19. Биопрепараты

Вакцины - средства специфической активной иммунопрофилактики. Выпус-кают живые, инактивированные, химические вакцины, анатоксины, генноинже-нерные и др.

Живые вакцины готовят из штаммов микроорганизмов с ослабленной виру-лентностью (аттенуированные). Главное требование, предъявляемое к вакцинным штаммам, - наличие стойкой наследственно передающейся остаточной вирулент-ности. При введении таких штаммов микроорганизмов в организм культура должна приживаться и размножаться, но не вызывать клинических проявлений болезни, что приводит к созданию иммунитета высокой напряженности и дли-тельности.

Вакцинные штаммы получают различными способами:

1. Использование аттенуированных (с ослабленной вирулентностью) штам-мов, возникших в естественных условиях обитания возбудителей инфекционных болезней.

2. Искусственное получение аттенуированных штаммов возбудителей в ла-бораторных условиях:

- выращивание возбудителя на искусственных питательных средах;

- перевод возбудителя на другой вид восприимчивого животного;

- перевод возбудителя на невосприимчивый вид животного.

3. Ослабление вакцинных штаммов прямым (непосредственным) воздействи-ем на ген возбудителя мутагенами физической природы: проникающая радиация, ультрафиолетовое излучение, пониженная или повышенная температура и др.

4. Комбинированные методы получения вакцинных штаммов в лабораторных

условиях.

5. Изменение генома вакцинных штаммов с помощью технологии рекомби-нантных ДНК.

Живые вакцины имеют ряд преимуществ перед вакцинами других типов. Главное из них - высокая иммуногенность, т.е. создание иммунитета высокой напряженности и длительности, приближающегося к постинфекционному; одно-кратная иммунизация; возможность введения естественными путями и др. Среди недостатков живых вакцин следует отметить следующие: необходимость соблю-дения мер предосторожности при их транспортировке; хранение при температуре 4-10 °С; поствакцинальные реакции и осложнения; реверсия вирулентности; по-сле вакцинации бактерийными вакцинами нельзя применять антибактериальные препараты в течение 7 дней.

Для приготовления инактивированных вакцин в качестве штамма исполь-зуют высоковирулентные и иммуногенные штаммы микроорганизмов, выращен-ные в жидких питательных средах в котлах-реакторах; выход бактериальной мас-сы с плотных питательных сред незначительный. По истечении срока куль-тивирования бактериальную массу собирают и инактивируют. Последователь-ность этих операций определяется методом выращивания культур микробов.

Для инактивации микроорганизмов сочетают различные физические факторы (нагревание) и химические вещества (формалин, фенол и др.), в основном форма-лин, который необходимо добавлять в небольшом количестве (0,2 - 0,5 % и выдер-живать при 37 °С в течение нескольких недель), т.к. в более высокой дозе он от-рицательно действует на антигенную структуру микроорганизмов.

Для повышения эффективности инактивированных вакцин применяют депо-нирующие средства, на которых микробные тела адсорбируются (алюминиевые квасцы, гидроксид алюминия) или их эмульгируют в минеральных маслах. До-бавление депонирующих веществ к инактивированным культурам необходимо для создания «депо» на месте введения препарата, что способствует длительному воздействию микробного антигена на организм животного и обусловливает более высокий уровень образования антител.

Анатоксин (от греч. ana - обратно и toxikon - яд) токсин, утративший свою

токсичность под действием химических или физических факторов, но сохранив-ший антигенные и иммуногенные свойства.

Анатоксины - аналоги инактивированных вакцин препараты обезвреженного токсина, очищенного от балластных веществ, сконцентрированного и адсорбиро-ванного (чаще на алюмокалиевых квасцах). Основной метод перевода экзотокси-на в состояние анатоксина был удачно разработан французским иммунологом Г. Рамоном в 1923 г., который установил, что прибавление к токсину формалина в небольших количествах и выдерживание при 37 °С в течение месяца лишает его токсичности с сохранением иммунизирующей активности. Примером служит столбнячный анатоксин.

