Добавил:
kiopkiopkiop18@yandex.ru Вовсе не секретарь, но почту проверяю Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

6 курс / Клинические и лабораторные анализы / Руководство_ВОЗ_по_исследованию_и_обработке_эякулята

.pdf
Скачиваний:
3
Добавлен:
24.03.2024
Размер:
3.98 Mб
Скачать

ГЛАВА 2 Стандартные тесты 97

Морфологическая оценка сперматозоидов на вклейке 11.

Спер-

Форма

Комментарии

Комментарии

Комментарии

Суммарная

Коммен-

мато-

к средней

к основной

классификация

головки

к головке

тарии

зоид

части

части

сперматозоида

 

 

 

1

аномальный

 

наложение

 

аномальный

 

 

 

 

 

 

 

 

2

аномальный

 

наложение

 

аномальный

 

3

нормальный

 

утолщенная

петле-

аномальный

 

 

 

 

 

образный

 

 

 

 

 

 

 

 

 

4

нормальный

 

 

 

нормальный

 

5

аномальный

>2 вак,

утолщенная

 

аномальный

 

 

 

<40% акр

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

6

нормальный

 

 

петле-

аномальный

 

 

 

 

 

образный

 

 

7

аномальный

 

наложение

 

аномальный

 

 

 

 

 

 

 

 

8

нормальный

 

 

петле-

аномальный

 

 

 

 

 

образный

 

 

9

аномальный

>70% акр,

 

 

аномальный

 

 

 

конический

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

10

аномальный

конический

 

 

аномальный

 

11

нормальный

 

утолщенная

 

аномальный

 

 

 

 

 

 

 

 

12

аномальный

конический

 

 

аномальный

 

13

нормальный

<40% акр

утолщенная

 

аномальный

 

 

 

 

 

 

 

 

14

аномальный

конический

утолщенная,

 

аномальный

>1/3

 

 

 

ERC

 

 

 

15

аномальный

конический

утолщенная

 

аномальный

 

 

 

 

 

 

 

 

16

аномальный

конический

 

 

аномальный

 

17

аномальный

аморфный

утолщенная

 

аномальный

 

 

 

 

 

 

 

 

18

нормальный

 

 

 

нормальный

 

19

нормальный

 

 

 

аномальный

 

 

 

 

 

 

 

 

20

аномальный

 

 

 

аномальный

 

21

аномальный

 

 

 

аномальный

 

 

 

 

 

 

 

 

22

нормальный

>70% акр

 

петле-

аномальный

 

 

 

 

 

образный

 

 

23

нормальный

 

 

 

нормальный

 

 

 

 

 

 

 

 

24

нормальный

 

 

 

нормальный

 

25

 

 

 

 

 

полиморф

 

 

 

 

 

 

 

26

нормальный

 

 

 

нормальный

 

27

нормальный

 

 

 

нормальный

 

 

 

 

 

 

 

 

28

нормальный

>70% акр

 

 

аномальный

 

29

 

 

 

 

 

моноцит

 

 

 

 

 

 

 

30

 

 

 

 

 

полиморф

31

 

 

 

 

 

моноцит

 

 

 

 

 

 

 

32

 

 

 

 

 

полиморф

33

 

 

 

 

 

моноцит

98 ЧАСТЬ I Исследование эякулята человека

Вклейка 12

10 микрон

Микрофотографии с любезного согласия C.Brazil.

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

ГЛАВА 2 Стандартные тесты 99

Морфологическая оценка сперматозоидов на вклейке 12.

Спер-

Форма

Другие

Комментарии

Комментарии

Суммарная

Коммен-

мато-

комментарии

к средней

к основной

классификация

головки

тарии

зоид

к головке

части

части

сперматозоида

 

 

1

нормальная

>70% акр

 

 

аномальный

 

 

 

 

 

 

 

 

2

аномальная

 

 

 

аномальный

 

3

аномальная

>70% акр

 

 

аномальный

 

 

 

 

 

 

 

 

4

нормальная

 

 

 

нормальный

если основ-

 

 

 

 

 

 

ная часть

 

 

 

 

 

 

нормальная

 

 

 

 

 

 

 

5

аномальная

 

утолщенная

 

аномальный

 

 

 

 

 

 

 

 

6

аномальная

коническая

 

 

аномальный

 

7

 

нет фокуса

утолщенная

 

 

нет оценки

 

 

 

 

 

 

 

8

аномальная

 

утолщенная,

 

аномальный

 

 

 

 

изогнутость

 

 

 

9

 

 

 

 

 

дегенери-

 

 

 

 

 

 

рующий

 

 

 

 

 

 

