Ема 5. Бактериологические методы исследования.
Содержание:
Отбор и доставка материала в лабораторию.
Бактериологические методы исследования.
Питательные среды.
Методы посевов.
Методы культивирования и выделения чистых культур бактерий.
Идентификация бактерий.
Принципы диагностики микозов.
ОТБОР И ДОСТАВКА МАТЕРИАЛА В ЛАБОРАТОРИЮ
Основные правила взятия и направления материала в микробиологическую лабораторию.
Результаты микробиологических исследований во многом зависят от правильного выбора, соблюдения всех правил отбора материала и направления его в лабораторию. Выбор материала определяется клинической картиной заболевания, предполагаемой локализацией возбудителя в организме на данном этапе и путей его выделения в окружающую среду.
Материал берут в ранние сроки заболевания, до начала антимикробной терапии в достаточном количестве.
Следует исключить попадание в материал антибиотиков, антисептиков, дезинфектантов.
При заборе, хранении и направлении материала в лабораторию строго соблюдаются правила техники бактериологической безопасности.
Материал собирают, соблюдая правила асептики для предупреждения его возможной контаминации нормальной микрофлорой организма больного и микроорганизмами окружающей среды. Используют стерильные инструменты и стерильную посуду, закрывающуюся ватно-марлевыми пробками. После взятия материала его в максимально короткие сроки направляют в лабораторию. При отсутствии такой возможности материал, за исключением ликвора, сохраняют непродолжительное время в холодильнике при 4°С.
Материал транспортируют в специальных биксах, пеналах или металлических контейнерах, которые после использования подвергают дезинфекции.
В микробиологической лаборатории все остатки патологического материала подлежат уничтожению (путем автоклавирования или сжигания).
Все материалы, направляемые в лабораторию, должны иметь сопроводительный документ - направление на специальном бланке, где указаны фамилия, имя, отчество больного, возраст, вид материала, дата взятия, предполагаемый клинический диагноз и другие сведения.
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Бактериологические методы исследования - это совокупность методов изучения свойств микроорганизмов, определения их систематического положения. Для этого необходимо прежде всего изолировать отдельные виды микробов и вырастить их в виде так называемых «чистых культур», а затем идентифицировать, т.е. установить соответствие выделенных микроорганизмов видам, описанным в специальных определителях.
Колония - это популяция микробных клеток одного вида, сформировавшаяся в результате деления одной микробной клетки в условиях культивирования на плотной питательной среде при оптимальной температуре. Чистая культура - масса клеток, состоящая из микроорганизмов, принадлежащих одному виду и полученных как потомство одной клетки. Чистую культуру обычно получают путем пересева на стерильную питательную среду клеток, взятых из отдельно стоящей колонии бактерий. Культуральные свойства бактерий устанавливаются по морфологии колоний и особенности роста культуры на питательных средах. Биохимические признаки (свойства) бактерий определяются набором ферментов, присущих определенному роду, виду, варианту.
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БАКТЕРИЙ
Питательные среды предназначены для накопления, выделения, изучения и сохранения микроорганизмов. По составу питательные среды могут быть синтетическими и натуральными. По консистенции питательные среды могут быть жидкими, полужидкими (0,2-0,7% агара) и плотными (1,5-2% агара). Различают питательные среды общего назначения (универсальные) и специальные питательные среды. Питательные среды общего назначения пригодны для выращивания многих видов микроорганизмов и применения в качестве основы для приготовления специальных питательных сред. Специальные питательные среды предназначены для избирательного культивирования определенных видов микроорганизмов, изучения их свойств и хранения.
Рис. 1. Плотные питательные среды в чашках Петри.
МЕТОДЫ ПОСЕВОВ
В зависимости от цели исследования, характера посевного материала и среды используют различные методы посева. Все они включают обязательную цель: оградить посев от посторонних микробов, поэтому посев производят в асептических условиях. Для посевов на плотные питательные среды применяют шпатель, бактериологическую петлю, иглу, тампон. При посеве проводят петлей по поверхности среды линии, оставляя при этом клетки бактерий на среде. После посева чашки закрывают и переворачивают их вверх дном. Надписи на чашках делают со стороны дна, а на пробирках - в верхней части.
Рис. 2. Посев культуры на плотную питательную среду (слева); результат посева: видны колонии бактерий (в центре и справа).
При посеве на жидкую среду петлю слегка погружают в жидкость и растирают посевной материал на стенке пробирки, после чего смывают его средой.
МЕТОДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ БАКТЕРИЙ
Для успешного культивирования, помимо правильно подобранных сред и правильно произведенного посева, необходимы оптимальные условия: температура, влажность, аэрация (снабжение воздухом). Культивирование анаэробов сложнее, чем аэробов, для удаления воздуха из питательной среды используют различные способы. Выделение отдельных видов бактерий (чистой культуры) из исследуемого материала, содержащего, как правило, смесь различных микроорганизмов, является одним из этапов любого бактериологического исследования. Чистой культурой микробов получают из изолированной микробной колонии. При выделении чистой культуры из крови (гемокультуры) ее предварительно «подращивают» в жидкой среде: 10-15 мл стерильно взятой крови засевают в 100-150 мл жидкой среды. Соотношение засеваемой крови и питательной среды 1:10 не случайно - так достигается разведение крови (неразведенная кровь губительно действует на микроорганизмы).
Этапы выделения чистой культуры бактерий I этап (нативный материал) Микроскопия (ориентировочное представление о микрофлоре). Посев на плотные питательные среды (получение колоний). II этап (изолированные колонии) Изучение колоний (культуральные свойства бактерий). Микроскопическое изучение микробов в окрашенном мазке (морфологические свойства бактерий). Посев на скошенный питательный агар для выделения чистой культуры. III этап (чистая культура) Определение культуральных, морфологических, биохимических и других свойств для идентификации культуры бактерий
ИДЕНТИФИКАЦИЯ БАКТЕРИЙ
Идентификацию выделенных бактериальных культур проводят путем изучения морфологии бактерий, их культуральных, биохимических и других признаков, присущих каждому виду.
А
Б
Рис. 3. А. Стрептококки (микроскопия препарата). Б. Характерный для гемолитического стрептококка бета-гемолиз на кровяном агаре.
ПРИНЦИПЫ ДИАГНОСТИКИ МИКОЗОВ
Один из основных методов выявления возбудителей микозов - микроскопия. Методы выявления возбудителей микозов: выделение возбудителя (микологический), серологические исследования, определение нуклеиновых кислот.
Рис. 4. Методы выявления возбудителей микозов разные, но основной - микроскопия.
ПРЕДМЕТ И ЗАДАЧИ МЕДИЦИНСКОЙ ПАРАЗИТОЛОГИИ
Медицинская паразитология изучает паразитов человека животного происхождения, вызываемые ими болезни и методы борьбы с ними. Протозоология - наука о простейших. Гельминтология - наука о гельминтах ( паразитических червях). Арахноэнтомология - наука о членистоногих.
Паразитизм – форма сожительства двух организмов, выгодная для одного и вредная для другого вида. Временные паразиты– связаны с хозяином и питаются за его счет на определенной стадии развития. Постоянные паразиты– тесно связаны с хозяином и не могут развиваться без него. Хозяин – это организм, который обеспечивает паразита жильем и пищей. Дефинитивные (основные, окончательные) – в их организме обитает половозрелая форма паразита и проходит его половое размножение. Промежуточные – в их организме обитает личиночная стадия паразита или проходит его бесполое размножение. Дополнительные, или вторые промежуточные хозяева.
Болезни, вызываемые паразитами животного происхождения, называются паразитарнымиили и инвазионными . Болезни, вызываемые простейшими, называются протозойные болезни, или протозоозы; гельминтами – гельминтозы, насекомыми – энтомозы, клещами – акарозы. Антропонозы (антропонозные инвазии) - болезни, источником возбудителей которых является человек . Зоонозы - болезни, источником возбудителей которых являются дикие или домашние животные. Трансмиссивные болезни - болезни, возбудители которых передаются через укусы кровососущих насекомых и клещей.. Природно-очаговые болезни - болезни, возбудители которых могут длительно поддерживаться в естественных условиях за счет передачи непосредственной или через кровососущих членистоногих-переносчиков от животного-донора животному-реципиенту - без всякого участия человека, т.е. в природных очагах инфекции (инвазии). У человека благоприятные условия обитания разные паразиты находят практически в любом органе.
Вредоносное действие паразита на хозяина сводится к следующему:
механическое воздействие (сдавливание тканей хозяина);
нарушение целостности тканей органами прикрепления;
отнятие пищи (питаются за счет хозяина);
токсическое воздействие (паразиты выделяют токсины и прочие продукты).
Предупреждение и борьба с паразитарными болезнями базируется на знании закономерностей возникновения инвазий и их распространение среди людей.