Глава 2.12

Моноцитарный эрлихиоз лошадей

Гейнсвиль, Флорида

Острый, быстро развивающийся колит лошадей впервые был обнаружен и описан в регионе реки Потомак в середине 1970-х гг. Neorickettsia risticii (ранее известная как Ehrlichia risticii) была изолирована и распознана в 1984 году в качестве возбудителя, вызвавшего данный синдром, который был назван миноцитным эрлихиозом лошадей (ЕМЕ), или Лихорадкой лошадей Потомака. Серологические исследования показывают, что данное заболевание широко распространено и встречается в Соединенных Штатах, Канаде и Европе. Были выявлены три клинических синдрома ЕМЕ, которые включают различные степени симптоматического клинического заболевания, характеризующегося инфекционным тифлоколитом, субклинической инфекцией и 7-месячным абортированием. Наиболее важным недавним вкладом в понимание данного заболевания является информация, касающаяся жизненного цикла N. risticii.

БИОЛОГИЯ, ЖИЗНЕННЫЙ ЦИКЛ И ЭПИДЕМИОЛОГИЯ

N. risticii принадлежит группе микроорганизмов, называемых пурпурными бактериями, которые представляют собой крошечные грамотрицательные микроорганизмы с высокой степенью плеоморфизма (наличие в жизненном цикле вида нескольких разных форм – прим. перев.). Подобно эрлихиальным микроорганизмам, данный микроорганизм окрашивается в синий или фиолетовый цвет при окраске по Романовскому, поражает лейкоциты хозяина и зависит от переносчика инфекции. Данный микроорганизм обладает уникальным свойством прикрепления к энтероцитам в кишечнике лошадей. По данным электронной микроскопии, он находится в цитоплазме инфицированных клеток внутри вакуолей (морул) клеток хозяина. Данные микроорганизмы встречаются поодиночке или в группах, первые имеют электроннопрозрачный корпус от 0,8 до 15 мкм, а последние – электронноплотный корпус размером 0,2-0,4 мкм. Первоначальные наблюдения данного микроорганизма позволяют предположить, что его жизненный цикл напоминает эрлихиальные микроорганизмы, передача которых осуществляется главным образом посредством клещей.

Попытки определить жизненный цикл N. risticii являлись целью интенсивного исследования, которое продолжалось почти 20 лет, в ходе которого вначале прилагались усилия для обнаружения клеща-переносчика инфекции и «хозяев», служащих зимующим резервуаром, оказались безуспешными. Определению жизненного цикла значительно способствовали важные наблюдения относительно биологии N. risticii. Во-первых, секвенирование 16S рибосомной РНК доказало, что различные виды Ehrlichia выстраивались в ряд в соответствии с тремя различными геногруппами и что N. risticii обладает высокой степенью гомологии к Ehrlichia sennetsu (моноцитарный эрлихиоз человека; теперь известен как Neorickettsia sennetsu) и Neorickettsia helminthoeca (отравление собак при кормлении лососем). Оба вида «хозяев», человек и собака, заражаются при потреблении или поедании непрожаренной или сырой рыбы, зараженной на стадии метацеркария, который содержат эти бактерии. И, наконец, была доказана, пероральная передача N. risticii путем экспериментального заражения пони как чистой культурой N. risticii, так и контаминированным кормом. Поскольку все предыдущие попытки переноса инфекции клещами не увенчались успехом, были начаты исследования по обнаружению и переносу инфекции моллюсками, являющимися резервуарами N. risticii.

Современные данные показывают, что возможным переносчиком N. risticii являются трематоды поражающие пресноводных улиток. Стадия метацеркарии этих трематод также заражает многих водяных насекомых. Настоящий способ распространения возбудителя заболевания от улиток или водяных насекомых к лошадям неизвестен. Стадии трематоды (церкария и спороциста) обнаруженные в камбале, и способные заражает улитку Juga yrekaensis и, которые инокулируется внутривенно и подкожно у лошадей, могут успешно служить переносчиками возбудителя ЕМЕ. Вид улитки Elimia livescens, обнаруженной в штате Огайо, также был поражен N. risticii. Хотя метацеркарии этих гельминтов выделенные от J. yrekaensis могут теоретически проникать через кожу, они не передаются внутрикожно лошадям, стоящим в воде, содержащей метацеркарии. Однако, пероральное заглатывание водяной майской мухи Dicosmoecus gilvipes, зараженной метацеркариями, привело к передаче ЕМЕ одной из лошадей. Метацеркарии обнаруженные в камбале имеют широкий круг хозяев бактерии, а зараженные метацеркарием водяные насекомые, которые являются скрытыми носителями ДНК N. risticii, включают следующие виды: водяные майские мухи, поденки, равнокрылые стрекозы, разнокрылые стрекозы и мухи-веснянки.