Иммунные сыворотки и иммуноглобулины

Изготовление лечебно-профилактических иммунных сывороток и имму-ноглобулинов производит биологическая промышленность. В качестве продуцен-тов иммуносывороток используют лошадей, мулов, ослов, волов и реже другие виды животных. Гипериммунизацию осуществляют нарастающими дозами анти-генов по утвержденным производственным схемам, отличающимся продолжи-тельностью иммунизации, интервалами между циклами иммунизации, дозами для каждого цикла введения антигена и реакцией продуцента на антиген.

По окончании цикла иммунизации, когда в сыворотке крови продуцентов находится максимальное количество специфических антител, у животных берут кровь. Чаще это делают на 10-14 день после введения продуценту последней дозы антигена.

Гипериммунные сыворотки применяют для лечебных и профилактических целей, так как они создают лишь временный пассивный иммунитет, который наступает в ближайшие 2-3 ч и не превышает 2-3 недель.

Сыворотка реконвалесцентов - это сыворотка крови переболевших живот-ных, содержащая специфические антитела, применяется с лечебной и профилак-тической целями.

Сыворотку реконвалесцентов рекомендуется получать и применять живот-ным в одном и том же хозяйстве. Кровь от животных-доноров берут непосред-ственно в хозяйстве или во время убоя их на мясокомбинате.

Диагностические иммунные сыворотки и иммуноглобулины получают пу-тем гипериммунизации животных соответствующим антигеном (возбудителем). В большинстве случаев продуцентами сывороток являются ЛЖ (кролики, морские свинки), петухи, реже лошади. Все они содержат специфические антитела к опре-деленному антигену.

Иммуноглобулины. Важнейшей составной частью сыворотки крови являют-ся белки, основная масса которых представлена альбуминами и глобулинами.

Активность антител установлена только у глобулиновой фракции сыворотки, в которой методом электрофореза обнаружены α-, β- и γ-глобулины. При гипе-риммунизации животных в сыворотке крови увеличиваются γ- и β-глобулиновые фракции. В настоящее время белки, синтезирующиеся в организме в ответ на ан-тигенное раздражение и обладающие свойством антител, обозначают термином «иммуноглобулины».

Таким образом, антитела, синтезирующиеся в организме, неоднородны. С целью удаления неактивных, балластных белков, повышения эффективности и получения препаратов с высоким содержанием специфических антител применя-ют методы очистки и концентрирования.

Принципы очистки сывороток основаны на выделении из них активных бел-ковых фракций - иммуноглобулинов - и удалении балластных фракций, не явля-ющихся носителями антител.

Препараты иммуноглобулинов, содержащие γ- и β-глобулиновые фракции сыворотки крови, намного превосходят по своей профилактической и лечебной эффективности препараты, состоящие из нативной сыворотки.

Антитоксические сыворотки - сыворотки, в состав которых входят антите-ла (иммуноглобулины), способные специфически связывать и нейтрализовать токсины микробного, растительного и животного происхождения.

Антитоксические сыворотки применяют для профилактики и лечения столб-няка, ботулизма, злокачественного отека. Сыворотки вводят на ранних сроках за-болевания. Антитоксинотерапия неэффективна, если клинические признаки бо-лезни уже четко выражены, так как антитоксины не оказывают лечебного дей-ствия и могут лишь предотвратить развитие интоксикации. Как и у всех имму-

ноглобулинов, их действие не превышает 2-3 недель.

Диагностические антигены и аллергены

Принцип и методика приготовления антигена аналогичны приготовлению инактивированных вакцин.

Антигены, как и другие диагностические препараты, готовят на биофабри-ках (биокомбинатах). В своем составе они содержат убитые целые микробные клетки или экстракты, полученные из соответствующих микроорганизмов.

В ветеринарии для диагностики инфекционных болезней используют следу-ющие антигены:

- единый бруцеллезный антиген для РА, РСК (РДСК) - биомасса из вакцин-ного штамма 19, выращенная на обогащенном печеночном агаре, которую инак-тивируют нагреванием и устанавливают концентрацию микробных клеток по оп-тическому стандарту до 10 млрд/мл;

- бруцеллезный антиген для кольцевой реакции с молоком (КР) - взвесь уби-тых нагреванием бруцелл, окрашенных в синий цвет гематоксилином;

- бруцеллезный антиген для РА на стекле (роз-бенгал) - суспензия убитых нагреванием и фенолом бруцелл, окрашенных бенгальским розовым;

Аллергены в качестве диагностических препаратов представляют собой экс-тракты из бактериальной массы, их выпускают биофабрики (биокомбинаты).

