Ход работы:

К 5 мл свежепрофильтрованной мочи приливают 4 капли 5 Н раствора серной кислоты, перемешивают и добавляют к смеси 4 капли 10%-ного раствора FeCl₃. При наличии в моче фенилпировиноградной кислоты через 30 сек – 1 мин появляется сине-зеленая окраска, исчезающая через 5 – 10 минут.

Указания к составлению отчета:

Написать в тетради образование фенилпировиноградной, фенилмолочной, фенилуксусной кислот из фенилаланина.

Записать в тетрадь технику проведения качественной реакции на фенилпировиноградную кислоту.

Лабораторная работа № 14. Определение содержания белка в моче.

Белок в нормальной моче находится в следовых количествах, которые не определяются обычными реакциями, применяемыми в клинической лаборатории.

Появление белка в моче носит название протеинурия или часто альбуминурия, поскольку моча содержит в основном сывороточный альбумин и лишь частично сывороточный глобулин. Протеинурия может быть истинной или ложной. При истинной, или почечной, протеинурии белки сыворотки крови попадают в мочу через почки. Случайная, или ложная, протеинурия наблюдается при попадании в мочу слизи, крови, гноя не из почек, а из мочевыводящих путей.

Белок появляется в моче при нефрите (т.е. воспалении сосудистых клубочков почек, когда увеличивается их проницаемость), в случае сердечной декомпенсации, при некоторых формах повышенного кровяного давления и иногда при беременности. Моча, содержащая белок, становится мутной.

Для обнаружения белка в моче применяется реакция осаждения.

Основными реакциями, наиболее часто применяемыми в клинических лабораториях для

осаждения белка являются следующие:

1) проба с кипячением;

2) осаждение концентрированной азотной кислотой;

3) осаждение сульфосалициловой кислотой (самая чувствительная реакция на белок, положи-

тельная в разведении белка 1:50000).

Наряду с качественным определением белка в моче существует и количественное по методу Робертса-Стольникова-Брандберга, имеющее диагностическое и прогностическое значение. Оно дает возможность судить о результатах терапевтического воздействия.

Данный метод количественного определения белка в моче широко применяется в клинике.

Исследуемый материал:

1) Моча, содержащая белок; 2) Нормальная моча.

Реактивы:

1) Уксусная кислота, 1%-ный раствор; 2) Концентрированная азотная кислота с хлоридом натрия.

Оборудование:

1) Штатив с пробирками; 2) Пипетка (2 шт.); 3) Фильтры; 4) Колбочка; 5) Воронки.

Ход работы:

Все реакции на открытие патологических составных частей мочи проделываются студентами одновременно и с нормальной мочой.

Профильтрованную мочу (20 капель) нагревают до кипения в пробирке. Образовавшийся при этом осадок представляет собой белок или фосфаты. К горячему раствору добавляют по каплям (1-3) 1%-ный раствор уксусной кислоты.

Если осадок зависит от фосфатов, он растворяется при подкислении мочи; если это белок, осадок свертывается и оседает на дно пробирки.

Следует избегать избытка кислоты.

При проведении пробы Геллера с концентрированной азотной кислотой надо работать осторожно.

В пробирку наливают с помощью капельницы приблизительно около 1 мл концентрированной азотной кислоты (насасывать пипеткой кислоту нельзя) и затем осторожно наслаивают примерно равный объем профильтрованной мочи из пипетки по стенке пробирки так, чтобы жидкости не смешивались. Необходимо наслаивать мочу на HNO₃, а не наоборот, так как азотная кислота имеет больший удельный вес.

Указания к составлению отчета:

В случае присутствия белка на границе жидкостей появляется мутное беловатое кольцо осадка белка.

Отметить в тетрадях разницу результатов проведенных реакций с нормальной и патологической мочой. Записать в тетрадях технику качественного определения белка в моче, указать, что такое протеинурия и причины ее возникновения.

Контрольные вопросы:

1. Какой белок является основным белком мочи?

2. На каких свойствах белка основан данный метод его определения?

3. Что такое проба Геллера?

4. О чем свидетельствует увеличение количества белка в моче?

Лабораторная работа №15.

Определение содержания -липопротеидов низкой плотности.

Большинство липидов находится в крови не в свободном состоянии, а в составе белково-липидных комплексов: хиломикроны, - липопротеиды и - липопротеиды. Липопротеиды можно разделить различными методами: электрофореза, тонкослойной хроматографии, ультрацентрифугирования в солевых растворах различной плотности. При ультрацентрифугировании выделяются хиломикроны и липопротеиды разной плотности: высокой (ЛВП - -липопротеиды), низкой (ЛНП - -липопротеиды) и очень низкой (ЛОНП - пре--липопротеиды) и др.

Печень играет очень важную роль в обмене липопротеидов. Здесь осуществляются их катаболизм, синтез ЛОНП, осуществляющих транспорт триацилглицеролов и холестерола из печени в другие ткани. Нормальным считают содержание в плазме крови: ЛВП - более 40 мг%, ЛНП - менее 180 мг%, ЛОНП - менее 40 мг%.

Фракции липопротеидов отличаются по количеству белка, относительной молекулярной массе липопротеидов и процентному содержанию отдельных липидных компонентов. Так, -липопротеиды, содержащие большое количество белка (50-60%), имеют и более высокую относительную плотность (1,063-1,21), тогда как -липопротеиды и пре--липопротеиды содержат меньше белка и значительное количество липидов - до 95% от всей относительной молекулярной массы и низкую относительную плотность (1,01-1,063).

Увеличение -липопротеидов наблюдается при атеросклерозе, механической желтухе, острых гепатитах, хронических заболеваниях печени, диабете, гликогеновой болезни, ксантоматозе и ожирении. Уменьшение -липопротеидной фракции описано при ₂-плазмоцитоме.