- •Раздел VI. Иммунология инфекционного процесса Общая характеристика, виды и формы иммунитета
- •Факторы и механизмы неспецифической противоинфекционной защиты
- •Слизистые оболочки
- •Лимфатические узлы
- •Воспаление. Фагоцитоз
- •Гуморальные факторы и методы их определения
- •Нормальные антитела
- •Комплемент
- •Мембраноатакующий комплекс
- •Пропердин
- •Лизоцим
- •Бактерицидная активность сыворотки
- •Интерферон
- •Антигены
- •Методы дезинтеграции микробов
- •Методы выделения клеточных компонентов
Гуморальные факторы и методы их определения
Наряду с клеточными реакциями неспецифической резистентности в процессе эволюции возник ряд веществ, находящихся в коллоидно-растворимом состоянии или же выделяющихся в жидкие среды организма. Эти вещества осуществляют функцию первичной защиты от чужеродных антигенных и неантигенных частиц.
Количество этих гуморальных факторов значительно. К числу более активных, или наилучшим образом изученных, следует отнести нормальные антитела, лизоцим, комплемент, пропердин, лейкины, -лизины и др.
Нормальные антитела
В сыворотке людей и животных выявляются нормальные антитела против различных микробных антигенов. Они обладают агглютинирующим, комплементсвязывающим, литическим, нейтрализующим влиянием на микробные антигены. Вопрос о природе так называемых неспецифических иммуноглобулинов сыворотки до сих пор не решен. Между тем сыворотка крови может содержать иммуноглобулины даже по отношению к антигенам, о которых заведомо известно, что они никогда не поступали в данный организм. Такие антитела получили название естественных или «нормальных». Они обычно определяются в низких титрах, однако их иммунологическая роль довольно выражена, особенно по отношению к инфекционным агентам.
Считается, что нормальные антитела появляются в результате так называемой неприметной иммунизации возбудителями или антигенами, поступающими с пищей, однако нельзя отрицать и спонтанный (генетически обусловленный) механизм их образования.
Реакции антител по отношению к антигенам, о которых заведомо известно, что они не проникали в данный организм, могут расцениваться и как перекрестные, отсюда и их более низкие титры. Нормальные антитела могут поступать трансплацентарно или с молоком матери. Их титр определяется серологическими реакциями (РНГА, РСК и др.) и обычно равен. 1:5 — 1:20.
-лизины
Многие сыворотки проявляют бактерицидное действие по отношению к грамположительным, главным образом, спорообразующим бактериям и микрококкам. Эта активность не связана с комплементом и сохраняется после прогревания сыворотки при 60—65 °С в течение 30 мин. Характерно, что -лизины обнаруживаются в сыворотке после образования свернутого сгустка цельной крови и не обнаруживаются в плазме. Считается, что -лизины выделяются в процессе свертывания крови тромбоцитами.
Бактерицидное действие -лизинов, по-видимому, обусловлено их влиянием на цитоплазматическую мембрану, в результате чего наступает аутолиз клеточной стенки ферментами цитоплазматической мембраны. -лизины активны только в присутствии ионов Са++.
Для определения -лизинов в нормальной сыворотке человека необходима спорообразующая культура сенной палочки. 'Готовят микробную взвесь, добавляют к 0,4 мл взвеси 0,2 мл исследуемой сыворотки. В контроле к 0,4 мл взвеси добавляют 0,2 мл физиологического раствора. Замеряют оптическую плотность опытной и контрольной пробирок, помещают в термостат при 37 °С на 2 часа. Вновь замеряют оптическую плотность. Расчет активности -лизинов проводят по формуле:
где Д1 и Д2 – оптическая плотность в опыте до и после инкубации.
Для определения титра -лизинов готовят разведения исследуемой сыворотки в мясо-пептонном бульоне. Затем во все пробирки добавляют взвесь суточной культуры сенной палочки, инкубируют в термостате 24 часа. Определяют титр -лизинов – наибольшее разведение сыворотки, давшее полный лизис тест-культуры.