8.2.1. Рідинно-твердофазна хроматографія (ртх).

У цьому варіанті РХ утримання компонентів проби зумовлено їхньою адсорбцією на гідроксильних групах наповнювача колонки - силікагелю або оксиду алюмінію. Полярні молекули утримуються сильнійше, ніж неполярні, і тому спостерігається такий порядок елювання: насичені вуглеводні, олефіни, ароматичні вуглеводні, органічні галогеніди, сульфіди, прості ефіри, нітросполуки, складні ефіри, альдегіди кетони, спирти, сульфони, сульфоксиди, аміди, карбонові кислоти. Сила адсорбції є характеристикою функціональних груп органічних сполук, тому цей метод особливо корисний при розділенні сполук різних класів.

Основні ускладнення, що виникають при кількісних розділеннях методом РТХ, пов’язані з нелінійністю ізотерм адсорбції, що спостерігається при підвищених концентраціях компонентів проби. Бажано, щоб лінійна область (у межах якої кількість адсорбованої речовини пропорційна концентрації) була якомога ширшою. Експериментально встановлено, що інтервал лінійності ширше для речовин, що адсорбуються слабше.

Активність адсорбента можна знизити, уводячи у рухому фазу невелику кількість води. Молекули води адсорбуються на найбільш активних центрах адсорбції, залишаючи менш активні центри незайнятими. Як наслідок лінійна область для органічних сполук помітно розширюється. Таким чином активність адсорбента можна змінювати, змінюючи вміст води у розчиннику.

8.2.2. Рідинно-рідинна хроматографія (ррх).

Цей метод відомий також під назвою розподільчої хроматографії, тому що різниця в утриманні компонентів пов’язана з різницею у коефіцієнтах розподілу цих компонентів між двома рідинами, що не змішуються. Гранульований твердий матеріал служить тільки носієм рідкої нерухомої фази, як і у ГРХ, а рухомою фазою є інша рідина. Ці дві рідини повинні помітно розрізнятися за своєю полярністю, щоб не змішуватись. Фіксувати можна і більш полярну, і менш полярну рідину. Полярний розчинник, наприклад, спирт або воду, наносять на пористий носій з силікагелю, оксиду алюмінію або силікату магнію. Неполярний розчинник може утримуватись на тих же субстратах після їхньої силанізації, у результаті якої вони стають гідрофобними. Такі системи називають розподільчими хроматографічними системами з оберненими фазами. Якщо провести аналіз однієї й тієї ж суміші ароматизаторів харчових продуктів за допомогою хроматографії спочатку з нормальними, а потім з оберненими фазами, то порядок елювання компонентів змінюється на зворотній.

РРХ є більш ефективним, ніж РТХ, методом розділення сполук з подібними властивостями, наприклад, членів одного гомологічного ряду. Це особливо важливо при аналізі харчових об’єктів, які являють собою природний комплекс близьких за хімічними властивостями, але різних за біологічною цінністю хімічних сполук.

Одна з переваг РРХ полягає у тому, що нерухому рідку фазу можна замінити без перезаповнення колонки. Однак легкість видалення рідкого покриття з поверхні носія призводить до можливості його вимивання під час хроматографічного процесу. У зв’язку з цим усе більше поширення набувають хімічно зв’язані (прищеплені) нерухомі фази.

Діатомовий носій, який є різновидом гідратованого силікагелю і містить на поверхні багато вільних груп -ОН, можна обробити хлорсиланом з довго-ланцюговими аліфатичними, ароматичними або гліколевими замісниками (R) :

| |

- Si - OH Cl Si R₃ - Si -O- Si R₃

| |

O + ® O + n HCl

| |

- Si - OH Cl Si R₃ - Si -O- Si R₃

| |

Після такої обробки поверхня твердого носія буде вкрита хімічно зв’язаними органічними залишками, які будуть діяти як нерухома фаза (розчинник) по відношенню до рухомої фази, що контактує з нею. Колонки з такою насадкою дорожче, але вимивання нерухомої фази з них практично виключене.