Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
ЛЕКЦИЯ_2_КРОВЬ II (белки+иммуно).doc
Скачиваний:
10
Добавлен:
24.11.2019
Размер:
3.48 Mб
Скачать

Иммунофлуоресцентное исследование

Одна из наиболее простых процедур клинической диагностики. На пленку наносят исследуемый объект (сыворотка крови и т.п.). Образец может содержать, а может и не содержать антигенов возбудителя подозреваемой патологии. Для проверки на ту же пленку наносят раствор антител к искомому антигену, конъюгированных (т.е. связанных ковалентно) с молекулами флуоресцирующего соединения, которое в данном случае выступает в роли маркера, удобного для обнаружения. Пленка выдерживается в растворе антител некоторое время, достаточное для связывания антител с антигенами (если таковые имелись в исследуемом образце), после чего избыток несвязавшихся антител смывается буфером, а пленку рассматривают на флуоресцентном микроскопе. Если в образце присутствовал антиген патологии, с его молекулами будут прочно связаны молекулы меченых флуоресцеином антител и под микроскопом можно наблюдать зеленое окрашивание.

Иммуногистохимические исследования

Эти исследоваПрактически близки к вышеописанному методу. Отличие: контрольные антитела к выявляемой патологии конъюгированы не с флуоресцентным маркером, а с белком-ферментом (часто используются пероксидаза хрена или щелочная фосфатаза). После проведения этапа сорбции антител на возможных молекулах антигена требуется еще прибавление раствора субстрата для протекания ферментативной реакции. Одна единственная молекула белка-фермента способна катализировать превращение десятков и сотен тысяч молекул неокрашенного субстрата с образованием окрашенных продуктов, усиливая таким образом "сигнал" и повышая чувствительность определений. После остановки реакции в местах нахождения антигена появляются цветные окрашенные полосы.