8. Описание технологической схемы

ТП. 1. Заготовка фарша из сердец убойных животных

Для производства цитохрома С для инъекций, сердца убойных животных, заготовленные по ОСТ 4954–73, направляются на переработку порциями не более 50 кг, которые отвешиваются на весах поз.1. Сердца отмываются от крови и загрязнений холодной водопроводной водой в убойном цехе. Допускается транспортировка сердец на участок подготовки фарша в чистых металлических ящиках.

Сердца очищаются от жира, связок и сосудов и нарезаются для измельчения на волчке. Срезки направляются в сырьевой цех колбасного завода. Сердца измельчаются на волчке поз.2 с целью увеличения поверхности контакта фаз.

Время обработки сердец с момента убоя до заморозки фарша не более 2–х часов. Далее фарш замораживается в морозильном шкафу «Neta» при температуре – 40 ⁰ С. Хранение не замороженного фарша не допускается. Срок хранения замороженного фарша с момента сбора – 6 месяцев.

Для производства содержание цитохрома С в фарше из сердец должно быть не менее 150 мг на кг фарша.

ТП. 2. Получение экстракта цитохрома С

Экстракция цитохрома С проводится 2,5 % раствором ТХУ, так как для предотвращения инактивации цитохрома С экстракцию необходимо проводить в мягких условиях.

2,5 % раствор ТХУ готовится в реакторе поз. 4 ( цилиндрический аппарат емкостью 6,3 м³, с гладкой рубашкой и турбинной мешалкой, n=300 об/мин) из расчета 40 - 50 л на 100 кг фарша. В реактор заливается необходимый объем воды очищенной, на весах взвешивается ТХУ из расчета 2,5 кг на 100 л воды, загружается в реактор при помощи вакуума и раствор перемешивается в течение 10 мин. Через нижний сливной вентиль отбирается проба для определения содержания ТХУ в растворе, которое составляет 2,5  0,1 %. С помощью вакуума раствор передается в реактор для экстракции поз.4 (цилиндрический аппарат емкостью 8 м³, с гладкой рубашкой и турбинной мешалкой, n=48 об/мин, с рубашкой).

Фарш загружается в реактор для экстракции с предварительно заполненным 2,5 % раствором ТХУ, загрузка проводится при включенной мешалке. В рубашку экстрактора подается захоложенная вода с t=12^оС, для поддержания температуры среды в аппарате +18-20 ⁰С. рН среды должен быть 3,85 – 4,0. Экстракция проводится в течение 2–х часов при периодическом перемешивании. После окончания экстракции, среда сжатым воздухом передается на центрифугу «Гумбольт-Вегар » поз.7 (с производительностью 6,77 кг/час) для отделения фарша. Экстракт вакуумом передается в реактор для первого высаливания. Жмых отправляется на МПК, где он отмывается от ТХУ и используется для приготовления бульонных кормовых добавок для скота.

Тп. 3. Высаливание и отделение балластных белков

Первое высаливание проводится в реакторе поз.8 (цилиндрический аппарат емкостью 8 м³, с гладкой рубашкой и турбинной мешалкой, n=48 об/мин) при температуре + 8⁰ С, которая поддерживается подачей в рубашку рассола 25% СаСl₂, рН экстракта доводится до 7,0 –7,2 добавлением 10 % раствора натрия гидроксида.

10% раствор натрия гидроксида готовится в количестве 92,7 л. На весах взвешивается 10,16 кг натрия гидроксида, засыпается в эмалированную емкость поз.10 (цилиндрический аппарат емкостью 0,25 м³, с гладкой рубашкой и турбинной мешалкой, n = 56 об/мин) и водой очищенной доводится объем до 92,7 л. Раствор перемешивается до полного растворения щелочи.

Высаливание проводится сульфатом аммония из расчета 500 г на 1 л экстракта при постоянном перемешивании. После растворения аммония сульфата мешалка останавливается, осадок формируется в течение 30–40 минут и подается на сепаратор поз. 10 (тип «Вестфалия » периодического действия, с производительностью 5000 л/час) для отделения балластных белков под действием центробежной силы. После сепарации экстракт направляется в реактор для второго высаливания поз.11 (цилиндрический аппарат емкостью 8 м³, с гладкой рубашкой и турбинной мешалкой, n=48 об/мин). Второе высаливание проводится по аналогии с первым, при температуре + 8^оС, которая поддерживается подачей в рубашку рассола 25% СаСl₂, с добавлением аммония сульфата из расчета 50 г на 1 литр экстракта. Масса выдерживается 10–15 минут, затем подается на нутч-фильтр поз.12 (чугунный эмалированный емкостью 1,5 м³) небольшими порциями передавливанием из реактора для второго высаливания. Фильтрат вакуумом передается в реактор для осаждения цитохрома С.