лейкоцит

 

 

 

 

 

 

 

10

аномальная

 

утолщенная

 

аномальный

 

11

аномальная

круглая

 

скрученная

аномальный

 

12

нормальная

 

 

 

нормальный

 

13

аномальная

коническая

изогнутость

 

аномальный

 

 

 

 

 

 

 

 

14

аномальная

 

наложение

 

аномальный

 

15

 

 

 

 

 

полиморф

 

 

 

 

 

 

 

16

аномальная

аморфная

 

 

аномальный

 

17

аномальная

 

 

скрученная

аномальный

 

18

аномальная

 

утолщенная

скрученная

аномальный

 

19

нормальная

 

 

двойная

аномальный

 

 

 

 

 

 

 

 

20

аномальная

 

утолщенная

 

аномальный

 

21

 

наложение

 

 

 

нет оценки

 

 

 

 

 

 

 

22

аномальная

грушевидная

 

 

аномальный

 

23

нормальная

 

 

 

нормальный

 

 

 

 

 

 

 

 

24

аномальная

 

 

 

аномальный

ацефаличе-

 

 

 

 

 

 

ский

25

аномальная

аморфная

 

изогнутость

аномальный

 

 

 

 

 

 

 

 

26

аномальная

аморфная

утолщенная,

 

аномальный

 

 

 

 

изогнутость

 

 

 

27

нормальная

 

утолщенная

 

аномальный

 

 

 

 

 

 

 

 

28

нормальная

 

 

 

нормальный

если основ-

 

 

 

 

 

 

ная часть

 

 

 

 

 

 

нормальная

 

 

 

 

 

 

 

29

аномальная

коническая

 

 

аномальный

 

 

 

 

 

 

 

 

30

аномальная

круглая

 

 

аномальный

 

31

нормальная

 

изогнутость

наложение

 

нет оценки

 

 

 

 

 

 

 

32

нормальная

 

утолщенная,

 

аномальный

 

 

 

 

изогнутость

 

 

 

33

аномальная

 

 

 

аномальный

 

 

 

 

 

 

 

 

34

аномальная

 

 

 

аномальный

 

35

нормальная

 

изогнутость

 

аномальный

 

 

 

 

 

 

 

 

36

 

 

 

 

 

полиморф

37

 

 

 

 

 

полиморф

38

 

 

 

 

 

полиморф

100 ЧАСТЬ I Исследование эякулята человека

Вклейка 13

15 микрон

Микрофотографии с любезного согласия C.Brazil.

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

ГЛАВА 2 Стандартные тесты 101

Оценка клеток на вклейке 13

Клетка

Тип клетки

 

 

1

Макрофаг

 

 

2

Аномальный сперматозоид

 

 

3

Цитоплазма

 

 

4

Аномальный сперматозоид

 

 

5

Сперматоцит

 

 

6

Аномальный сперматозоид

 

 

7

Аномальный сперматозоид? Потерянная головка на цитоплазме?

 

 

8

Цитоплазма

 

 

9

Дегенерирующая (неразделившаяся) сперматида

 

 

10

Сперматоцит

 

 

11

Дегенерирующая сперматида

 

 

12

Сперматида

 

 

13

Дегенерирующая сперматида

 

 

14

Неразделившийся сперматоцит

 

 

15

Цитоплазма

 

 

16

Дегенерирующая сперматида

 

 

17

Дробящийся (неразделившийся) сперматоцит

 

 

18

Аномальный сперматозоид

 

 

19

Цитоплазма

 

 

20

Аномальный сперматозоид

 

 

21

Сперматида

 

 

22

Фагоцитирующий макрофаг

 

 

23

Сперматоцит

 

 

24

Цитоплазма

 

 

102 ЧАСТЬ I Исследование эякулята человека

Вклейка 14

15 микрон

Микрофотографии с любезного согласия C.Brazil.

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

ГЛАВА 2 Стандартные тесты 103

Оценка клеток на вклейке 14

Клетка

Тип клетки

 

 

1

Макрофаг

 

 

2

Аномальный сперматозоид

 

 

3

(Делящаяся) сперматида

 

 

4

(Делящаяся) сперматида

 

 

5

Цитоплазма

 

 

6

Не поддается классификации

 

 

7

Дегенерирующая сперматида

 

 

8

Дегенерирующая сперматида (?)