Несмотря на имеющиеся данные о широком распространении N. risticii, наиболее доминирование серотипа и возникновение заболевания связано с эндемическими зонами. Наибольшее доминирование серотипа в эндемических зонах обычно встречается около пресноводных ручьев и рек. Наиболее высокий фактор риска возникновения заражения N. risticii, связан с близостью прудов открытых водоемов и сокращением применения инсектицидов. Кроме того, в зонах умеренного климата заражение N. risticii значительно связано с временем года, причем самый разгар клинических признаков имеет место с середины до конца лета. В эндемических районах Калифорнии наибольшая степень заражения N. risticii улиток J. yrekaensis происходит поздней весной и в конце лета. В исследовании, проведенном в штате Огайо, поражение улиток E. livescens происходило главным образом в период между июнем и октябрем. Водяная майская муха также больше всего нападает с середины до конца лета.

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ

Сероэпидемиологические исследования позволили обнаружить бóльшую распространенность заболевания опосредованного N. risticii, чем патологии, которая является причиной лишь симптоматического клинического заболевания. Существует большое количество данных о том, что большинство клинических заболеваний протекает либо бессимптомно, либо субклинически. Для возникновения субклинической инфекции характерна сезонность; у здоровых лошадей обнаруживается, что повышения титров антител происходит в конце лета и в начале осени. В июле и августе доминирование серотипа варьирует в довольно высоких масштабах.

Клиническое заболевание с наличием симптомов, относящееся к N. risticii, характеризуется внезапным началом анорексии, упадком сил и двухфазным повышением температуры тела. Первое повышение температуры тела возникает примерно на 7-10 день после экспериментального заражения. Такой ранний подъем температуры тела обычно незначителен, между 38,8 и 39,3º С и часто бывает временным, длится 1-2 дня. Второй этап подъема температуры, наступающий на 10-14 день после экспериментального заражения, обычно более тяжелый и длится от 5- до 10 дней. Во время этого второго этапа подъема температуры появляются обычно другие распространенные клинические признаки. Анорексия является одним из наиболее распространенных признаков ЕМЕ и может носить угрожающий характер. Степень анорексии не зависит от тяжести других клинических признаков, например, диареи и лихорадки. Консистенция кала у клинически больных лошадей варьируется от отсутствия патологических изменений в стуле до тяжелой затяжной диареи с водянистым стулом. Боль в брюшной полости может сопровождаться желудочно-кишечными (ЖК) симптомами и обычно связана с развитием тяжелой диареи. В редких случаях у лошадей может наблюдаться назогастральный рефлюкс вследствие тяжелой формы кишечной непроходимости. Другим постоянным и характерным признаком ЕМЕ является отсутствие кишечных звуков в обеих "голодных" паралюмбальных ямках и большая зона гиперрезонанса (свиста) в правой паралюмбальной ямке. Возможно возникновение обезвоживания и признаков, напоминающих эндотоксемию, которые приводят к возникновению дисфункции сердечно-сосудистой системы, характеризующейся увеличением частоты сердечных сокращений, дыхания и застоем в слизистых оболочках. Продолжительность клинических признаков у лошадей с острым течением заболевания варьируется от 2 до 10 дней, у большинства они продолжаются 8 дней.

У пораженных лошадей также имеется предрасположенность к ламиниту, возникновение которого также не зависит от формы развития и тяжести диареи. Были отмечены вспышки ЕМЕ, характеризующиеся высокой лихорадкой, упадком сил, гиповолемическим шоком и ранним началом формы острого ламинита без заметных признаков расстройства деятельности со стороны желудочно-кишечного тракта. Такой специфический синдром в настоящее время относят к возможным различиям между штаммами N. risticii. У лошадей с ЕМЕ также наблюдается подкожный отек вдоль вентральной части брюшины.

