Занятие 6. Патологическая физиология белой крови
Цель занятия: Изучить различные патологические состояния белой крови.
Задание 1: Вызвать у животного экспериментальный лейкоцитоз и лейкопению.
Методика: У подопытных животных (кролики массой не более 2 кг) за неделю до опыта провести клиническое обследование (температура, пульс, дыхание) и взять кровь из вены для определения количества эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов и сделать мазки для выведения лейкограммы (до опыта). Количество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывают в камере Горяева. Приготовленные мазки крови, после окрашивания микроскопируют и выводят лейкограмму.
Экспериментальная лейкопения: 1-му кролику ежедневно в течение 6-7 дней подкожного вводят по 1 мл. бензола на 1 кг. массы тела вызывают лейкопению. Экспериментальный лейкоцитоз: 2-му кролику вводят под кожу, раздражающие костный мозг дозы бензола, из расчета 0,2-0,3 мл на 1 кг массы тела.
В день проведения занятий повторяют обследование животных и исследование крови.
Задание 2. Подсчитать количество лейкоцитов и сделать мазки крови для определения лейкограммы у животных с экспериментальной лейкопенией и лейкоцитозом.
Задание 3. Вывести лейкограмму для животных с экспериментальным лейкоцитозом и лейкопенией.
Дифференциальный подсчет лейкоцитов:
Для выведения лейкограммы одним из наиболее важных условий для правильного подсчета является строгая выдержанность методики. Шиллинг предложил для подсчета лейкоцитов четырехполосный метод "Меандра". Для этого выбирают участки по краям мазка: два в начальной его части один против другого и два в конце мазка. В каждом поле подсчитывают 75 лейкоцитов. Подсчет ведут по кривой похожей на букву "П".
Подсчет производят от края мазка на 3-4 поля зрения вглубь, затем на столько же полей в сторону и снова направляют к краю. При отсутствии крестообразного столбика можно вводить зигзагами, передвигая мазок на 3-4 поля вглубь по косой и затем возвращаясь снова к краю мазка. Каждую клетку белой крови записывают в таблицу.
Метод подсчета по Фелипенко. Мазок делится на три части: начальную, среднюю и конечную. Подсчет ведется по каждой линии от одного до другого края мазка. По каждой линии подсчитывают по 200 клеток. Следовательно, всего 600 клеток.
Дифференциальный подсчет лейкоцитов:
Морфологические особенности отдельных видов лейкоцитов. При описании клетки обращают внимание на:
1) ее величину;
2) свойства ядра;
3) окраску протоплазмы.
При оценке ядра обращают внимание на:
1) форму;
2) величину и расположение;
3) степень окраски;
4) его структуру.
Агранулоциты - не имеющие в цитоплазме зернистости, имеющие мелкую зернистость, лимфоциты, моноциты.
Гранулоциты: - базофилы, эозинофилы, нейтрофилы (или специальные гранулоциты), миелоциты, юные, палочко-ядерные, сегментоядерные.
Образование лейкоцитов происходит в разных кроветворных органах. Гранулоциты - в костном мозге, моноциты - в ретикулоэндотелиальной системе, лимфоциты - в лимфатических узлах.
Ранней формой гранулоцитов является: миэлобласт - крупная клетка с ядром, имеющим круглую или овальную форму, бледно окрашивается с ядрышками 2-6. Протоплазма в виде небольшого ободка, резко базофильна, окрашивается в интенсивно голубой цвет (не зернистая). Встречается в нормальных условиях только в костном мозге.
Нейтрофилы имеют обильную нейтрофильную зернистость, очень мелкую, в цитоплазме и эндоплазме. Эктоплазма - тонкий гомогенный слой, свободный от гранул. Цитоплазма окрашивается в бледно-розовый цвет, иногда бесцветна.
По форме ядра разделены на три группы:
1. Юные нейтрофилы, молодые незрелые формы, в норме от 0,5%, при инфекциях и нагноениях 5-30%. Определяют величину и силу сдвига. Протоплазма розовая, зернистая, в незрелых окрашена в дымчатый цвет с нечетко выраженной зернистостью.
2. Палочкоядерных - протоплазма бледно-розовая, зернистость красно-розовая (нейтрально окрашена). Ядро разделено на сегменты различной величины и формы (подковообразной или в виде буквы S). По всей длине одинаковой ширины или имеют на конце булавовидные вздутия. При гипер-регенеративном сдвиге протоплазма окрашена в дымчатый цвет, встречаются в. патологических мазках.
3. Сегментоядерные - отличаются от палочкоядерных только по форме ядра. Ядро разделено на сегменты перемычкой. Окрашено в фиолетовый цвет. Число сегментов от 2-5.
4. Миелоциты - встречаются только в патологической крови и характеризуют гиперрегенеративный сдвиг при тяжелых гнойных процессах. Протоплазма розовая, светло - синяя дымчатая. Зернистость мелкая и неравномерно расположенная, розового или красно-фиолетового цвета. Ядро массивное, не равномерно окрашенное. В небольшом количестве встречаются при миэлоидной лейкемии, при септических процессах незадолго до смерти.
5. Базофилы 10-12 микрон. Зернистость различной величины и формы неравномерно разбросана по протоплазме, окрашивается основными красками в темно-фиолетовый цвет, гранулы легко растворяются воде и на месте их остаются вакуоли. Форма ядра различна: то вытянутое в длину, то широкое, в норме их имеется 0,5-1%.
6. Эозинофилы - 10-12 микрон (у лошади 7-8), зернистость крупная. Окрашена в ярко-красный цвет, тесно расположена и прикрывает часть ядра. Протоплазма окрашена в голубой цвет или бесцветная. Величина гранул различна у каждого животного.
7. Лимфоциты - 7-10 микрон. Различают средние, большие и малые. В норме главную массу составляют мелкие. Ядро расположено эксцентрически и окрашено в фиолетовый цвет. Протоплазма в виде полумесяца, окрашена в голубой цвет. Неравномерность окраски - перинуклеарная зона. Количество их в норме колеблется в больших пределах от вида животного.
8. Моноциты - 12-14 микрон. Протоплазма окрашивается в дымчатый цвет. Окраска слабее, чем у лимфоцитов. Перинуклеарная зона отсутствует. Иногда встречается зернистость и вакуоли. Ядро большое, слабее окрашено, чем у лимфоцитов, с нежной сетчатой структурой. Разнообразные по форме ядра - переходные формы. В норме 3-5%.
9. Протоплазматические клетки или клетки раздражения Тюрка - протоплазма темно-синего цвета. Ядро круглое или овальное, эксцентрически расположенное, окрашивается в вишнево-красный цвет. Характерна перинуклеарная зона.
Оформление протокола опыта: Записывают способ моделирования лейкопении, результаты проведенных исследований, анализируют полученные данные, делают выводы.
Бензольное отравление приводит к поражению костно-мозговой ткани, сопровождающемуся агранулоцитозом, тромбоцитопенией, снижением числа эритроцитов и содержания гемоглобина в крови.