Лекции / 8_Генетический подход

Информацию по данному методу можно получить

 Ames B.N., McCann J., Yamasaki E.

Detection of carcinogens and mutagens in the Salmonella/microsome test: Assay 300 chemicals// Prоc. Nat. Acad. Sci. − USA,

1975. − V. 72. − P.5135−5139.

Фонштейн Л.М., Абилев С.К., Бобринев Е.В., Калинина Л.М. и др.

Методы первичного выявления генетической активности загрязнителей среды с помощью бактериальных тест-систем. Методические указания. – М.: Гос.комитет по науке и технике, 1985.- 35 с.

Растения в качестве тест-объектов

Термин «мутация» был предложен голландским ботаником де Фризом в 1909 г. для обозначения случайных наследственных изменений у растений.

Преимущества

1.Хорошо изучен генетический аппарат растительных клеток.

2.Возможность получения репрезентативных генетически однородных выборок.

3.Низкая частота спонтанных мутаций.

4.Простота учета генетических эффектов.

5.Короткие сроки вегетации.

6.Простота проведения экспериментов.

7.Возможность получения нужных объемов выборок.

8.Высокая чувствительность.

9.Высокая воспроизводимость результатов.

Растения в качестве тест-объектов

Недостатки

1.Отсутствие информации о механизмах влияния на метаболизм растений ксенобиотиков.

2.Прочная целлюлозная оболочка препятствует проникновению в клетку отдельных химических веществ.

3.Клетки высших растений содержат больше цитоплазматической ДНК, чем клетки животных.

Обзор методов оценки генотоксичности среды

 АНАФАЗНЫЙ МЕТОД

Заключается в подсчитывании нормальных и аномальных анафаз и телофоз в делящихся клетках.

Вычисляют процент клеток с аберрациями от общего числа клеток, находящихся в этих же фазах деления.

Метод удобен для анализа растений с большим числом хромосом и/или с плохо изученной морфологией.

Хромосомные мутации – анафазный тест

Алиум-тест

Отрезать 2 см зоны деления корешка

Прорастить

Зафиксировать и приготовить препарат

Анафазные хромосомные аберрации в корешках лука

а) целая хромосома

b) хромосомный фрагмент c) мост

Обзор методов оценки генотоксичности среды

МЕТАФАЗНЫЙ МЕТОД.

Учет аберраций хромосом в клетках апикальной меристемы растений.

1.Изучение на стадии метафазы.

2.Хромосомы каждого кариотипа обладают постоянством числа, формы и внутренней структуры.

Принцип метода основан на учете образованных хромосомных аберраций в клетках апикальной меристемы растений после обработки семян мутагенами.

Растения тест-объекты генотоксичности среды

Конские бобы (Vicia faba) – 12 n,

Лук (Allium cepa) – 16 n,

Традесканция

(Tradescantia paludosa)

–12 n,

Кукуруза (Zea mays) – 20 n,

Ячмень (Hordeum vulgare) – 14 n,

Соя (Glycine max) –

12 n.

На рисунке метафазные хромосомы конского боба (слева) и человека (справа сверху): 1 – метацентрические, 2 – субметацентрические, 3 – акроцентрические, 4 - хромосомы со вторичной перетяжкой.