ТП.- 4. Осаждение цитохрома С

Осаждение цитохрома проводится 20% раствором ТХУ, который готовится в реакторе поз.13 (цилиндрический аппарат емкостью 2,5 м³, с гладкой рубашкой и турбинной мешалкой, n = 300 об/мин) из расчета 200 г ТХУ на 1 л раствора. На весах взвешивается 51,53 кг ТХУ, высыпается в реактор и водой очищенной объем доводится до 235,1 л, раствор тщательно перемешивается. Проба сдается в ОТК для анализа.

Загрузка 20% раствора ТХУ в реактор для осаждения поз.14 (цилиндрический аппарат емкостью 10 м³, с гладкой рубашкой и турбинной мешалкой, n=160 об/мин) осуществляется с помощью вакуума. После осаждения в течение 15–20 минут, проводится разделительная фильтрация под действием центробежной силы на сепараторе поз.15 (типа «Вестфалия» периодического действия). Осадок снимается и передается в аппарат поз.16 (цилиндрический аппарат емкостью 0,63 м³, с гладкой рубашкой и турбинной мешалкой, n = 56 об/мин).

Очистка проводится насыщенным раствором сульфата аммония, который готовится в количестве 307,02 л. В эмалированную емкость поз.22 (цилиндрический аппарат емкостью 0,63 м³, с гладкой рубашкой и турбинной мешалкой, n=56 об/мин) наливается вода очищенная, нагревается до +45 – +50^оС путем подачи в рубашку аппарата горячей воды с t=70^оС, засыпается 369,65 кг аммония сульфата и раствор перемешивается до полного растворения соли. Затем полученный раствор охлаждается до +20^оС, фильтруется на нутч-фильтре поз.18 (чугунный эмалированный емкостью 0,63 м³) и с помощью вакуума передается в аппарат поз.19.

Осадок загружается с помощью вакуума в аппарат поз.19 с предварительно заполненным раствором аммония сульфата. Перемешивание в течение 10 минут, далее суспензия разливается в центрифужные стаканчики и центрифугируется в течение 45–60 минут на центрифуге стаканчиковой поз.21 (типа «Н-1050», со стаканчиками емкостью 0,8 л, n= 3000 об/мин), надосадочная жидкость сливается.

ТП.- 5. Получение обессоленого раствора цитохрома С

Растворение осадка цитохрома С идет в сборнике поз. № 19(цилиндрический аппарат емкостью 0,25 м³, с турбинной мешалкой). Затем раствор фермента направляется на ультрафильтрацию поз.21 (установка марки «УВА - 200» производительность 0,16 – 0,24 м³/час, мембрана фирмы «Владипор» марки УАМ – 30 с d_пор ≤ 3 нм). Процесс основан на селективной проницаемости мембраны для соединений с разной молекулярной массой (в данном случае на полых волокнах из ацетата целлюлозы), при разнице давлений по обе стороны мембраны, что является движущей силой процесса. Диафильтрация осуществляется с добавлением обессоленной воды.

Во время ультрафильтрации контролируется содержание ионов, отсутствие которых свидетельствует об окончании процесса. Осуществляется накопление раствора цитохрома С от нескольких загрузок и он передается на стадию стандартизации раствора цитохрома С.

ТП.- 6. Стандартизация раствора цитохрома С

Стандартизация раствора цитохрома С проводится в аппарате поз.22(цилиндрический аппарат емкостью 0,1 м³, с турбинной мешалкой, n = 56 об/мин ) . Обессоленный концентрированный раствор цитохрома С загружается в аппарат.

Концентрация цитохрома С в растворе доводится до значения 2,5 – 2,9 мг/мл путем добавления 0,9% раствора натрия хлорида и, при необходимости, доводится рН раствора до значения 6,5 – 7,0, добавлением 10% раствора натрия гидроксида.

0,9% раствор натрия хлорида готовится в количестве 28,86 кг в аппарате поз.27 (цилиндрический аппарат емкостью 0,063 м³, с гладкой рубашкой и турбинной мешалкой, n=56 об/мин) из расчета 9 кг натрия хлорида на 1000 л раствора. В аппарат через люк загружается 28,86 кг натрия хлорида, объем доводится обессоленной водой, и раствор перемешивается до полного растворения соли. После этого раствор охлаждается до +5 - +8^оС путем подачи рассола 25 % СaCl₂ в рубашку аппарата.

Подготовленный таким образом, раствор цитохрома С передается на стадию получения стерильного продукта.