6 курс / Клинические и лабораторные анализы / Стандартизация_аналитических_технологий_лабораторной_медицины_Выпуск

ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет им. И. М. Сеченова Минздрава РФ

Научно-исследовательский институт общественного здоровья и управления здравоохранением

Лаборатория проблем клинико-лабораторной диагностики Научно-практическое общество специалистов лабораторной медицины

Стандартизация аналитических технологий лабораторной медицины

Выпуск 2

Под редакцией В. В. Меньшикова

Приложение к журналу «Клиническая лабораторная диагностика» № 7/2013

Выпущено при финансовой поддержке

ООО «Бекмен Культер» и ООО «ГЕМ»

Издательство «Медицина»

2013

Стандартизация лабораторных технологий – продолжение процесса

В. В. Меньшиков

ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет им. И. М. Сеченова Минздрава РФ

Настоящий – второй – выпуск сборника «Стандартизация аналитических технологий лабораторной медицины» отражает очередной этап процесса упорядочения арсенала аналитических технологий, которыми располагают клинико-диагностические лаборатории медицинских организаций. Выпуск 1, содержащий в основном технологии, стандартизованные в предшествующие годы и рекомендованные к предпочтительному применению решением конференции в 2011 г., был опубликован в 2012 г. [1]. Как уже отмечалось ранее, лабораторные диагностические исследования осуществляются в чрезвычайно изменчивой среде биологических материалов организма человека, пораженного патологическим процессом, и преследуют цели объективной оценки не менее изменчивых биологических объектов эндогенного и экзогенного происхождения: химических соединений и клеточных элементов разнообразной структуры и свойств, микроорганизмов различного вида и рода. В условиях разнообразия имеющихся в литературе вариантов методик исследования и широкого выбора предлагаемых изготовителями отличающихся некоторыми свойствами тест-систем реагентов КДЛ порой попадают в довольно сложную ситуацию: добросовестно выполнив инструкцию изготовителя тест-системы, теряют взаимопонимание с получившим результат анализа клиницистом. Более того, различие референтных интервалов при применении тест-систем разных изготовителей может вызвать ошибочную трактовку результата исследования и неправильные диагностические и лечебные решения врача. С этих позиций, стандартизацию лабораторных технологий можно рассматривать как одно из средств обеспечения клинической безопасности пациентов.

В связи с этим выбор и обеспечение постоянных, проверенных условий лабораторного исследования для получения аналитически, биологически и клинически достоверной информации являются

Стандартизация аналитических технологий лабораторной медицины

настоятельной необходимостью современной лабораторной медицины во всех ее разделах. Разработка стандартизованных аналитических технологий может служить способом формирования таких условий, которые можно воспроизвести в лабораториях большинства медицинских организаций с использованием валидированных средств анализа.

На общероссийской научно-практической конференции Общества специалистов лабораторной медицины в октябре 2012 г. в ходе специализированных заседаний были подведены итоги деятельности рабочих групп и обсуждены предварительно опубликованные в течение 2012 г. проекты технологий в трех видах исследований: микробиологических, иммунологических и цитологических [ 2–4 ]. Материалы данных заседаний были также опубликованы [5–7]. На основании результатов этого обсуждения конференция постановила рекомендовать эти технологии для предпочтительного применения в клинико-диагности- ческих лабораториях. Тщательно отредактированные окончательные варианты технологий публикуются в данном выпуске.

Приведенные технологии относятся к различным разделам лабораторной медицины. Существенно различаются как методические принципы, так и применяемые средства анализа. Не одинакова и частота применения тестов в клинической практике. Однако практическая значимость стандартизации технологии в каждом из видов исследований в равной степени велика.

Бактериологический анализ мочи является наиболее часто применяемым тестом среди представленных в данном выпуске анализов. Судя по данным литературы, он часто дает ненадежный результат, хотя предоставляемая им информация имеет весьма существенное клиническое значение.

Фенотипирование лимфоцитов служит одним из эффективных методов в клинической иммунологии. Применение иммунофлюоресцентных анализаторов – проточных цитометров выводит этот метод лабораторных исследований на современный технологический уровень.

Внедрение способов жидкостной цитологии существенно рационализирует практику рутинных цитологических исследований.

По предложению руководства Издательства «Медицина» данный выпуск будет доставлен подписчикам журнала «Клиническая лабораторная диагностика», что можно рассматривать как содействие внедрению в практику технологий, содержащихся в сборнике.