На данный момент не существует информации о том, что заражение N. risticii приводит к хроническому заболеванию. Хотя N. risticii можно обнаружить путем культивирования и полимеразной цепной реакции (PCR) во время инкубационного периода и появления клинических признаков (по крайней мере, в течение 30 дней после инокуляции), попытки выделения микроорганизма при экспериментальном заражении после исчезновения клинических признаков оказались безуспешными. Титры антител остаются высокими более 12 месяцев, имитируя наличие инфекции, но большинство пони и лошадей без терапевтического вмешательства, зараженных экспериментальным путем, выздоравливают самопроизвольно. Все патологические изменения, по-видимому, происходят вследствие осложнений, например, ламинита. Все первоначальные лейкомоидные и гематологические нарушения исчезают в период выздоровления; очень важное значение имеет кратковременно выраженный лейкоцитоз. Заражение N. risticii нельзя считать главным дифференциальным признаком у лошадей с хроническими гематологическими нарушениями.

Первые предположения о взаимосвязи между заражением N. risticii и расстройством репродуктивной функции появились после возникновения данной патологии, наблюдавшейся в питомниках с высокой частотой проявления клинических признаков заболеваемости, в связи с заражением N. risticii. Жеребые кобылы с клиническими признаками ЕМЕ абортировали на 7-месячном сроке жеребости, независимо от тяжести заражения. У кобыл, зараженных на 90-120 днях жеребости, впоследствии самоабортирование происходило на 180-240 день беременности. Выкидыш происходит внезапно, при этом плод хорошо сохраняется. У кобыл наблюдается незначительное количество предварительных признаков абортирования, хотя, после выкидыша часто встречается задержка плаценты. Любое клиническое заболевание заканчивающиеся абортированием плода обычно вызывает задержку плаценты. Тяжесть ранней стадии клинического проявления заболевания не зависит от возникновения абортирования.

КЛИНИЧЕСКАЯ ПАТОЛОГИЯ

Различия в гематологических показателях включают увеличение гематокрита (PCV) и концентрации протеина в плазме вследствие обезвоживания и сгущения крови. Возможно развитие кратковременной нерегенеративной анемии, которая у некоторых лошадей может носит тяжелый характер. Часто встречается временное уменьшение общей численности лейкоцитов. Развитие абсолютной лейкопении непостоянно; при ее наличии также могут возникать нейтропения, лимфопения и эозинопения. Также может увеличиваться количество моноцитов периферической крови. У лошадей часто встречается тенденция к тромбообразованию, и у лошадей с ЕМЕ, зараженных экспериментальным и естественным путями, была документально подтверждена активизация системы коагуляции. Значительные нарушения включают заметные патологические изменения количества фибриногена в плазме, фибронектина, фактора VIII, α₂-антиплазмина и плазминогена. Увеличение фибриногена, фактора VIII и активированного частичного тромбопластинового времени (APTT) приводит к уменьшению выживаемости.

ДИАГНОСТИКА

Для точной посмертной постановки диагноза заражения посредством N. risticii необходимо сочетание клинических поражений, клинико-патологических нарушений, анализов на наличие антитела и определения антигенов. Дифференциальный диагноз включает любой клинический синдром энтероколита. Специфическими дифференциальными синдромами являются сальмонеллез, клостридиальная диарея, кишечная непроходимость вследствие смещения или закупорки и вирусный артериит лошадей. Требуется одновременное проведение диагностических анализов для исключения данных заболеваний.

И непрямое исследование флуоресцентных антител (IFA), и ферментный иммуно-сорбентный тест (ELISA) были разработаны для обнаружения антител к N. risticii; однако, большинство диагностических лабораторий доверяют только IFA. Необходимо проведение двойного анализа сывороточных титров; однократное исследование титров не приносит пользу для подтверждения диагноза ЕМЕ. Результат, равный 1:80, считается положительным; однако, методика PCR позволила обнаружить, что результаты нескольких лошадей, зараженных естественным путем, были положительными, несмотря на низкие титры. У лошадей, зараженных экспериментальным путем, наблюдается высокий подъем титров между 4 и 10 днями перед появлением клинических признаков; четырехкратное увеличение титров часто появляется в течение первой недели. IFA не дифференцирует титры, возникшие в результате вакцинации или перенесенной инфекции. При анализе IFA также возможно большое количество ложноположительных результатов. Экспериментальным путем было разработано несколько тестов ELISA, отличающихся повышенной специфичностью наряду с превосходной чувствительностью по сравнению с IFA. В настоящее время ни один из тестов ELISA не имеется в продаже. Серологическое исследование взрослых лошадей и плодов не играет никакой роли при диагностике абортированного плода, вызванного заражением N. risticii.