Указанные препараты используют при аллергической диагностике туберку-леза (туберкулин), паратуберкулеза (паратуберкулин), бруцеллеза (бруцеллин), сапа (маллеин), туляремии (тулярин), сибирской язвы (антраксин) и др.

Бактериофаги

Бактериофаги-вирусы обладают способностью проникать в бактериальные клетки, репродуцироваться в них и вызывать их лизис. Источником фагов пато-генных микробов служат больные и переболевшие животные и люди, выделяю-щие с фекалиями фаги во внешнюю среду.

Фаг получают путем добавления в котлы с бульонными бактериальными культурами производственного фага. После выдерживания при 37 °С в течение

суток культуры фильтруют.

ПРАВИЛА ИСПОЛЬЗОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ,

ИХ ТРАНСПОРТИРОВКА

Эффективность биопрепаратов во многом зависит от соблюдения правил применения, режима и условий их хранения. В работе с биопрепаратами необхо-димо действовать в соответствии с рекомендациями и наставлениями по их при-менению. Соблюдение условий хранения биопрепаратов гарантирует стабиль-ность иммуногенных свойств, их высокую активность и специфичность. Повы-шенные требования предъявляют к хранению и транспортировке живых атте-нуированных вакцин, поскольку разгерметизация флаконов, как правило, приво-дит к инактивации вакцинных штаммов. Сухие биопрепараты имеют ряд суще-ственных преимуществ, так как они сохраняют свои свойства в довольно широ-ком диапазоне температур.

Вакцины, содержащие в своем составе депонирующие вещества, перед при-менением необходимо интенсивно взбалтывать до получения равномерной взве-си.

Эмульгированные вакцины, содержащие минеральные масла, перед введени-ем необходимо подогреть в водяной бане при температуре 36-37 °С, а затем тща-тельно взболтать. Совершенно недопустимо замораживание жидких вакцин. Ис-пользованию подлежат биопрепараты только с не истекшим сроком годности, без наличия хлопьев и различного рода осадков, плесени, помутнения, видимых внешних повреждений флаконов.

При растворении сухих биопрепаратов применяют только указанный в наставлении разбавитель. Живые вакцины, оставшиеся после проведения вакци-нации, подлежат уничтожению кипячением.

Все флаконы и ампулы с биопрепаратами должны быть опечатаны и снабже-ны этикетками, на которых указывают наименование препарата, биофабрику, дату выпуска, срок годности, серию, номер госконтроля, дозировку. Хранят и транс-портируют прививочные средства при условиях, не влияющих на их внешний вид, специфические свойства в течение срока годности.

В производственных условиях биопрепараты хранят в холодильных установ-ках с определенным микроклиматом или на специальных складах (подвалы). По-мещения (склады) для хранения биопрепаратов должны быть сухими, темными и прохладными, с равномерной в течение всего года температурой 2-15 °С. Для хранения каждого вида препарата должно быть выделено определенное оборудо-ванное место или отделение (полка, шкаф). Воспрещается совместное хранение годных и выбракованных препаратов. Помещение для хранения препаратов долж-но быть закрыто, а ключ должен находиться у ответственного лица. Биопрепараты выбраковывают при отсутствии на флаконах этикеток, повреждении упаковки, просачивании препарата через пробку, промерзании, наличии посторонних при-месей, плесени, пленок, комочков, гнилостного запаха, изменений установленной консистенции и цвета. Браковку препаратов проводят комиссионно с участием ве-теринарного врача. Уничтожение забракованных препаратов проводят путем ав-токлавирования или кипячения при составлении акта.

Транспортировку больших партий биопрепаратов в зимнее время производят в обогреваемых вагонах или на обогреваемых автомашинах.