1. 3.2 Метод определения молочнокислых бактерий в плодовоягодных наполнителях

Сущность метода. Метод основан на способности молочнокислых бактерий образовывать молочную кислоту и давать вокруг колоний на агаризованной среде с углекислым кальцием зоны просветления.

Проведение анализа. По 1 куб. см плодовоягодного наполнителя (сиропа) засевают в 2 чашки Петри с заранее маркированной крышкой и заливают (30 +/- 1) куб. см расплавленного и охлажденного до температуры 40 - 45 °C капустного агара .

Выращивание. После застывания агара чашки Петри перевертывают крышками вниз и ставят в таком виде в термостат с температурой (30 +/- 1) °C на 5 суток.

Обработка результатов. Количество колоний подсчитывают на каждой чашке, поместив ее вверх дном на темном фоне и пользуясь лупой с увеличением 4 - 10 раз.

Учитывают колонии, дающие на агаре зоны растворения мела.

За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое, полученное по чашкам.

1.3. 3 Определение количества бифидобактерий

Сущность метода. Метод основан на способности бифидобактерий вырастать в питательных средах, разлитых высоким столбиком в пробирках, при температуре (37 +/- 1) °C с образованием колоний в течение 2 - 5 суток.

Проведение анализа. Перед употреблением среду для учета клеток бифидобактерий следует разогреть в кипящей водяной бане в течение 3 - 5 мин.

При определении бифидобактерий в смешанных с молочнокислыми бактериями культурах перед расплавлением в среду вносят стерильный раствор неомицина (п. 1.5.5). После расплавления пробирки охлаждают в водяной бане до температуры (45 +/- 2) °C.

Приготовляют ряд разведений продукта (до 9).

Затем из трех-четырех последних разведений продукта в растворе хлористого натрия берут по 1 куб. см и вносят в 2 параллельные ряда пробирки со средой, и тщательно перемешивают пипеткой, следя, чтобы в среду не попал воздух.

Посевы выдерживают в термостате при температуре (37 +/- 2) °C в течение 2 - 3 суток, в случае определения бифидобактерий в смешанных с молочнокислыми бактериями культурах - 3 - 5 суток.

Обработка результатов. Подсчет количества клеток бифидобактерий в 1 г продукта производят путем умножения числа выросших колоний на соответствующее разведение. За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое результатов, полученных в 2-х параллельных посевах.

Для определения истинного количества бифидобактерий в среде с неомицином результат следует удвоить.

1.3.4 Метод определения дрожжей и плесневых грибов

Определение количества дрожжей и плесневых грибов проводится в соответствии с ГОСТ 26888-86.

Сущность метода. Метод основан на посеве определенного количества продукта или его разведений в селективную агаризованную среду, культивировании посевов при (24 +/- 1) °C в течение 5 сут., подсчете всех видимых колоний дрожжей и плесневых грибов, типичных по макро- и (или) микроскопической морфологии.

Проведение анализа. Выбор разведений для посева.

Количество засеваемого продукта устанавливают с учетом наиболее вероятного микробного обсеменения.

Для определения количества дрожжей и плесневых грибов выбирают те разведения, при посевах которых на чашках вырастает от 15 до 150 колоний дрожжей и (или) от 5 до 50 колоний плесневых грибов.

Посев. Из каждой пробы делают посев по 1 куб. см продукта или его соответствующих разведений на 2 - 3 чашки Петри. В каждую чашку с заранее промаркированной крышкой добавляют не позднее чем через 15 мин. (14 +/- 1) куб. см питательной среды, охлажденной до (45 +/- 1) °C, немедленно тщательно перемешивают для застывания.

Выращивание. После застывания сред чашки Петри перевертывают вверх дном и ставят в таком виде в термостат с температурой (24 +/- 1) °C на 5 сут.

Через 3 сут. термостатирования проводят учет типичных колоний, а через 5 сут. - окончательный, наблюдая за ростом дрожжей и плесневых грибов визуально, а при необходимости просматривают микроскопический препарат.

Обработка результатов. Количество выросших колоний подсчитывают на каждой чашке, поместив ее вверх дном на темном фоне, пользуясь лупой с увеличением в 4 - 10 раз.

Каждую подсчитанную колонию отмечают на дне чашки чернилами.

Колонии дрожжей на сывороточном агаре БФ имеют серый цвет со стальным блеском, на других средах колонии - беловато-желтого цвета.

Плесневые грибы имеют различную окраску, с поверхности покрыты пушистым мицелием.

Количество колоний дрожжей и плесневых грибов подсчитывают отдельно. Количество колоний в 1 куб. см или 1 г продукта (X) в единицах вычисляют по формуле:

X = n x 10 ^к,

где n - количество колоний, подсчитанных на чашке Петри;

к - число десятикратных разведений.

За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое результатов, полученных по всем чашкам.