. Когда П н е р а л л и н и впрыскивал жидкости, заключающие су
спендированные красящие вещества в порошке, как тущь
IJЛИ киноварь, то он видел, что вещества эти скопл~лиеь на
сальнике, который акрашивалея в черный или .красный цвет.
Микроскоnическое исследование обнаруживало слабый фаго цитоз и множество свободных красящих. зерен среди фнбрин
яых волокон.
Лейкоциты, высвобождающие фибрин-фермент во время
этого фаголиза, могут точно так же выделять известное ко
личество своего |
микроцитаза. Последний, переходя в |
брюш· |
|
ную жидкость, |
и вызывает |
пфейфферовское явление. |
Если |
предположение |
это верно, |
то устранение фаголиэа должно |
бы мешать зернистому перерождению вибрионов. Гипотезу эту .нетрудно проверить, так как мы имеем средство поме шать или по крайней мере значительно уменьшить фаголиэ.
В работе, выполнеп.ной в лаборатории П ф е й ф ф е р а,
И с а е в 1 показал, что впрыскивание физиологической воды, бульона, мочи и т. д. возбуждает лейкоциты и притягивает
значительное количество их в брюшную полость. Легко было предвидеть, · что такое впрыскивание у;меньшит фаголиз.
И в самом деле, если сначала' впрыснуть несколько кубиче
ских сантиметров |
физиологической |
воды или |
свежего буль |
ОI~а в брюшную полость морской свинки и на следующий день |
|||
повторить ту же |
операцию, то можно удостовериться, что |
||
фаголиз гораздо |
слабее, чем после |
первого |
впрыскивания. |
|
... |
|
|
1 Zeitschrift fiir Hygierie, 1894, т. XXIV, стр. 287.
ОБЗОР ФАКТОВ ПРИОБРЕТЕННОГО ИММУНИТЕТА |
273 |
П и е р а л л и н и, повторивший эти опыты, наблюдал, что
фагоцитоз красящих зерен гораздо полнее у морских сви
нок, подготовленных предварительным впрыскиванием в
брюшную полость. В этом случае количество фибрина на
сальнике гораздо слабее и все происходящие при этом явле·
ния вообще показывают, что повреждение лей.коцитов у этих
морских свинок очень ослаблено.
Нам удалось установить, что в том случае, когда фаго
лиз ослаблен таким образом, пфейфферовское явление не
воспроизводится или же обнаруживается в очень слабой
степени. Если опыт удался, то жидкость, взятая из брюшной·
полости морской свинки, подготовленной накануне и приви той холерной культурой, непрозрачна и rуста, как гной. Она заключает множество хорошо сохраненных лейкоцитов, боль
шое число которых уже через несколько минут наполняется
вибрио·нами. Плазма этого экссудата заключает много виб
рионов, сохранивших свой нормальный вид и, за немногими
исключениями, не превращенных в зерна.
Немного позже не остается вовсе свободных вибрионов:
все они внутри лейкоцитов.
П ф е й ф ф е р 1 восстал против вышеприведенных мной
фактов, потому что ему никогда не удавалось помешать зер
нистому перерождению вибрионов, несмотря на предвари тельное впрыскивание хлористого натрия. А б е ль 2, повто
ривший те же опыты, высказывает среднее мнение: в то
время как у морских свинок, подготовленных впрыскиванием
накануне, он наблюдал зернистое превраiцение части вибрио
нов, другая часть их становилась добычей лейкоцитов. Дело в том, что устранение фаголиза требует особенных
условий:· впрыскиваемый бульон должен быть свежеприготов
ленным и нагретым до 37-39° до введения в брюшную по лость. Даже при таких предосторожностях случается иногда,
что опыт нехорошо удается. Делая его, следует руководство
ваться видом брюшной жидкости, которую берут с помощью
маленьких стеклянных трубочек. Если жидкость, дроникаю-
1 Deutsche medi;lnlsche Wochenschrlft, |
1896, стр. |
120•. |
• ZentraiЬiatt fiir Bakteriologie, 1896, |
т. ХХ, стр. |
761. |
274 |
ГЛАВА VIII |
щая в трубку, прозрачна или же мутна, то это указывает
· на то, . что nроизошел фаголиз, несмотря на nодготовитель
ное впрыскивание.
Опыт хорошо удается в случае, когда брюшной экссудат
очень мутен и походит на гной.
