Инструкция к практическому занятию
ТЕМА: "ПАТОГЕННЫЕ КОККИ".
ЦЕЛЬ:
Изучить методы выявления менингококка.
Изучить методы выявления гонококка.
Микроскопия готовых микропрепаратов.
ЗАДАНИЕ № 1 Методы выявления менингококка
Менингококковая инфекция – острая инфекционная болезнь, поражающая носоглотку, оболочки головного и спинного мозга, вызывается менингококком.
При заболеваниях, вызванных менингококком в лабораторию доставляется следующий материал: отделяемое носоглотки, спинномозговая жидкость, кровь.
Материал для исследования доставляется в бактериологическую лабораторию немедленно после забора и посева в термоконтейнерах.
При невозможности немедленной доставки рекомендуется использовать коммерческие транспортные системы и другие, готовые к употреблению, предназначенные для транспортировки требовательных микроорганизмов.
Если немедленно доставить СМЖ в лабораторию невозможно, допустимо хранение ее в течение 1-2 часов в термостате при температуре 37ºС.
Во время транспортировки СМЖ следует тщательно предохранять от охлаждения.
Поддержание соответствующих условий транспортировки и хранения СМЖ, от момента взятия пробы до момента выполнения исследования, имеет решающее значение для результатов бактериологического исследования. Следует помнить, что неправильное хранение пробы даже хотя бы в течение 1 часа значительно уменьшает количество или полностью исключает возможность выделения таких особо чувствительных микроорганизмов как N. Meningitides, H. Influenzae. Если проба высылается в лабораторию, которая находится на значительном расстоянии, следует заблаговременно, до взятия пробы, позаботиться о транспорте. Необходимо использовать для транспортировки нагретый термос или сумку термос (условия доставки около 37ºС).
Полученную пробу доставить в лабораторию, избегая чрезмерного перегрева и особенно охлаждения (может быть использован термос). Охлаждение ликвора ниже 30ºС ведет к гибели менингококков.
Транспортировка тампонов со взятым материалом или тампонов, погруженных в транспортные среды, доставляют в лабораторию тщательно защищенными от охлаждения – в термоконтейнерах при 37ºС.
При транспортировке материала в течение 1-2 часов применение транспортных сред не рекомендуется. При транспортировке в течение 2-4 часов уместно применение тампонов, смоченных питательной средой.
При транспортировке в течение 3-х часов и более используют транспортную среду.
Обязательно использование термоконтейнеров.
Подготовительный этап:
Подготовить рабочее место согласно правил работы в бактериологической лаборатории.
Подготовить емкости с дез. растворами для обеззараживания предметов, используемых в процессе работы, согласно инструкции.
Основной этап:
Бактериоскопическое исследование.
Основным в экспресс – диагностике менингококковых инфекций является бактериоскопическое исследование спинномозговой жидкости и слизи носоглотки и обнаружение в них бобовидных диплококков.
Мазки из носоглотки и спинномозговой жидкости окрашивают водным раствором основного фуксина и метиленовым синим, реже – по Граму
Готовят 2 мазка для микроскопического исследования: на поверхность предметного стекла наносят две капли ликвора, высушивают на воздухе. Не следует распределять материал по большой поверхности, так как это снижает вероятность обнаружения микроорганизмов.
В качестве экспресс-метода диагностики рекомендуется приготовление мазка «толстой капли» крови, взятой из вены или пальца.
Приготовление мазка:
На середину предметного стекла пипеткой наносят каплю крови или прикладывают стекло непосредственно к капле, выступающей из пальца.
Стекло оставляют в горизонтальном положении до подсыхания крови.
2. Бактериологическое исследование.
Несколько капель крови, взятой стерильно из вены, засевают у постели больного на чашки с питательными средами: менингококк агар или сывороточный агар, «шоколадный» агар, агар Эндо, 0,1 % полужидкий сывороточный агар в соотношении 1:10 (1-2 мл крови – в пробирку с 7-10 мл полужидкого агара) или 5 мл крови засевают во флакон с 50 мл полужидкого агара или в двухфазную среду на основе «шоколадного» агара.
Все среды перед посевом должны быть подсушены и подогреты в термостате при температуре 37ºС.
Посев крови на чашки с питательными средами производится следующим образом:
1-2 капли крови наносят на среду у края чашки, затем чашка наклоняется таким образом, чтобы кровь стекла по среде в виде дорожки до другого ее края.