Следует отметить, что технологиями, представленными в двух выпусках сборника «Стандартизация аналитических технологий лабора-

Выпуск 2

6

торной медицины», не исчерпываются усилия Общества специалистов лабораторной медицины по разработке стандартизованных технологий. На конференции в октябре 2012 г. на двух специализированных заседаниях обсуждались также технологии молекулярной биологии и гемостазиологии [8, 9]. После обсуждения было решено продолжить работу над этими технологиями и поручить рабочим группам представить доработанные проекты на следующем общероссийском форуме в октябре 2013 г. В Правление Общества поступают новые предложения о разработке стандартизованных технологий для исследования еще ряда анализов.

Правление Общества обратилось в региональные отделения с просьбой познакомиться с тем, в какой мере в лабораториях используют стандартизованные технологии в повседневной практике [10]. Судя по информации из 14 регионов 6 Федеральных административных округов, в т. ч. по конкретным данным о применении требований стандартов и стандартизованных технологий в 323 лабораториях (городских, сельских учреждений, централизованных лабораториях) из 6 регионов Центрального, Приволжского, Северо-Кавказского и Сибирского административных округов, применение стандартизованных технологий в той или иной мере имеет место в 34–82% лабораторий. При этом практически из всех регионов поступили сигналы о периодически возникающих серьезных сбоях в работе вследствие приобретения (по результатам тендеров для государственных и муниципальных закупок) реагентов, не соответствующих по своим свойствам требованиям обычно применяемых налаженных методик [11]. Следовательно, реальная практика стандартизации аналитических технологий испытывает серьезные затруднения в современных условиях организации материального обеспечения деятельности лабораторий.

Литература

1.Стандартизация аналитических технологий лабораторной медицины. Выпуск 1. П / ред. В. В. Меньшикова. Лабора, М., 2012, с. 367.

2.Хайдуков С. В., Байдун Л. А., Зурочка А. В., Тотолян А. А. Стандартизованная технология «Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови с применением проточных цитофлюорометров-анализаторов (проект) // Проблемы стандартизации в здравоохранении, 2012, № 5–6, 28–44.

3.Козлов Р. Г., Меньшиков В. В., Михайлова В. С., Шуляк Б. Ф., Долгих Т. И., Круглов А. Н., Алиева Е. В., Маликов В. Е. Стандартизованная технология «Бактериологический анализ мочи» (проект) // Проблемы стандартизации в здравоохранении, 2012, № 5–6, 45–61.

Стандартизация аналитических технологий лабораторной медицины

4.Шабалова, И. П., Джангирова Т. В., Ниткитина Л. В., Касоян К. Т., Волченко Н. И., Савостикова М. В., Пименова Л. М., Костючек И. Н., Назарова И. В., Лешкина Г. В. Стандартизоыванная аналитическая технология «Метод жидкостной цитологии» // Проблемы стандартизации в здравоохранении, 2012, № 7–8, 48–58.

5.Стандартизация технологии иммунофенотипирования лимфоцитов методом проточной цитометрии // Клиническая лабораторная диагностика, 2012, № 9, 20–20.

6.Стандартизованная технология бактериологического исследования мочи // Клиническая лабораторная диагностика, 2012, № 9, 46–49.

7.Жидкостная цитология как стандартизованная технология приготовления препаратов // Клиническая лабораторная диагностика, 2012, № 9, 55–56.

8.Стандартизация молекулярно-биологических методов диагностики инфекций, передаваемых половым путем // Клиническая лабораторная диагностика, 2012, № 9, 49–50.

9.Стандартизация методов исследования системы метастаза // Клиническая лабораторная диагностика, 2012, № 9, 50–51.

10.Меньшиков В. В. Стандартизация в лабораторной медицине: потребности, пути, ограничения // Проблемы стандартизации в здравоохранении, 2012, № 1–2, 10–17.

11.Меньшиков В. В. О трудностях при применении стандартов в КДЛ // Клиническая лабораторная диагностика, 2013, № 5.

Выпуск 2

Стандартизованная технология

Стандартизованная технология «Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови

с применением проточных цитофлюориметров-анализаторов»

С. В. Хайдуков1, 2, Л. А. Байдун3, А. В. Зурочка4, Арег А. Тотолян5, 6

1 ФГБУ «Федеральный Научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Д. Рогачёва», Москва;

2 ФГБУН «Институт биоорганической химии им. академиков М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН», Москва;

3 ФГБУ Российская детская клиническая больница, Москва; 4 Учреждение РАН НИИ иммунологии и физиологии УрО РАН, Екатеринбург;

5 НИИ Эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург; 6 ФГБУ «Федеральный центр сердца, крови и эндокринологии

им. В. А. Алмазова» МЗ РФ, Санкт-Петербург.

