- •Молекулярно- генетические исследования, ПЦР в диагностике заболеваний
- •МОЛЕКУЛЯРНАЯ
- •МОЛЕКУЛЯРНАЯ
- •МОЛЕКУЛЯРНАЯ
- •МОЛЕКУЛЯРНАЯ ДИАГНОСТИКА
- •ПЦР в диагностике заболеваний
- •ПЦР в диагностике заболеваний
- •ПЦР в диагностике заболеваний
- •Что такое ПЦР
- •Особенности метода
- •Изобретение
- •Механизм ПЦР
- •Стадии постановки ПЦР
- •Пробоподготовка (подготовка пробы биологического материала)
- •На чем основана амплификация
- •Механизм ПЦР
- •Детекция
- •Стадии
- •Как все происходит
- •Экспоненциальная
- •Проблема контаминации
- •Варианты контаминации продуктами амплификации
- •Изобретение флуоресцентной ПЦР
- •Флуоресцентные методы в ПЦР
- •Флуоресцентные методы в ПЦР
- •Флуоресцентные методы в ПЦР
- •Флуоресцентные методы в ПЦР
- •Флуоресцентные методы в ПЦР
- •Флуоресцентные методы в ПЦР
- •Флуоресцентные методы в ПЦР
- •Флуоресцентные методы в ПЦР
- •Флуоресцентные методы в ПЦР
- •Флуоресцентные методы в ПЦР
- •Флуоресцентные методы в ПЦР
- •Флуоресцентные методы в ПЦР
- •Флуоресцентные методы в ПЦР
- •Основы «флуоресцентной» ПЦР
- •Основы «флуоресцентной» ПЦР
- •Варианты флуоресцентной ПЦР
- •Кинетические кривые PCR
- •Сравнение принципов качественного и количественного ПЦР анализа
- •Флуоресцентные методы в ПЦР
- •Особенности «флуоресцентной» ПЦР
- •Тест-системы для “real-time” PCR
- •Организация ПЦР-лаборатории
- •Устройство ПЦР-лаборатории с
- •Устройство ПЦР-лаборатории с
- •Устройство ПЦР-лаборатории с флуоресцентной детекцией (количественный анализ)
- •Основы «флуоресцентной» ПЦР
- •Основы «флуоресцентной» ПЦР
- •Нанодиагностика (обнаружение ДНК)
- •Контроль за прохождением реакции
- •Качественный и количественный анализ
- •Эпоха ПЦР
- •Особенности «классической» ПЦР
- •Особенности «флуоресцентной» ПЦР
- •Применение ПЦР
- •Применение ПЦР
- •Медицина
- •Гемотрансфузионные инфекции
- •ПЦР в диагностике ВИЧ
- •Гемотрансфузионные инфекции
- •Оппортунистические инфекции
- •ИППП
- •ПЦР в диагностике ИППП
- •Заболевания дыхательной системы
- •Диагностика наследственных заболеваний
- •Онкология
- •Иммунология
- •Эпидемические инфекции
- •HLA-типирование
- •Ветеринария
- •ПЦР в ветеринарии
- •ГМО - генетически модифицированные организмы
- •Организация контроля за ГМИ
- •Пострегистрационный мониторинг
- •Современные тенденции развития ПЦР
- •Количественный анализ: ДТ- 322
- •Принципы количественного анализа в real-time ПЦР
Применение ПЦР
Промышленность
-определение биологического загрязнения (санитарный контроль)
Санитарно-эпидемиологический контроль
Вирусология
Микробиология
Определение ГМИ пищевых продуктов
Судебная медицина
- Идентификация личности
Медицина
Гемотрансфузионные инфекции (качественное и количественное определение)
Оппортунистические
инфекции
ИППП
Заболевания дыхательной системы (туберкулез и др.)
Эпидемические инфекции
HLA-типирование
Исследование биоценозов
И др…
Гемотрансфузионные инфекции
качественное определение
ПЦР покажет присутствие вирусов в период «серологического окна» ВИЧ и гепатитов
С 1999 года в странах ЕС генотестирование стало обязательным для всей донорской крови и плазмы
ПЦР в диагностике ВИЧ
Методом ПЦР определяют непосредственно гены ВИЧ, он незаменим при диагностике ВИЧ-инфекции:
в серонегативный период;
исследовании банков крови и препаратов из крови;
при неопределенных результатах ИФА;
у детей, рожденных ВИЧ-инфицированными матерями (персистенция материнских антител у ребенка может достигать 15 мес.);
при одновременной диагностике множественных инфекций, встречающихся при СПИДе;
при дифференциальной диагностике между ВИЧ-1, ВИЧ-2 и другими
вирусными заболеваниями,
определении соотношения между клеточным и внеклеточным вирусом,
при испытаниях на животных химиопрепаратов и вакцин против СПИДа.
Гемотрансфузионные инфекции
количественное определение
Количественное определение (вирусная нагрузка) используется для мониторинга эффективности противовирусной терапии (ВИЧ, гепатиты В и С)
Генотипирование вируса
гепатита С позволяет прогнозировать
эффективность лечения
Оппортунистические инфекции
Протозойные инфекции – пневмоцистная пневмония
Грибковые инфекции – генерализованный кандидоз
Вирусные заболевания - генерализованные инфекции, вызванные вирусом простого герпеса, CMV, EBV, паповавирусом, распространенный опоясывающий лишай.
Бактериальные инфекции - могут протекать нетипично
ИППП
хламидиоз, микоплазмоз, трихомониоз, уреаплазмоз, гонорея и др.
Часто протекают бессимптомно
Часто встречаются атипичные формы, трудно диагностируемые обычными методами (микроскопия мазка)
Микст-инфицирование
Крайне неприятные
последствия
ПЦР в диагностике ИППП
Можно определить следующие показания к выявлению T. urogenitalis, N. gonorrhoeae,
M.genitalium, C. trachomatis и др. методом ПЦР:
-латентное, бессимптомное течение заболевания
-Выявление возбудителя на фоне микст- инфекции
- Контроль эффективности лечения
- Контроль объективности микроскопического
исследования - Проведение скрининговых исследований
Заболевания дыхательной системы
туберкулез
Туберкулез – социально-значимое заболевание
Традиционные методы требуют либо большого кол-ва бактерий (105 в мл) либо длительного срока ожидания результата (до 2-х месяцев)
Трудности диагностики внелегочных форм туберкулеза традиционными методами
Возможно определение чувствительности МБТ к ряду химиотерапевтических препаратов за 1 день вместо 3 недель