Реакции иммунитета – это реакции между антигеном и антителом (серологические) или между антигеном или сенсибилизированными лимфоцитами (клеточные), которые происходят в живом организме и могут быть воспроизведены в лабораторных условиях.

Реакция агглютинации (РА) – это склеивание и выпадение в осадок микробов или других клеток под действием антител в присутствии электролита. Используют для определения возбудителя, выделенного от больного, или определения антител в сыворотке крови больного. Разновидности реакции агглютинации: ориентировочная (рис.23), развернутая (рис.24)

Рисунок 23. Учетные признаки ориентировочной реакции агглютинации

К капле агглютинирующей сыворотки добавляют взвесь бактерий, выделенных от больного. Образуется хлопьевидный осадок.

Рисунок 24. Учетные признаки развернутой реакции агглютинации

К разведениям сыворотки добавляют диагностикум. Агглютинация с О-диагностикумом (бактерии, убитые нагреванием, сохранившие O-антиген) происходит в виде мелкозернистой агглютинации. Агглютинация с Н-диагностикумом (бактерии, убитые формалином, сохранившие жгутиковый Н-антиген) - крупнохлопчатая и протекает быстрее.

56

Реакция преципитации (РП) основана на выпадении в осадок специфического иммунного комплекса, состоящего из растворимого антигена и специфического антитела в присутствии электролита. В результате реакции образуется мутное кольцо или рыхлый осадок – преципитат. РП применяют для диагностики инфекционных заболеваний (реакция кольцепреципитации в пробирке, в капиллярах, в агаровом геле), в судебной медицине, в санитарно-гигиенических исследованиях.

Реакцию кольцепреципитации проводят в узких преципитационных пробирках: на иммунную сыворотку наслаивают растворимый антиген. При оптимальном соотношении антигена и антител на границе этих двух растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата (рис. 25). Если в качестве антигенов в реакции используют прокипяченные и профильтрованные экстракты тканей, то такая реакция называется реакцией термопреципитации (реакция Асколи для выявления сибиреязвенного антигена).

Рисунок 25. Учетные признаки реакции кольцепреципитации

Для постановки реакции преципитации в агаровом геле (по Оухтерлони) растопленный агаровый гель тонким слоем выливают в чашку Петри или на стеклянную пластинку и после затвердевания в нем вырезают лунки. В лунки геля раздельно помещают антигены и иммунные сыворотки, которые диффундируют навстречу друг другу. В месте встречи в эквивалентных соотношениях они образуют преципитат в виде белой полосы. В многокомпонентных системах между лунками с антигенами и антителами появляется несколько линий преципитата; у идентичных АГ линии преципитата сливаются, у неидентичных АГ– пересекаются (рис. 26).

57

Рисунок 26. Учетные признаки РП в геле (по Оухтерлони)

.

Тема практического занятия 11. Иммунологические реакции: реакция нейтрализации, реакция иммунофлюоресценции.

ЦЕЛИ: Знать принципы реакции и методы постановки, учетные признаки, практическое применение.

Порядок проведения занятия:

1.Вступительное слово преподавателя (цели и задачи) – мин.

2.Объяснение нового материала, методические и организационные указания преподавателя по проведению занятия - мин.

3.Самостоятельная практическая работа студентов под руководством преподавателя, оформление и проверка протоколов – мин.

4.Обсуждение полученных результатов, проверка протоколов, подведение итогов практического занятия, заключительное слово преподавателя - мин.

Вопросы для самоконтроля

1.В чем состоит сущность реакции нейтрализации токсина антитоксином (РН)? Каковы ее разновидности, ингредиенты, учетные признаки?

2.Как с помощью РН определить титр антитоксической сыворотки?

3.В чем состоит сущность реакции иммунофлюоресценции? Каковы ее разновидности, ингредиенты, учетный признак?

58

Самостоятельная работа на кафедре

1.Учесть токсигенность дифтерийных бактерий по демонстрационным посевам (портативным стендам).

2.Учесть результаты демонстрационной реакции флокуляции (РН в пробирках), определить титр антитоксической дифтерийной сыворотки (или иммуногенную активность дифтерийного анатоксина). Записать схему опыта, его результаты.

3.Познакомиться по таблицам с постановкой и учетом РИФ, РН. Записать.

Дополнительный материал

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) - метод экспресс-

диагностики для выявления антигенов микробов или определения антител. Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа (рис.27). Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета.

Рисунок 27. Схема постановки прямой РИФ

Реакция нейтрализации (РН) основанана способности специфической антитоксической сыворотки нейтрализоватьэкзотоксин. Разновидности РН: на животных, проба Шика, реакция флокуляции (применяется на фармацевтических предприятиях).

Реакция нейтрализации токсина основана на способности специфической антитоксической сыворотки нейтрализовать экзотоксин. Для проведения реакции исследуемый материал, в котором предполагается наличие токсина, смешивают с

59