Данная стандартизованная технология составлена в соответствии с заданием Правления Всероссийского научно-практического общества по клинической лабораторной диагностике. Первоначальный проект данного документа был опубликован в журналах: «Медицинская иммунология», 2012, Т. 14, № 3, с. 255–268 и «Проблемы стандартизации в здравоохранении», 2012, № 5–6, с. 28–44. Он был обсужден на научных и научно-практических мероприятиях различного уровня, проводимых Всероссийским научно-практическим обществом по клинической лабораторной диагностике, Российским научным обществом иммунологов и Санкт-Петербургским региональным отделением Российской ассоциации аллергологов и клинических иммунологов, а также в интернете на специализированном портале «АллергологиИммунологи (www. allergologi-immunologi. ru).

1.Цель исследования

Стандартизованная технология устанавливает единые требования к выполнению исследований субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови с применением многопараметровых

Стандартизация аналитических технологий лабораторной медицины

проточных цитофлюориметров-анализаторов в клинико-диагности- ческих лабораториях медицинских учреждений.

Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови является одним из наиболее широко применяемых показателей клинической лабораторной диагностики, позволяющий оценить состояние иммунной системы и ее нарушения при первичных и вторичных иммунодефицитных состояниях, аутоиммунных заболеваниях, воспалительных процессах, аллергических реакциях, онкологических

иинфекционных заболеваниях. Любые отклонения результатов лабораторного анализа от нормативных значений трактуются как патологические и требуют более тщательного клинического и функционального обследования пациента. Однако нормальные значения этих показателей могут встречаться не только у практически здоровых, но

ипри различных проявлениях иммунологической недостаточности, сопровождающейся анергией. Поэтому все результаты лабораторного анализа обязательно должны быть сопоставлены с клинической картиной заболевания.

Впоследнее время широкое применение многопараметровых проточных цитофлюориметров-анализаторов начинает вытеснять флюоресцентную микроскопию в анализе субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови при иммунологических исследованиях. Это происходит за счет более высокой производительности, быстроты анализа и меньших трудозатрат. Многопараметровые проточные цитофлюориметры-анализаторы позволяют автоматизировать процесс анализа лейкоцитов периферической крови, повысить производительность труда в лабораториях, улучшить качество, статистическую достоверность, точность измерения и получить дополнительные, высокоинформативные характеристики субпопуляционного состава клеток периферической крови.

Цель настоящей стандартизованной технологии, в соответствии с положениями системы менеджмента качества в медицинской лаборатории (ГОСТ Р ИСО15189-2009) [1], состоит в установлении единых правил доставки материала в лабораторию, требований к качеству образцов крови, порядка калибровки проточных цитофлюориметрованализаторов, выполнения исследования, контроля качества, регистрации и оценки результатов исследования с учетом аналитических характеристик конкретных моделей проточных цитофлюориметрованализаторов. Стандартизация и соблюдение указанных правил обеспечивает получение правильной информации о субпопуляционном составе клеток периферической крови.

Выпуск 2

2.Обозначения, термины, определения, сокращения

2.1.Употребляемые сокращения

БАД – биологически активные добавки. ВИЧ – вирус иммунодефицита человека.

CD – кластер дифференцировки (The Cluster of Differentiation).

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота. ИКК – иммунокомпетентные клетки.

НК – или NK (Natural killers) – натуральные (естественные) киллеры.

ПЦ – проточная цитофлюориметрия (цитометрия). СПИД– синдром приобретенного иммунодефицита.

2.2.Термины и определения

Проточная цитофлюориметрия – современная технология быстрого измерения характеристик клеток при помощи моноклональных антител или других зондов, позволяющая судить об их типе (по наличию того или иного набора клеточных маркеров) и их функциональном состоянии (по изменению протекающих в них процессах).

Иммунный статус – оценка состояния иммунной системы, включающая в обязательном порядке исследование основных субпопуляций лимфоцитов периферической крови пациентов. Клеточные элементы иммунного статуса пациентов определяют при помощи иммунофенотипирования.

Иммунофенотипирование – характеристика клеток при помощи моноклональных антител или других зондов, позволяющая судить об их типе и функциональном состоянии по наличию того или иного набора клеточных маркеров.

Собственные параметры клетки: морфологические параметры (размер и гранулярность), определяемые характеристиками светорассеяния (прямого и бокового).

Внешние параметры клетки: параметры, полученные в результате анализа клеток после флюоресцентного окрашивания поверхностных маркеров.

CD-маркеры – поверхностные молекулы клеточной мембраны лейкоцитов, тромбоцитов и эритроцитов, определяемые при помощи моноклональных антител. Могут служить маркерами различных клеточных популяций и их функций.

Стандартизация аналитических технологий лабораторной медицины