Обнаружение антигенов проводится тремя способами: (1) распознавание морулы в лейкоцитах во время острой фазы заболевания; (2) изоляция данных микроорганизмов из лейкоцитов и (3) PCR лейкоцитов или вытяжки из каловых масс. Во время острой фазы заболевания и перед введением антибиотиков можно провести микроскопирование мазка окрашенного по методу Райта/Гимза, и в моноцитах будут видны пурпурные цитоплазматические включения. Данная процедура трудоемкая, и если первоначальная лейкопения носит тяжелый характер, обнаружение пораженных клеток будет проблематичным. Успешная изоляция N. risticii из периферической крови требует культурального исследования в пределах диагностической лаборатории, и успешное определение возбудителя может занять от нескольких дней до нескольких недель.

Проведение PCR лейкоцитарной смеси или вытяжки из каловых масс является чувствительным способом для определения антигенов N. risticii. У экспериментально зараженных животных PCR тест, с взвесью лейкоцитов или вытяжкой из каловых масс, обладал большей чувствительностью, чем культуральное исследование. Однако было доказано, что PCR является менее чувствительной, чем культуральное исследование клинических образцов. Такая легкая потеря чувствительности PCR возникает, возможно, вследствие контакта с образцами. При соответствующем обращении с исследуемыми образцами методика PCR обеспечивает чувствительное определение возбудителя с минимальной концентрацией. Кроме того, обнаружение возбудителя посредством PCR по анализам крови является более чувствительным, чем определение по вытяжке из каловых масс. У больных лошадей без терапевтического лечения, антигены N. risticii можно обнаружить посредством PCR в течение 30 дней после заражения. Сравнение тестов по определению возбудителей посредством IFA и PCR доказало, что лошади могут быть PCR-положительными даже при низких титрах – менее 1:20. Таким образом, ранние анализы на данной стадии заболевания – перед лечением – скорее всего, дадут положительные клинические реакции.

ДАННЫЕ ПРИ ВСКРЫТИИ

Посмертных патогномоничных изменений при N. risticii не существует. Данные тщательного вскрытия при острой стадии заболевания, прежде всего, включают заполненные жидкостью слепую кишку и толстый кишечник. Также заметны участки некроза и гиперплазии лимфоидных фолликулов и лимфатических узлов. Часто наблюдаются гиперемия и образование язв на слизистых. Микроскопические патологические изменения включают области умеренной или тяжелой лимфогистиоцитарной инфильтрации подслизистой оболочки и самой оболочки. В тяжелых случаях происходит отслоение слизистой оболочки в полость кишечника. Для определения N. risticii в тканях были описаны методы окрашивания серебром и иммуногистохимического окрашивания; однако, они редко используются в диагностических лабораториях. Возможно применение электронной микроскопии для определения N. risticii инфекции во время заболевания. Энтероциты лошадей имеют большое количество контрастных и неконтрастных включений. Данный микроорганизм часто содержится в макрофагах и энтероцитах полости кишечника.

В отличие от заболевания взрослых, посмертные патологические изменения плодов, абортированных вследствие N. risticii, постоянны, подтверждают диагноз и характерны для данного синдрома самоабортирования. У абортированных плодов наблюдается большое количество мекония и мягкая, рыхлая печень. Наблюдается триада гистопатологических изменений – в том числе лимфогистиоцитарный энтероколит, перипортальный гепатит и тяжелое воспаление селезенки, характеризующееся интенсивной лимфогистиоцитарной инфильтрацией и лимфоидным некрозом. У абортированных плодов также часто встречается лимфогистиоцитарный миокардит. Энтероколит является самым важным клиническим показателем, при котором обычно наблюдаются воспалительные инфильтраты лимфоцитов, макрофагов и нейтрофилов. В подслизистой оболочке выражено хорошо заметное периваскулярное воспаление, а в полости кишечника часто обнаруживаются воспалительные клетки. Такие патологические изменения наблюдаются как в тонком, так и в толстом отделах кишечника абортированных плодов.

