Застосування серологічних реакцій

Мета дослідження	Антиген	Антитіло	Позитивний результат реакції
Визначення антитіл (серодіагностика)	Відомий (діагностикум)	Невідоме (сироватка хворого)	В сироватці хворого є антитіла до АГ
Визначення антигена (ідентифікація)	Невідомий (збудник хвороби)	Відоме (діагностична сироватка)	Антиген, що вивчається ідентичний тому, яким проводили імунізацію тварин.

Посуд для серологічних реакцій

Повинен бути чистим і сухим. Застосовують пробірки (бактеріологічні, агглютинаційні, преципітаційні і центрифужні), піпетки градуйовані різного розміру і пастерівські, колби, циліндри, предметні і покривні стекла, чашки Петрі, пластини з пластмаси з лунками.

Інструменти й устаткування: петля, штативи, лупа, агглютиноскоп, термостат, холодильник, центрифуга, ваги хімічні з важком.

Материали: антитіла (імунні і досліджувані сироватки), антигени (культури мікроорганізмів, діагностикуми, екстракти, лизати, планшети, еритроцити, токсини), комплемент, ізотонічний розчин натрію хлориду.

Увага! У серологических реакціях застосовують тільки хімічно чистий натрію хлорид.

Матеріал для серологічних реакцій:

• - сироватка крові (парні сироватки). Заморозку протягом 10-14 днів.

• - ліквор,

• - сеча,

• - фільтрат випорожнень,

• - промивні води бронхів, порожнини рота, носа, шлунка.

• - слиз (шийки матки - тут АТ часом більше, ніж в сироватці)

Облік серологічних реакцій здійснюється відуально, іноді за допомогою лупи і рідко - мікроскопа.

• При оцінці серологічних реакцій застосовують 3 головних критеорія:

• - наявність і інтенсивність реакції (у плюсах і ін.),

• - діагностичний титр, заздалегідь відпрацьований для всіх захворювань,

• - наростання титру АТ протягом хвороби в 4 і більш рази.

Виявлення в сироватці крові хворого антитіл до збудника інфекції чи відповідного антигену дозволяє встановити причину захворювання.

Сироватки.

Сироватка хворого. Сироватку звичайно одержують на другому тижні хвороби, коли можна чекати наявність у ній антитіл, іноді користуються сироватками реконвалесцентів (видужуючих) і перехворілих.

Найчастіше для одержання сироватки кров беруть з вени в кількості 3 — 5 мл у стерильну пробірку і направляють у лабораторію, супроводжуючи етикеткою, із вказівкою прізвища й ініціалів хворого, передбачуваного діагнозу і дати.

Кров варто брати натще або не раніш чим через 6 год. після їжі. У сироватці крові після їжі можуть утримуватися крапельки жиру, що робить її мутною і непридатною для дослідження (така сироватка називається хильозною).

Увага! При узятті крові необхідно дотримувати правила асептики.

Для одержання сироватки кров залишають на 1 год. при кімнатній температурі або ставлять у термостат при 37 °С на З0 хв для утворення згустку.

Увага! Не слід тримати сироватку в термостаті більше 30 хв — може відбутися гемоліз, що перешкодить проведенню досліджень.

Згусток, що утворився, відокремлюють від стінок пробірки пастерівською піпеткою або петлею («обводять»). Пробірку поміщають у холодильник на якийсь час (звичайно 1 год., але не більш 48 год.) для кращого відділення сироватки зі згустку, що зжався на холоді. Потім сироватку відсмоктують стерильної пастерівською піпеткою з гумовим балоном або шлангом.

Відсмоктувати сироватку потрібно дуже обережно, щоб не захопити формені елементи. Сироватка повинна бути зовсім прозорою без домішки клітин. Мутні сироватки ще раз відсмоктують після того, як клітини еритроцитів осядуть. Сироватку можна звільнити від формених елементів центрифугуванням.

Увага! На згустку сироватка може залишатися не більш 48 год. при +4 °С.

Для одержання сироватки кров можна брати з проколу м'якоті пальця або мочки вуха пастерівською піпеткою. У грудних дітей кров беруть з У-подібного розрізу на п'ятці.

При використанні пастерівської піпетки кров набирають в піпетку з проколу. Гострий кінець піпетки запаюють. Піпетку поміщають у пробірку гострим кінцем униз. Щоб він не зламався, на дно пробірки кладуть шматочок вати. Пробірку з відповідною етикеткою направляють у лабораторію. Сироватку, що зібралася в широкому кінці піпетки, відсмоктують.

Імунні сироватки одержують із крові людей або тварин (частіше кроликів і коней), імунізованих за визначеною схемою відповідним антигеном (вакциною). В отриманій сироватці визначають її активність (титр), тобто найбільше розведення, у якому вона реагує з відповідним антигеном у визначених умовах досвіду.

Готують сироватки звичайно на виробництві. Їх розливають в ампули, на яких вказують назву і титр. У більшості випадків сироватки висушують. Суху сироватку перед уживанням розчиняють у дистильованій воді до первісного обсягу (теж зазначений на етикетці). Зберігають усі сухі (ліофілізовані) діагностичні препарати при +4 — +10 °С.

Для серологічних досліджень застосовують імунні сироватки нативні (не адсорбовані) і адсорбовані. Недолік нативних сироваток — наявність у них групових антитіл, тобто антитіл до мікроорганізмів, що мають загальні антигени. Звичайно такі антигени зустрічаються в мікробів, що належать до однієї групи, роду, сімейству. Адсорбовані сироватки відрізняються суворою специфічністю: реагують тільки з гомологічним антигеном. Антитіла до інших (гетерогенних) антигенів вилучені адсорбцією. Титр антитіл адсорбованих сироваток низький (1:40, 1:320), тому їх не розводять.

Розрізняють:

• Реакцію аглютинації (РА)

• Реакцію непрямої гемаглютинації (РНГА)

• Реакцію коаглютинації (КОА)

• Реакцію гальмування гемаглютинації (РГГА)

• Реакцію нейтралізації (РН)

• Реакцію преципітації (РП)

• Реакцію лізису

• Реакцію звʼязування комплементу (РЗК)

• Реакцію імунофлуоресценції (РІФ)

• Імуноферментні методи (ІФА)