Лабораторная работа №2 Биуретовая реакция (Пиотровского)

Цель работы:

Провести биуретовую реакцию (Пиотровского)

Ход работы:

В 2 пробирки наливают: в одну – 5 капель 1%-ного раствора яичного белка, в другую 5 капель 1% раствора пшеничного белка. В обе пробирки прибавляют по 5 капель 10%-ного раствора едкого натра и по 1 капле 1% раствора сернокислой меди. В обоих пробирках появляется устойчивое красно-фиолетовое (или сине-фиолетовое) окрашивание.

В пробирку наливают 20 капель 10% раствора едкого натра, добавляют 1-2 капли 1% раствора сернокислой меди и перемешивают. Затем набирают в пипетку разбавленный раствор белка и спускают его по стене пробирку так, чтобы он наслаивался сверху. На границе двух слоев жидкости образуется фиолетовое кольцо.

Вывод:

В данной работе мы провели биуретовоую реакцию (Пиотровского). При добавлении к щелочному раствору белка раствора сернокислой меди жидкость приобретает красно-фиолетовое или сине-фиолетовое окрашивание. Реакция обусловлена присутствием в белке пептидных связей, которые с ионами меди образуют окрашенные солеобразные комплексные соединения. Окраска биуретового комплекса зависит от количества медной соли в растворе и от структуры вещества, с которым координирован ион меди. Продукты распада белка – пептоны и полипептиды – дают биуретовую реакцию с красным оттенком.

Лабораторная работа №3 Нингидриновая реакция на α-аминокислоты

Цель работы:

Провести нингидриновую реакцию на α-аминокислоты

Ход работы:

В 3 пробирки наливают: в одну 5 капель 1% раствора яичного белка, в другую 5 капель дистиллированной воды и добавляют около 0.1 г пшеничной муки, в третью – 5 капель 0.1% раствора глицина.

В каждую пробирку наливают по 2-3 капли 0.1% раствора нингидрина и кипятят.

Через 1-2 минуты появляется розовое, красное, а затем синее окрашивание. При стоянии интенсивность окраски увеличивается.

Вывод:

В данной лабораторной работе провели нингидриновую реакцию на α-аминокислоты. Раствор белка при нагревании с разбавленным раствором нингидрина окрашивается в синий цвет. Реакция обусловлена наличием в белке остатков α-аминокислот. При взаимодействии с нингидрином α-аминокислоты окисляются и распадаются с образованием аммиака, альдегида и угольной кислоты. Нингидрин восстанавливается и конденсируется с другой частицей нингидрина и аммиаком. В результате образуется сложное соединение мурексидного строения, окрашенное в синий цвет.

Лабораторная работа №4 Ксантопротеиновая реакция на циклические аминокислоты

Цель работы:

Провести ксантопротеиновые реакции на циклические аминокислоты

Ход работы:

В 3 пробирки наливают: в первую 5 капель 1% раствора яичного белка, во вторую – 5 капель 1% раствора пшеничного белка, в третью-5 капель 1% раствора желатина. Во все пробирки добавляют 2-3 капли концентрированной азотной кислоты и нагревают.

В первой и второй пробирках жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет, в третьей получается едва заметное бледно-желтое окрашиваение. Желатин не содержит циклических аминокислот; бледно-желтое окрашивание обусловлено незначительной примесью других белков.

После охлаждения в каждую пробирку добавляют по 10 капель концентрированного раствора аммиака или 30% раствора едкого натра. Окраска жидкости переходит в оранжевую.

Вывод:

В данной лабораторной работе провели ксантопротеиновую реакцию на циклические аминокислоты. При нагревании растворов большинства белков с концентрированной азотной кислотой жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет, переходящий при подщелачивании в оранжевый.

Реакция обусловлена присутствием в белке циклических аминокислот, которые при взаимодействии с концентрированной азотной кислотой образуют нитропроизводные желтого цвета. Последние при добавлении щелочи превращаются в соли хиноидной структуры, окрашенные в оранжевый цвет.