 

 

9

Дегенерирующая сперматида

 

 

10

Дегенерирующая сперматида

 

 

11

Макрофаг

 

 

12

Дегенерирующая сперматида

 

 

13

Дегенерирующая сперматида

 

 

14

Дегенерирующая сперматида

 

 

15

Дегенерирующая сперматида

 

 

16

Макрофаг

 

 

2.17 Анализ морфологии сперматозоидов на окрашенных мазках

2.17.1 Оценка морфологии нормального сперматозоида

Необходимо определять процент нормальных сперматозоидов. С точки зрения парадигмы о морфологии нормального сперматозоида рассматривают его функциональные области. Нет необходимости различать все вариации размеров головки и ее форм или варианты дефектов шейки и жгутика.

Морфологическую оценку следует проводить для каждого сперматозоида, поддающегося оценке, в нескольких систематически отобранных полях зрения на предметном стекле для того, чтобы предотвратить необъективный отбор каких-либо отдельных сперматозоидов.

Просмотрите предметное стекло в световом микроскопе на увеличении ×1000 под иммерсионным маслом.

Оцените все сперматозоиды в каждом поле зрения, перемещаясь от одного поля зрения к другому.

Оцените по крайней мере 200 сперматозоидов в каждом дупликате (на втором предметном стекле), для достижения приемлемо низкой статистической ошибки (см. Бокс 2.5).

Подсчитайте число нормальных и аномальных сперматозоидов с помощью лабораторного счетчика.

104ЧАСТЬ I Исследование эякулята человека

Повторите оценку по крайней мере 200 сперматозоидов предпочтительно на втором предметном стекле, но можно и на том же самом (см. Бокс 2.5).

Сравните процент морфологически нормальных сперматозоидов при двух независимых оценках.

Рассчитайте среднее и различие между процентными значениями нормальных форм при повторных измерениях.

Определите приемлемость различий изТабл. 2.1. или Рис. А 7.2, Приложение 7. (Каждый показывает максимальное различие между двумя процентами, которое можно ожидать в 95% образцах только из-за статистической ошибки.)

Если различие между процентными значениями приемлемо, запишите средний процент морфологически нормальных сперматозоидов. Если различие слишком велико, повторите оценку на том же предметном стекле (см. Бокс 2.6).

Запишите среднее значение морфологически нормальных форм сперматозоидов как ближайшее среднее число.

Важно 1: Оценивайте только интактные сперматозоиды, имеющие головки и жгутики (см. Раздел 2.7.3),так как только интактные сперматозоиды используют для расчета концентрации клеток. Не учитывайте незрелые половые клетки (округлые).

Важно 2: Не оценивайте перекрывающиеся сперматозоиды и такие, которые лежат головкой на жгутике; такие клетки невозможно проанализировать правильно. Они не должны присутствовать на хорошо приготовленных мазках (см. Раздел 2.13.2.1), но это может случаться, когда присутствует клеточный дебрис или большое количество зернистого материала (например, вязкость эякулята: см. Раздел 2.13.2.3). Такие образцы следует отмывать (см. Раздел 2.13.2.4), а предметные стекла оценивать до окрашивания.

2.17.2 Примеры с решениями

Пример 1. Процент сперматозоидов с нормальной морфологией при повторных расчетах 200 сперматозоидов равны 18 и 9. Округленное среднее значение 14%, различие 9%. Из Табл. 2.1 видно, что при среднем 14% допустима разница не более 7%. Так как наблюдаемое различие превышает ожидаемое, результаты расчета признаются недействительными и предметные стекла оценивают заново.

Пример 2. Процент сперматозоидов с нормальной морфологией при повторных расчетах 200 клеток равен 10 и 14. Округленное среднее значение равно 12%, разница — 4%. Из Табл. 2.1 видно, что для среднего 12% допустимо различие не более 7%. Так как наблюдаемое различие не превышает допустимого значения, результаты признают пригодными и записывают среднее значение, а именно 12% морфологически нормальных форм сперматозоидов.

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

ГЛАВА 2 Стандартные тесты 105

2.17.3 Минимальное референсное значение

Минимальным референсным значением нормальных форм считают 4% (5-й процентиль, 95% доверительный интервал 3.0–4.0).

Комментарий: Общее число морфологически нормальных сперматозоидов в эякуляте имеет биологическое значение. Его получают умножением общего числа сперматозоидов в эякуляте (см. Раздел 2.8.7)

на процент нормальных форм.

2.17.4 Оценка морфологии аномального сперматозоида

Категоризация всех аномальных форм сперматозоидов может быть полезна для диагностических и исследовательских целей. Если необходимо, отметьте природу дефектов и рассчитайте процент сперматозоидов с дефектами головки (%H), шейки (%M) или жгутика (%P), а также сперматозоидов с резидуальными цитоплазматическими каплями (%C).

