41. Последовательность событий при инициации трансляции эукариот. Белковые факторы, взаимодействующие с рибосомой и с мРнк.
Инициирующими аминоацил-тРНК у эукариот является метионил-тРНК (мет-тРНК).
У эукариот для инициации синтеза белка используется специальная инициирующая мет-тРНКмет.
Инициация трансляции начинается с присоединения к малой субъединице рибосомы иРНК и первой аминоацил-тРНК, антикодон которой комплементарен инициирующему кодону АУГ. Комплементарное взаимодействие актикодона инициирующей аминоацил-тРНК с инициирующим кодоном АУГ (у бактерий таким кодоном иногда является ГУГ) определяет правильную рамку считывания полинуклеотидной последовательности иРНК
После образования комплекса, состоящего из малой субъединицы рибосомы, иРНК и тРНК, к нему присоединяется большая субъединица рибосомы. В результате образуется инициирующий комплекс, в котором выделяют 2 центра: Р-центр (пептидильный) и А-центр (аминоацильный). В Р-центре находится инициирующая аминоацил-тРНК, а А-центр свободен
Инициация трансляции у эукариот обеспечивается большим числом факторов инициации. Среди них выделяют собственно факторы инициации, обозначаемые eIF1 – eIF5. Факторы eIF1 – eIF3 в комплексе с дополнительными факторами (eIF-2B и eIF-S) обеспечивают присоединение инициирующей аминоацил-тРНК и иРНК к субъединицам рибосомы. Факторы IF4, eIF5 и некоторые дополнительные факторы осуществляют подготовку иРНК к инициации трансляции.
Последовательность стадий:
1. Присоединение аминоацил-тРНК к малой субъединице рибосомы(необходим фактор eIF2 и энергия ГТФ);
2. Присоединение мРНК к малой субъединице рибосомы (при помощи КЭП);
3. Присоединение большой субъединицы
42. Механизм элонгации полипептидной цепи в процессе трансляции.
В процессе элонгации происходит наращивание полипептидной цепи.
Н
а
первом этапе элонгации с А-центром
связывается следующая аминоацил-тРНК,
антикодон которой комплементарен
следующему триплету. Далее происходит
перенос аминокислотного остатка с
фмет-тРНКфмет
на аминогруппу аминокислотного остатка
следующий аминоацил-тРНК, связанной с
А-центром. В результате возникает первая
пептидная связь и образуется дипетидил-тРНК.
Реакция образования пептидной связи в
процессе трансляции получила название
пептидилтрансферазной реакции.
Далее рибосома перемещается на один кодон в направлении от 5’- к 3’-концу иРНК. Инициирующая тРНК покидает рибосому. Дипептидил-тРНК перемещается из А-центра в Р-центр. При этом А-центр освобождается, здесь оказывается следующий триплет. Теперь рибосома готова к новому циклу элонгации. Дипептид с дипептидил-тРНК переносится на следующую аминоацил-тРНК, находящуюся в А-центре, что приводит к образованию трипептидил-тРНК. Последняя вступает в следующий цикл элонгации. Рассмотренные циклы продолжаются до тех пор, пока рибосома не достигнет терминирующих кодонов.
В элонгации трансляции у прокариот участвуют белковые факторы EF-Tu, EF-Ts и EF-G. Фактор EF-Tu, образуя комплекс с ГТФ, взаимодействует с аминоацил-тРНК. Образовавшийся тройной комплекс соединяется с рибосомой. Далее происходит гидролиз ГТФ и комплекс EF-Tu-ГДФ покидает рибосому. Фактор EF-Ts ответственен за восстановление комплекса EF-Tu-ГТФ из EF-Tu-ГДФ. Фактор EF-G обеспечивает перемещение (транслокацию) иРНК относительно рибосомы.
У эукариот в элонгации участвуют два фактора eEF-1 и eEF-2, являющиеся аналогами факторов прокариот EF-Tu и EF-G.
43. Терминация трансляции: терминирующие кодоны, белковые факторы терминации, механизм гидролиза пептидил-тРНК и диссоциации трансляционного комплекса (лекция+инет)
Как только в А-центре окажется один из терминирующих кодонов: УАГ, УГА, УАА, наступает терминация белкового синтеза: происходит гидролитическое отщепление полипептида от тРНК, тРНК отделяется от рибосомы, рибосома диссоциирует на субъединицы. В этом процессе участвуют специфические белки – факторы терминации. У бактерий они обозначаются как RF-1, RF-2 и RF-3. Указанные факторы связываются с терминирующим кодоном, как только он окажется в пределах А-центра рибосомы, и запускают процесс терминации синтеза белка. У эукариот в терминации трансляции участвует один фактор – R, его функция аналогична функции факторов терминации бактерий.