Микра ответы на 1 рубеж

9. Сходства и различия в строении клеток эукариотов и прокариотов

10. Клеточная стенка бактериальной клетки. Отличия в строении клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий. Протопласты, сферопласты. L-формы бактерий.

Пептидогликан состоит из N-ацетилглюкозамина и N-ацетилмурамовой кислоты, которые связаны между собой тетрапептидными связями (у грамположительных еще и пентапептидными связями, создавая пространственную структуру).

Тейхоевые и липотейхоевые кислоты имеются у грамположительных бактерий и представляют собой цепи из 8-50 остатков глицерола и риботола, соединенных фосфатными мостиками.

Клеточная мембрана представлена билипидным слоем с белками (интегральные, полуинтегральные, периферические).

Наружная мембрана грамотрицательных бактерий представлена липополисахаридами, фосфолипидами и белками. Также на наружной мембране есть ЛПС-комплекс (липополисахаридный комплекс), который является эндотоксином.

Строение ЛПС-комплекса:

У грамотрицательных бактерий между цитоплазматической мембраной и пептидогликаном расположено периплазматическое пространство (периплазма) с ферментами транспортной системы.

Бактрии с дефектной клеточной стенкой:

-Протопласты – это бактерии, полностью утратившие клеточную стенку под действием антибиотика

-Сферопласты – это бактерии с частично сохранившейся клеточной стенкой

-L- формы – это бактерии сфероили протопластического типа, утратившие способность к синтезу пептидогликана под влиянием антиибиотиков, способные размножаться

11. Тинкториальные свойства бактерий. Простые и сложные методы окраски. Окраска по Граму, сущность метода. Механизм взаимодействия красителей с отдельными структурами бактериальной клетки.

Тинкториальные свойства бактерий – это способность бактерий воспринимать краситель (окрашиваться)

Простые методы окраски – используют 1 краситель

Сложные методы окраски- используют 2 и более красителей

Окраска по Граму:

1)Окраска карболовым генциан-виолетом 2 мин. (через фильтровальную бумагу)

2)Люголевский раствор 1 мин.

3)Обесцвечивание спиртом 25-30 сек.

4)Промывание водой

5)Дополнительная докраска водным фуксином 2-3 мин.

6)Промывание водой

7)Высушивание через фильтровальную бумагу

Результаты:

-Грамположительные (+) бактерии окрасились в сине-фиолетовый цвет

-Грамотрицательные (-) бактерии окрасились в красно-розовый цвет

Сущность метода: генцианфиолет образует комплекс с тейхоевыми кислотами в присутствии Люголя, который задерживается многослойным пептидогликаном у грамположительных бактерий.

Взаимодействие красителей на структуры клеточной стенки:

Грамположительные бактерии прочно удерживают комплекс генцианвиолета с люголем. Обработка бактерий спиртом вызывает разбухание муреина и уменьшает диаметр пор клеточной стенки, в результате краситель оказывается «запертым» и воздействие второго красителя

(водного фуксина) не даёт видимых результатов. Поэтому грамположительные бактерии, имеющие большое содержание муреина (пептидогликан), окрашиваются в фиолетовый цвет.

У грамотрицательных бактерий слой муреина тоньше, поры до конца не смыкаются и спирт свободно проникает сквозь клеточную стенку и обесцвечивает бактерию. Они содержат большое кол-во липидов, которые хорошо растворяются в спирте и способствуют обесцвечиванию микробных клеток, поэтому они докрашиваются водным фуксином в красный цвет.

! Люголь — это НЕ краситель, а затравка

12. Препараты для микроскопии (нативный, фиксированный). Этапы приготовления фиксированного мазка из культур бактерий.

Нативный препарат – микроорганизмы живые

Фиксированный препарат – умерщвлённые микроорганизмы пламенем горелки

! нативный препарат смотрим БЕЗ иммерсионного масла, на увеличении 40, исследуя методом висячей капли Фиксированный препарат смотрим на увеличении 100

Этапы приготовления фиксированного препарата:

1)Начинаем приготовление препарата с прокаливания петли в пламени горелки

2)Открываем пробирку, обжигая ее края в пламени горелки

3)Набираем каплю культуры остывшей петлей

4)Закрываем пробирку

5)Наносим каплю культуры на предметное стекло, выделяя равномерно, размазывая диаметром 1-1,5 см

6)Обжигаем петлю в пламени горелки, откладываем

7)Фиксируем препарат в пламени горелки 2-3 раза аккуратно

13.Споры и спорообразование. Причины и стадии спорообразования. Строение, расположение, факторы устойчивости спор. Методы обнаружения спор. Спорообразующие микроорганизмы

Спора —форма покоящихся бактерий с грамположительным типом строения клеточной стенки, позволяющая сохранить наследственную информацию бактерии в неблагоприятных условиях окружающей среды.

Спорообразование – это способность образовывать споры

Причины образования споры:

-неблагоприятные условиях существования бактерий (высушивание, УФ-облучение, дефицит питательных веществ и др.).

-изменение температуры

-недостаток питательных в-в

-накопление токсических продуктов обмена

-изменение рН

-высушивание

Стадии спорообразования:

1)Подготовительный этап. Происходит замедление метаболизма клетки, уплотнение нуклеоида с частью цитоплазмы на одном из полюсов клетки. Происходит синтез дипиколиновой кислоты (обеспечивает термостабильность споры);

2)Стадия проспоры. Инвагинация цитоплазматической мембраны, разделяющей часть цитоплазмы с нуклеоидом, образуется септа, что дает начало образованию оболочек;

3)Стадия образования оболочек. Внутренняя оболочкаосновной компонентпептидогликан. Внешняя оболочкаосновной компоненткератиноподобные структуры; Кортекспрототип пептидогликана;

4)Созревание споры. Спора покрывается экзоспориумомчасть уплотнённой цитоплазмы. Остальная часть клетки разрушается аутолизом.