Можно использовать многокнопочный счетчик, одна кнопка для нормальных форм, одна для аномальных и по одной для каждой из четырех типов аномалии (H, M, P, C). Такие счетчики позволяют подсчитать каждый сперматозоид только один раз, а каждый из типов аномалии оценивается отдельно.

При финальной оценке 400 сперматозоидов можно получить процент нормальных и аномальных сперматозоидов (эти два числа следует доводить до 100%), а также процент каждого типа аномалии, то есть %H, %M, %P and %C (эти числа не следует доводить до 100%).

Процент сперматозоидов в этих классах аномалии получен делением общего числа аномальных сперматозоидов со специфическими дефектами на общее число нормальных и аномальных сперматозоидов, умноженное на 100. Эти числа также можно использовать для расчета индексов множественных дефектов (см. Раздел 3.1).

2.17.5Примеры с решениями

Пример 1. Из 200 сперматозоидов, рассчитанных с помощью шестикнопочного счетчика при первом анализе 42 сперматозоида считают нормальными и 158 аномальными. Из 158 аномальных сперматозоидов 140 имеют дефекты головки, 102 — дефекты шейки, 30 — дефекты

жгутика и 44 содержат резидуальную каплю. Результаты повторного анализа — 36 нормальные и 164 аномальные сперматозоиды, из которых 122 имеют дефекты головки, 108 — дефекты шейки, 22 — аномалии жгутика и 36 имеют резидуальные цитоплазматические капли.

Только нормальную категорию сравнивают на приемлемость различий при повторных вычислениях. Повтор 1 имеет 21% нормальных сперматозоидов, при повторе 2 — 18%. Средним значением является 19,5% (округляем до 20%), а различие составляет 3%. Из Таблицы 2.1, видно, что при среднем 20% следует ожидать различие не выше 8%. Так как выявленное различие меньше этого значения, результат следует принять и среднее значение записать: нормальных форм (42 + 36)/400 = 20%, аномальных головок (140+122)/400=66%, аномальных шеек

106 ЧАСТЬ I Исследование эякулята человека

(102+108)/400=53%, аномальных жгутиков (30+22)/400=13% и процент сперматозоидов с аномальными резидуальными каплями (44+36)/400=20%.

Важно: Эти категории не должны превышать 100%, так как каждый тип аномалии подсчитывается отдельно, а некоторые сперматозоиды имеют множественные дефекты.

Комментарий: Более детальный анализ аномальных сперматозоидов с различными индексами, учитывающими число аномалий в каждой области на аномальный сперматозоид, приведен в Разделе 3.1.1.

2.17.6 Оценка особых дефектов сперматозоидов

Иногда многие сперматозоиды могут иметь особые структурные дефекты. Например, акросома может не развиваться, что приводит к дефекту — круглые головки, или глобулозооспермия. Если во время спермиогенеза базальная пластинка не прикрепляется к ядру на противоположной стороне акросомы, головка теряется и только жгутики можно наблюдать в эякуляте (ацефалические сперматозоиды).

Важно 1: Ацефалические (только жгутики) сперматозоиды не подсчитывают как дефект головки, так как такие головки не содержат хроматина или структур, лежащих до базальной пластинки внутри головки.

Важно 2: Так как ацефалические сперматозоиды и свободно лежащие головки не подсчитывают как сперматозоиды (определяемые как имеющие головку и жгутик, см. Раздел 2.7.3), их не следует рассматривать как аномалии сперматозоидов.

Мужчины, которые имеют сперматозоиды с одним из таких дефектов, обычно бесплодны. Такие случаи редки, но важно, чтобы их корректно идентифицировали и записывали. Таким образом, необходимо сообщать о присутствии особых дефектов сперматозоидов, например, свободные головки, ацефалия (свободные жгутики), головки без акросомы.

Если обнаружено много таких дефектов, их распространенность по сперматозоидам может быть определена. Если N есть число клеток с дефектами, рассчитанное на одном и том же числе полей зрения на 400 сперматозоидов, а S есть концентрация сперматозоидов (106 на мл), то концентрация (С) дефектов (106 на мл) может быть рассчитана по формуле C = S × (N/400).

2.18 Оценка лейкоцитов в сперме

Лейкоциты, преимущественно полиморфноядерные лейкоциты (нейтрофилы), присутствуют в большинстве образцов эякулята человека (Tomlinson et al., 1993; Johanisson et al., 2000). Они могут быть дифференцированы от сперматид и сперматоцитов на мазке спермы, окрашенном по Папаниколау (см. Раздел 2.14.2). Дифференцировка основана на различиях в окрашивании и в размерах ядра и его формы (Johanisson et

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Соседние файлы в папке Клинические и лабораторные анализы