Гель-фильтрация.

Гель-фильтрация, или хроматография на молекулярных ситах позволяет разделять вещества с различными молекулярными массами. В этом случае насадка колонки состоит из частиц геляс определенным диаметром пор. Если размер молекул больших диаметра пор, то они не могут диффундировать в гель и быстро проходят через колонку, тогда как молекулы меньшего размер) проникают в гель и поэтому движутся более медленно  В качестве сорбентов обычно используют сефадексы 6₂₅, G^ G₇₅, G₁₀₀, состоящие из полимерных цепей полисахарида декстрана, соединенные через определенные промежутки поперечными связями и образующие своеобразные молекулярные сита. В химико-фармацевтической промышленности более широкое применение находят сефадексы G_2Sh G₅₀ в виде гранул с диаметром пор 100— 30 мкм и 20—80 мкм соответственно. Проницаемость мембран для каждого из веществ смеси определяется величиной молекулы. В этой связи гель-хроматографию иногда называют молекулярным просеиванием. Определенный объем растворителя вымывает исколонки вещества с большей молекулярной массой (сефадексы G₂₅)_: и с меньшей молекулярной массой (сефадексы G₂₅, G_g0).

Основной величиной, измеряемой в гель-хроматографии, является удерживаемый объем V_e:

V_e=V₀ + K_d*V_p, _где V₀ и V_p — объемы подвижной и неподвижной хроматографических фаз;

K_d — коэффициент распределения, который зависит от соотношения размеров молекул и пор.

Гель-фильтрация — метод, малочувствительный к составу образца, используется в основном при удалении осадителя, замене буфера и обессоливании.

Гидрофобная хроматография.

Метод гидрофобной хроматографии используют для разделения БАВ на основе гидрофобных свойств, характерных для биологических объектов.

В основе механизма селективности при гидрофобной хроматографиилежит проявление так называемого гидрофобного эффекта, а также модуляция электровалентных взаимодействий, вследствие понижения локальной диэлектрической постоянной среды при введении неполярных радикалов или пониженииактивности растворителя.

Гидрофобная хроматография реализуется в виде нескольких различных процессов. В наиболее часто встречаемом варианте сорбция амфильных соединений гидрофобными сорбентамиосуществляется из разбавленных водных растворов при низких значениях, рН (2,0—4,0), а элюация — путем снижения так называемой элюатропной силы подвижной фазы, достигаемойизменением рН, уменьшением полярности элюента (при добавлении спиртов, детергентов и других органическихмодификаторов). Этот вид хроматографии получил название обратнофазной (ОФХ).

При введении в раствор амфильных соединений, способных вступать во взаимодействие с разделяемыми менее гидрофобными компонентами, последние все же можно разделить. Таким методомна неполярных сорбентах удается разделить даже ионизированные соединения, если добавить в раствор противоположно заряженные амфильные соединения, способные образовывать ионные пары сизучаемыми компонентами. Этот вид хроматографии был назван ион-парной обратнофазной хроматографией.

Гидрофобное взаимодействие реализуется также и при так называемой высаливающей хроматографии (ВХ), часто называемой хроматографией гидрофобных взаимодействий, основной прием которой заключается в сорбции амфильных соединений из водных растворов при большой концентрации солей с последующей элюадиеи солевыми растворами с более низкои ионнои силои или водой. Иногда элюацию осуществляют таким образом, что одновременно с уменьшением концентрации соли повышают концентрацию гидрофобного вытеснителя. Как в обратнофазной так и высаливающей хроматографии могут использоваться один и те же типы сорбентов с пришитыми неполярными радикалами.