Так как очень существенно установить совместное уст
ранение пфейфферовского явления и фаголиза, то я просил
Г а р н ь е 1. выnолнить новые оnыты с цеJ}ью окончательно
решить этот вопрос. Он испробовал целый ряд жидкостей
для nредварительной nодготовки животных и nок.азал, что
свежий бульон дает наилучшие результаты. У морских сви
нок, у ·которых удалось свести фаголиз до минимума, фаго
цитоз наступал после вnрыскивания вибрионов. Уже от двух
до nяти минут вслед за тем множество ·микробов находилось
внутри лейкоцитов; свободные же микробы в то время были
малочисленны и не nретерпевали nфейфферовского nревра
щения.
Г а р н ь е nрисоединяет к своей статье фотографическИе
снимки лейкоцитов, nереnолненных вибриоltами, вид которых
должен убедить наиболее скептического читателя. Со вре
мени п.оявления этой статьи не было высказано ни одноГо
возражения, так что воnрос об устранении зернис_того nре вращения вибрионов может считаться окончательно установ ленным. Я, вnрочем, показал это многим наблюдателям, ко торые могли удостовериться в действительности этого фа,кта.
Итак, следует признать, что nфейфферовское явление про исходит в брюшной полости только под условием фаголиза.
И так как ввиду этого очень вероятно, что микроцитаз.
необходимый для nревращения вибрионов, высвобождается
из поврежденных лейкоцитов, то следует nроверить это nред
положение рядом других опытов.
Если гипотеза эта верна, то nфейфферовское · явление
не должно было бы совершаться в тех частях тела, где нет
или почти нет предсуществующих лейкоцитов. Условия эти могут быть выполнены при впрыскивании холерных вибрио
нов в подкожную клетчатку или в""переднюю камеру глаза
1 Annales de I'lnstitut Pasteur, 1897, т. Xl, стр. 767.
ОБЗОР ФАНТОВ ПРИОБРЕТЕННОГО ИММУНИТЕТА |
27,5 |
морских свинок, хорошо вакцинированных против холерного
вибриона. При этих условиях вибрионы сохраняют свою нор·
мальную форму и никогда не превращаются в зерна, как мне
удалось показать это в своей работе о внеклеточном разру·
шении холерных вибрионов.
П ф е й ф ф ер возражал про:rив этого результата, утверждая, что под кожей вакцинированной морской свинки
правильным образом происходит зернистое преврашение,
хотя слабее и позже, чем в брюшной полости.
Противоречие между опьrrами П ф е й ф ф ер а и моими объясняется следующим образом.
l(огда прививают вибрионы в подкожную клетчатку или когда берут образовавшийся в ней экссудат, то иногда про·
изводят при этом маленькие кровоизлияния: это вызывает
освобождение известного количества микроцитаза из лейко
цитов, находящихся в кровоизлиянии и также выделяющих в
излившуюся кровь часть своего фибрин-фермента. Когда
оnыт удается, т. е. когда не происходит никакого кровоизлия
ния во время оперирования, то экссудат nодкожной клет
ча.тки содержит одни нормальные вибрионы без следа nфейф·
феровскоrо явленАя в жидкости.
Если бы настоящей nричиной nриобретенного иммуни
тета было внеклеточное зернистое превращение вибрионов, то
отсутствие этого явления в ·nодкожной клетчатке вакцини· ровэнных морских свинок должно было бы nривести к
смерти.
В действительности же ничего nодобного не происходит,
и животное отлично выдерживает прививку вибрионов. Вы вод этот, однако, допускает серьезное возражение. Так как
вбольшинстве случаев холерный вибрион, привитый под
кожу, не в состоянии вызвать смертельной инфекции лаже у
новых, не вакцинированных, свинок, тd nример этот надо от
нести к естественному иммунитету. В действительности же
этот роц иммунитета может зависеть от других причин, чем
приобретенная невосприимчивость.
Чтобы ответить на это возражение, пришлось выбрать
такую расу вибрионов, ко;ТОRаЯ была бы сnособна убивать
при nодкожном впрыскивании.
276 |
ГЛАВА VIII |
М е н и л ь 1 взялся в моей лаборатории выполни.ть опы ты с вибрионом М а с с а у а, призванным некоторыми наблю
дателями за холеравидного вибриона.