Внутри бактериальной клетки образуется одна спора (эндоспора). Образование спор способствует сохранению вида и не является способом размножения.

Расположение спор:

Факторы устойчивости спор:

1)Многослойная оболочка – защищает от внешних факторов

2)Дипиколинат кальция – термоустойчивость

3)Низкое содержание воды – при нагревании вода расширяется и бактерию порвет, при замерзании образуется лёд, он расширяется, бактерию порвет. А т.к. воды мало, то бактерию не порвет

4)Вялые процессы метаболизма

5)Низкая ферментативная активность

Методы обнаружения спор: окраска по Цилю-Нильсону, при этом споры окрасятся в красный цвет, а вегетативные формы – в синий

Спорообразующие микроорганизмы: грамположительные бактерии

14. Капсулообразование и его значение. Методы обнаружения капсул. Жгутики - характеристика, расположение жгутиков, методы их выявления. Пили.

Капсулообразование – это способность микроорганизмов образовывать капсулу на своей поверхности, которая защищает их от фагоцитоза организма хозяина.

Значение капсулы:

-антифагоцитарная

-антигенная

Методы обнаружения капсул: окраска по Бурри-Гинсу, создающая негативное контрастирование, т.е. тушь создает темный фон вокруг капсулы

Жгутики – это тонкие нити, берущие начало от цитоплазматической мембраны, имеют большую длину, чем сама клетка. Жгутики состоят из белка флагеллина, являющегося антигеном (Н- антиген)

По расположению жгутиков:

1)монотрихии – 1 жгутик

2)амфитрихии – 1 жгутик на 2 полюсах

3)лофотрихии – пучок жгутиков на 1 полюсе

4)перитрихии – жгутики по всей поверхности

Методы выявления жгутиков: в опитческом микроскопе при окраске по Леффлеру или Морозову (серебрение жгутиков). Также выявляют с помощью электронной микроскопии при напылении тяжелыми металлами

Пили – это нитевидные образования, более тонкие и короткие, чем жгутики, отходят от поверхности клетки. Состоят из белка пилина.

Пили 4 типа гидрофобны, располагаются по полюсам клетки, обладают антигенными свойствами, способствуют адгезии и образованию биоплёнки.

15. Кислотоустойчивые микобактерии (КУМ)-характеристика. Выявление КУМ. Окраска по ЦилюНильсену, сущность метода

Кислотоустойчивые микобактерии – это бактерии, содержащие большое количество липидов, восков, фосфолипидов, придающих устойчивость к кислотам. Например, микобактерия туберкулёза.

Выявление КУМ: окраска по Цилю-Нильсону

Окраска по Цилю-Нильсону:

1)Окраска карболовым фуксином через фильтровальную бумагу при нагревании до появления паров (20 сек.). Оставить на 3 мин.

2)Слить краску

3)Обесцвечивание 5% серной кислотой

4)Промыть водой

5)Окраска водной синькой 3-5 мин.

6)Промыть водой

7)Высушить фильтровальной бумагой

Результат:

-споры окрасились в красный цвет, вегетативные формы – в синий

-КУМ окрасились в красный цвет

Сущность: Кислотоустойчивость бактерий обусловлена наличием в стенке и цитоплазме повышенного кол-ва липидов, воска и оксикислот (миколовой кислоты). Раствор карболовой кислоты разрыхляет клеточную стенку и тем самым повышает ее тинкториальные св-ва, а высокая концентрация красителя и нагревание в процессе окраски усиливают реакцию в/д красителя с бактериальными клетками, которые окрашиваются при этом в красный цвет. При обработке серной кислотой некислотоустойчивые бактерии обесцвечиваются и окрашиваются синькой в синий цвет.

16. Определение и морфология бактериофагов. Пример строения бактериофага со смешанным типом симметрии. Классификация бактериофагов по спектру действия.

Бактериофаги – это вирусы бактерий

Морфология:

Бактериофаг со смешанным типом симметрии

Классификация бактериофагов по спектру действия:

-по продуктивному типу – образуется фаговое потомство и бактерии лизируются

-по абортивному типу - фаговое потомство не образуется и бактерии сохраняют свою жизнедеятельность

-по интегративному типу – геном фага встраивается в хромосому бактерии и сосуществует вместе с ней

17. Репродукция бактериофагов (вирулентный, умеренный). Лизогенная (фаговая) конверсия. Профаг.

Вирулентные фаги – реплицируются в бактериальной клетке, вызывая её лизис

Умеренные фаги - в бактериальной клетке находятся в форме профага, т.е. они интегрируются в геном бактерии, реже, существуют в плазмидоподобном состоянии. Профаг передается дочерним клеткам при делении. Культура, содержащая профаг называется лизогенной. А явление называется лизогинией.

Лизогенная конверсия – это явление, при котором под действием генов фага культура бактерий становится патогенной

Профаг – это встроенная в хромосому бактериальной клетки нуклеиновая кислота фага

18. Химический состав бактерий. Питание бактерий, типы питания. Прототрофы, ауксотрофы.

Химический состав бактерий см. 8 вопрос Питание бактерий