Сравнение принципов качественного и количественного ПЦР анализа
количество копий
|
процесс амплификации |
|
|
|||||
|
|
CT |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
34 |
|
|
|
|
|
|
|
|
32 |
|
|
|
|
|
|
|
|
30 |
|
|
|
|
|
|
|
|
Ct |
|
|
|
|
|
|
|
|
28 |
10 |
15 |
20 |
25 |
30 |
35 |
40 |
45 |
26 |
|
|
|
|
|
|
|
|
номер |
|
|
номер цикла |
|
|
|
24 |
||
|
|
|
|
|
22 |
|||
|
|
|
|
|
20 |
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
18 |
качественный
анализ
количественный анализ
|
|
|
|
y = -3,34x + 43,34 |
|
|
|
|
|
R2 = 0,998 |
|
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
|
|
|
logNo |
|
|
Флуоресцентные методы в ПЦР |
|
FLASH (FLuorescent Amplification-based Specific Hybridization) |
|
|
Гибридизация во время амплификации |
|
– зонды -"шпильки" ("beacons") |
|
Детекция после амплификации |
|
– качественный анализ |
|
ДНК- |
Особенности «флуоресцентной» ПЦР
Высокая чувствительность
Высокая специфичность
Универсальность
+
Решение проблемы контаминации
Возможность количественного анализа
Технологичность 
Тест-системы для “real-time” PCR
Количественные тест-системы
HCV, HBV, HIV (на стадии регистрации)
ГМИ (соя, кукуруза)
Качественные тест-системы:
Бактериальные инфекции
Грибковые инфекции
Вирусные инфекцииПротозойные инфекцииГМИ
Организация ПЦР-лаборатории
c использованием метода электрофореза
c использованием флуоресцентной детекции
качественный анализ (Джин)
c использованием флуоресцентной детекции
количественный анализ (ДТ-322,
iQiCycler)
Устройство ПЦР-лаборатории с
детекцией электрофорезом
|
Рабочее место |
|
1.Зона подготовки реакционной |
Рабочее место |
|
Пробоподготовка |
||
смеси (чистая зона) |
||
• ПЦР-бокс |
|
|
• Микроцентрифуга вортекс |
Амплификация |
|
• Набор одноканальных дозаторов |
||
Чистая зона |
||
• Штативы (рабочее место + хранение) |
||
• Холодильник |
|
|
2. Зона пробоподготовки |
Рукомойник |
|
|
||
• ПЦР-бокс |
|
|
• Твердотельный термостат |
|
•Микроцентрифуга вортекс
•Высокоскоростная центрифуга
•Насос с колбой-ловушкой
• Набор одноканальных дозаторов |
Зона детекции |
• Штативы (рабочее место + хранение) |
(другой этаж или другое здание) |
• Холодильник |
|
• Амплификатор |
|
3. Зона детекции |
|
|
• Источник питания |
|
|
• Камера для электрофореза |
Форез |
|
•Трансиллюминатор |
||
|
||
• Видеосистема |
|
Устройство ПЦР-лаборатории с
флуоресцентной детекцией (Джин)
|
Рабочее место |
|
|
Рабочее место |
|
1.Зона подготовки реакционной |
Пробоподготовка |
|
|
||
смеси (чистая зона) |
Амплификация |
|
• ПЦР-бокс |
Джин |
|
• Микроцентрифуга вортекс |
Чистая зона |
|
• Набор одноканальных дозаторов |
||
|
||
• Штативы (рабочее место + хранение) |
Рукомойник |
|
• Холодильник |
|
|
2. Зона пробоподготовки |
|
• ПЦР-бокс |
|
|
• Твердотельный термостат |
|
|
|
||
• Микроцентрифуга вортекс |
Зона детекции |
|
• Высокоскоростная центрифуга |
(другой этаж или другое здание) |
|
• Насос с колбой-ловушкой |
||
|
||
• Набор одноканальных дозаторов |
|
• Штативы (рабочее место + хранение) |
|
• Холодильник |
Форез |
• Амплификатор |
|
• ДЖИН |
|