Привитый под кожу новых морских свинок, он вызы
вает образование отека, в котором кишат микробы; в<;коре
,они распрьстраняются в организме и убивают его в 24 часа,. И, однако, вибрионы эти, впрыс~утые под кожу хорошо вак
цинированной морской свинки, вполне переносятся · ею, без
малейшего пфейфферовского явления. При этих условиях
часть вибрионов сначала соединяется в кучки, хотя остается довольно значительная часть. изолированных и свободных
микробов. Через несколько часов после прививки числq
скоплений уменьшается; ~золированные вибрионы становятся многочисленнее, что указывает на известное приспособление
микроба к среде, в которой он находится. Но вибрионы ни·
когда не превращаются в зерна, пока они остаютс'я свобод
ными в экссудате подкожной клетчатки.
С а л и м б е н и 2 в работе, выполненной в моей лабора тории, хотел убедиться, происходит ли пфейфферовское явле ние в подкожной клетчатке лошади, усиленно иммунизиро
ванной против холерного вибриона. Животному этому в те·
чение 14 месяцев прививали его в значительном количестве
и серум крови очень сильно и быстро превращал вибрионов
в зерна. И тем не менее, несмотря на столь благоприятные
условия для пфейфферовского явления, последнее никогда
не происходило под кожей лошади. Впрыснутые вибрионы
через короткое время становились совершенно неподвиж
ными, но сохраняли свою форму и жили в течение несколь
ких часов. Экссудат, взятый через 48 часов после прививки,
давал еще культуру холерного вибриона.
Так как в nереднюю глазную ·камеру легче ввести хо
л'ерные вибрионы, чем под кожу, не производя кровоизлия
ния, и. так как глазная влага не содержит фиксатора, то
П ф е й ф ф е р |
сам мог убедиться |
в |
отсутс·rвии зернистого |
||||
иревращения |
в |
ней. НаблюденJ,~.е |
этого |
факта |
не · представ· |
||
1 |
Attnales |
de |
l'lnstitut Pasteur, 1896, т. Х, |
стр. 315. |
|
||
11 |
Annales |
de |
I'Institut Pasteur, 1898, |
т. |
XII, стр. |
199. |
ОБЗОР ФАНТОВ ПРИОБРЕТЕННОГО ИММУНИТЕТА |
277 |
ляет никакого затруднения, и можно видеть в течение дол
гого времени, как свободные и вполне nодвижные вибрионы
быстро двигаются в глазной влаге.
Глазной' экссудат заключает много таких живых вибрио
нов ·и сделаные из него посевы прорастают даже тогда, когда
жиДкость взята из глаза через несколько дней после прививки.
Совокупность всех этих тщательно установленных фак
тов вполне доказывает, что микродитаз в жидкостях живого
животного находится только там, где есть много nредсуще
ствующих лейкоцитов и при условии более или менее силь
ного фаголиза. Вывод этот можно подтвердить опытом,
имеющим решающее значение. Если хорошо вакцинированной
против хо;Iерного вибриона морской свинке, серум которой in vitro очень быстро производит пфейфферовское явление, впр·ыснуть эмульсию этих микробов прямо в вену, то послед
ние не претерпевают зернистого перерождения.
Опыт этот быЛ выполнен и описан Б о р д э 1• Впрыснув
в яремную вену хорошо вакцинированной против холерного
вибриона морской свинки эмульсию этого микроба, он вскрыл
животное через полчаса и нашел в крови сердца вибрИоны,
не изменившие свою форму и способные окрашиваться мети леновой синькой. Посевы из крови ~ердца, из печени и се
лезенrш дали культуры этих вибрионов. У другой, гипервак
цинированной к этому микробу и привитой тем же способом морской свинки кровь, взятая .вскоре (4-15 минут) затем,
содержаЛа, как было видно на nрепаратах, окрашенных ме тиленовой синькой, хорошо окрашенные вибрионы; не изме нившие своей формы и. совершенно неповрежденные.
Это служит наиболее прямым доказательством отсут
ствия пфейфферQвского яВления в кровяной жндкос:ги живого
животного, имеющего очень сильно развитую искусственную
невосприимчивость. Не изменившие форму вибрионы находи
лись внутри лейкоцитов.
Л е в а·д и т и 2 повторил эти опыты у меня в лаборато рии. Он разнообразил условия, при которых впрьiскивал виб-
1 Annales de !а Societe des sciences medicales et naturel!es de Bruxelles, 1895, т. IV.
111 Annales de l'lnstitut Pasteur, 1901, т. XV.
278 |
ГЛАВА VIII |
рионы в кровяные сосуды. Иногда ему удавалось наблюдать
фаголиз лейкоцитов в кровИ и их почти полное исчезновение
из периферического кровообращения.