ЛЕЧЕНИЕ

Против N. risticii инфекции предпочтительным препаратом применения до сих пор остается тетрациклин. Тетрациклин вводится во время клинически выраженных признаков заболевания. Аналогично другим инфекциям, например, Anaplasma у крупного рогатого скота и Ehrlichia у собак, лечение лошадей во время инкубационного периода задерживает появление клинических признаков, но заболевание все же может возникать, хотя и в менее тяжелой форме. Поэтому лечение антибиотиками в качестве профилактики скорее всего будет безуспешным. Лечение окситетрациклином (6,6 мг/кг в/в через каждые 24 часа в течение 5 дней) у лошадей с острым клиническим заболеванием, вызванным N. risticii, приводит к быстрой реакции на лечение через 24-48 часов. Другие антибиотики, обладающие эффективностью in vivo, включают сочетание рифампина (10 мг/кг перорально через каждые 12 часов) с эритромицином стеаратом (25 мг/кг перорально через каждые 12 часов) в течение 5 дней лечения. В настоящее время остается неизвестным, предупреждает ли лечение клинически пораженных племенных кобыл во время диарейной фазы заболевания последующее возникновение выкидыша. Согласно эпизодическим сообщениям, количество абортированных плодов после перенесенного ЕМЕ заболевания уменьшается в питомниках (с большим количеством случаев ЕМЕ) при ранней противомикробной терапии.

Поддерживающая терапия, состоящая из введения трансфузионных внутривенных (в/в) инъекций, имеет очень важное значение для лечения гиповолемии и шока. Может наблюдаться тяжелая форма диареи, и у многих лошадей развивается тяжелая предпочечная азотемия, которая устраняется инфузионной терапией даже при раннем начале лечения антибиотиками. В случаях длительной анорексии лошадям в инфузионный раствор добавляют кальций, магний и калий. Противовоспалительное лечение включает флуниксин меглумин (0,25-1,1 мг/кг в/в или через каждые через 6-8 часов перорально) или фенилбутазон (2,2-4,4 мг/кг в/в или через каждые 12 часов перорально). Наиболее распространенным осложнением ЕМЕ, которое может иметь летальный исход, является ламинит. В начальной фазе развития заболевания можно применять другое профилактическое лечение. Для предупреждения ламинита не существует специфического универсального лечения, и достоверные данные об эффективности большинства из нижеследующих препаратов отсутствуют. Натрий гепарин (40-60 МЕ/кг п/к через каждые 8 часов) и аспирин (10-20 мг/кг перорально через день) применяются для предупреждения образования капиллярных сгустков. Применение диметил сульфоксида (DMSO) для связывания радикалов гидроксила (1 г/кг в виде 10-20 % раствора в/в или перорально через каждые 24 часа) является еще одним способом противовоспалительного лечения. Для расширения сосудов микроциркулярной части сосудистого русла часто применяется парентеральное введение ацепромазина (0,02-0,04 мг/кг в/м через каждые 6-8 часов) или введение нитроглицерина.

ПРОФИЛАКТИКА

В продаже имеется несколько вакцин для защиты от заражения N. risticii. Эти препараты состоят из убитых или инактивированных бактериальных вакцин с адъювантом. Имеется незначительное количество опубликованных данных об эффективности вакцинации против N. risticii. В одной из ранних сообщений было отмечено, что, хотя у пони, зараженных экспериментальным путем, проявлялись клинические признаки заболевания, их тяжесть была значительно меньше, чем у невакцинированных пони. Недавно проведенные эпидемиологические исследования показали, что вакцинация за пределами эндемических зон не имеет смысла. В целом вакцинация лошадей приводила к небольшому уменьшению затрат и тяжести заболеваний по сравнению с невакцинированными лошадьми. Некоторые ветеринары, которые работают в эндемических зонах, считают, что у вакцинированных лошадей заболевание протекает в менее тяжелой форме. Однако к вышеуказанным данным нужно относиться с осторожностью; одновременное раннее лечение тетрациклином и улучшение поддерживающей терапии также оказывают влияние на выживаемость лошадей, вакцинированных против ЕМЕ. Безуспешность введения вакцины или развитие скоротечного заболевания возникала вследствие антигенной вариации между полевыми штаммами N. risticii. Вакцинация не предупреждает возникновение самоабортирования опосредованного заражением N. risticii.

БОРЬБА С ЗАБОЛЕВАНИЕМ

Недавние исследования, связанные с определением жизненного цикла N. risticii, предоставят обширные данные для борьбы с ЕМЕ в эндемических зонах. Бесспорно, необходимо ограничивать доступ крупного рогатого скота к пресным источникам и открытым водоемам. По крайней мере, наложить карантинные ограничения в течение месяца максимального возникновения заболевания. Борьба с переносчиками инфекции, которых предстоит распознать, вероятно, станет главной целью будущих методов борьбы с заболеванием.