В этих случаях поврежденные лейкоциты .скоплялись в
легочных капиллярах, причем множество их окружало массу
в•1брионов, превращенных в зерна. Но фаголиза можно легко избегнуть, подготовив животных впрыски~анием физиологи
ческой воды или бульона. При эти:к условиях фагоциты остаются в кровяном потоt<:е и вскоре поглощают вибрионов.
Но, в то время как вибрионы, остающиеся еще свободными
вкровяной плазме, сохраняют неприкосновеннь1ми свою
форму и способность окрашиваться, те из них, которые за
ключены внутри микрофагов, большей частью превращены в
зерна. Быстрота, с которой фагоциты эти поглощают и видо·
изменяют вибрионов, поистине удивительна.
Итак, в этом случае, представляющем нам типичный при
мер реакции организма при приобретенном иммунитете, мы
видим очень резкий и почти мгновенный фагоцитоз. Процесс
этот тот же, как и описанный нами у вакtrинированных мор ских свинок, у которых фаголиз отсутствовал вследствие под готовительных впрыскиваний. В подкожной клетчатке и в передней камере глаза, где пфейфферовское явление по стояннQ отсутствует, фагоцитоз следует своему обыкновен ному nути и приводит к уничтожению вибрионов. Результат этот был много раз подтвержден, как это видно из работ
Б о р д э, М е н и л .и и С а л и м б е н и.
Стоит TOJJЬKO сравнить распространенность пфейфферов
ского явления с фагоцитозом у животных, иммунизированных против холерного вибриона, чтобы убедиться в ограничен
ности первого явления и в общности второго. МоЖно было
бы противоnоставить этому последнему выводу отсутствие
поглошения вибрионов. в брюшной жидкости морских сви
нок, иммунизированных, но не предохраненных против фа
rолиза.
Когда вскоре после впрыскивания вибрионов в брюшную
...
полость из нее вытягивают немного перитонеального экссу-
дата помощью тоненькой трубочки, то действительно набл.ю дают одно только очень сильное пфейфферовское явление;
ОБЗОР ФАКТОВ ПРИОБРЕТЕННОГО ИММУНИТЕТА |
279 |
фагоцитоз же почти или вполне оrсутствует. Но этот способ
не удовлетворителен. l{ля того чтобы составить себе понятие о том, что действительно происходит в брюшной полости,
необходимо вскрыть животное и тщательно осмотреть брю
шину и особенно сальник.
Как было показано сначала М а к с о м Г руб ер о м\ а
позднее К а н т а кузен о м 2, сальник в этом случае покрьrr то.1стым слоем. соДержащим большое количество лейкоцитов,
часть которых наполнена вибрионами. Кроме того, слой этот
заклюttает массу вибрионов, отчасти превращенных в зерна,
отчасти агглютинированных или изолированных и не изме
нивших своей формы вибриона. С течением времени фагоци
тоз становится все более и более резким, так что невоз
можно отрицать его существование или же приписывать ему
второстепенную роль. ·
Мы видели, что устранение пфейфферовского явления в
брюшной полости и в крови или же полное отсутствие его в nодкожной клетчатке и в передней глазной камере tшсколько не лишало вакцинированную свинку ее приобретенного имму.
нитета. Она отлично выносит прививку вибрионов, причем
последние в жидкостях ее не превращаются в зерна.
И, однако, превращение это существует, но исключительно внутри фагоцитов. Как было уже изложено относительно
естественной невосприимчивости (глава VI, VII), nоглощен
ные микрофагами вибрионы почти тотчас претерnевают в них совершенно сходное пзменение формы с тем, которое
наблюдается при настоящем пфейфферовском явлени·и.
Микрофаги часто наполнень1 множеством зерен, nронешед ших из поглошенных вибрионов, -которые вскоре совершенно
перевариваются.
Этот постоянный nри фагоцитозе вибрионов факт дает
нам еше лишнt:'е доказательство микрофагнаГо происхожде
ния микроцитаза.
Если пфейфферовское явление представляет только част
ный |
случай, . |
при котором зернистое перерождение виб- |
||
1 |
Milnchener |
medizinische Wochenschrift, |
1896, |
стр. 277 и 310. |
2 |
Annales de |
l'lnstitut Pasteur, 1898, т. |
Xll, |
стр. 273. |
280 |
ГЛАВА VIII |
рионов происходит в жидкости, содержащей микроцитаз, 1'0
совершенно естественно, что устранение его не. влечет за
собой смертельной инфекции предохраненных животных. На
оборот, если столь распространенная фагоцитарная реакция
играет действительно существенную роль в приобретенном
иммунитете, то все, что мешает ей, должно в то же время
нарушать и невосприимчивость..С целью 'разрешить эту за
дачу I< а н т а к уз е н 1 предпринял в моей лаборатории по
дробное исследование на этот счет.
Он установил, что впрыскивание опиума в несмерте.'lьной
дозе наркотизирует морскую свинку и в то же время оста
навливает подвижность лейкоцитов.
Еr~и под кожу вакцинированной морскоn свинки ввести маленькие стеклянные трубочки с холерными вибрионами,
то у ненаркотизированного животного они наполняются мно·
жеством лейкоцитов. У морской же свинки, получившей
опиум, введенные трубочки в течение нескольких часов не заключают лейкоцитов и клетки эти проникают в них только позднее. Итак, когда I< а н т а кузен впрыскивал в брюш ную полость прочно вакцинированной морской свинки боль
шую дозу холерного вибриона, то животное легко выносило прививку. Но свинки эти, подверженные влияниiо . опиума, умирали от такой же. дозы вибрионов:
Несмотря на значительное расширение и гиперемию со
судов и на сильное увеличение количества лейкоцитов крови,
в первые часьr после впрыскивания опиума у наркотизиро
ванных животных не происходит диапедеза. Только ·позднее
(через 5-6 часов после впрыскивания). в брюшной полости начинают появляться лейкоциты. Вибрионы пользуются nе риодом бездействия фагоцитов ~ размножаются, сохраняя свою подвижность и способность окрашиваться Qсновными анилиновыми красками. I<огда запоздалые лейкоциты прите
кают в брюшную полость, они находят ее уже наводненной
массой вибрионов. Несмотря на это, лейкоциты, а именно ·
микрофаги, поглощают г.Ромадное количество микробов. Это,
однако, не мешает гибели морских свинок, хотя и наступаю·
1 Annales de l'lnstitut Pasteur, 1898, т. Xll, стр. 288.
ОБЗОР ФАКТОВ ПРИОБРЕТЕННОГО ИММУНИТЕТА |
281 |
щей несколько часов nозднее, чем у непредохраненных сви детелей.
В минуту смерти экссудат не содержит больше свобод ных вибрионов, так как все они поглощены микрофагами,
внутри которых nодверглись зернистому превращению. При
вскрытии животного на сальнике наблюдается большое ко~
личество маленьких вибрионов, никогда не встречающихся
уненаркотизированных животных.
Итак, достаточно было только на несколько часов за
медлить фагоцитарную реакцию, для того чтобы прочно вак
цинированные морские свинки погИбли ·от вибрионов. По
нятно, что ввиду такого результата можно, не колеблясь, приписать фагоцитозу гораздо более существенную роль в приобретенной невосприимчивости, чем пфейфферовскому
явлению.
Изучение других болезней, вызванных вибрионами,
только подтверждает общие выводы, вытекающие из подроб
ноrо исследования внутренних nроцессов nриобретенной не
восnриимчивости к холерному вибриону. Мы должны здесь
наnомнить читателю открытие Бери н г а и Н и с э н а _очень резкой бактерицидной способности кровяной сыворотки мор
ских свинок, предохраненных nротив гамалеевского вибри
она. В те времена, когда впервые был найден этот факт, :можно было думать, что сnособность крови убивать вибрио
нов могла одна, сама по себе, объяснить приобретение имму
нитета.
Но сравнительное изучение явлений, происходящих вне
живого организма и внутри него, вскоре доказа-ло неоснова
тельность этой гиnотезы.
В то время как вибрионы, посеянные в серуме гипервак
цинированных морских свинок, погибают в нем в очень
большом количестве, а иногда и вnолне, те же микробы, при
витые в подкожную клетчатку тех же животных, остаются
живыми в течение нескольких дней. Вибрион Г а м а л е и
гораздо менее холерного склонен к зернистому nерерожде
нию и встречается .невидоизмененным даже внутри лейкоци
тов. Следовательно, в этом случае нечего искать пфейффе
ровского явления.