53.Противоопухолевый иммунитет

Опухолевые клетки имеют измененную активность генов, отличную от нормальных, что обеспечивает их непрерывную пролиферацию. Иногда трансформация нормальных клеток в опухолевые индуцируется вирусами. Вирус Эпштейна-Барра индуцирует В-клеточные лимфомы, рак шейки матки и другие опухоли, а Т-лимфотропные вирусы – лейкозы. Поэтому антигенная структура опухолевых клеток отличается от структуры нормальных клеток того организма, в котором возникла и растет опухоль.

Выявлен ряд опухолеспецифических антигенов: раковоэмбриональные (-фетопротеин и др.);  простатоспецифический антиген (при раке предстательной железы); группа мембранных пептидов; общий антиген для опухолей – полипептидный компонент теломеразы – ее каталитическая субъединица – обратная транскриптаза, активная только в опухолях.

На опухолевые клетки возникает иммунная реакция: образуются антитела и иммунные Т-клетки. Однако опухолевые клетки размножаются быстрее клеток СИ, участвующих в реакции на ее антигены, и выделяют цитокины, изменяющие иммунный ответ так, что возникает своеобразный вариант толерантности к опухолевым антигенам. Антитела нередко препятствуют киллерному эффекту Т-лимфоцитов.

В диагностике опухолей широко применяют иммунологические методы. С помощью иммуноферментного анализа (ИФА, см. ниже) и других тестов определяют антигены опухоли, циркулирующие в крови. Чаще других выявляют раково-эмбриональные антигены рака печени (-фетопротеин), толстой кишки, простатоспецифический антиген и др., выявляют противоопухолевые антитела и Т-лимфоциты.

Для лечения опухолей применяют аутологичные лимфокин-активированные Т-лимфоциты/киллеры. Для этого лимфоциты крови больного активируют вне организма с ИЛ-2 и другими цитокинами, а затем вводят ему обратно.

Другое направление – получение противоопухолевых вакцин. Потенциально перспективны вакцины из антигенов мембран опухолевых клеток, комплексированных с адьювантом-иммуностимулятором для усиления иммунного ответа. Активно разрабатываются вакцины с использованием дендритных клеток (ДК).

Применяются также препараты, стимулирующие неспецифические иммунные реакции (иммуномодуляторы, цитокины и др.).

52.Кожные пробы и другие провокационные тесты

Для определения гиперчувствительности (аллергии) к антигенам-аллергенам у людей проводят провокационные тесты. Суть их в том, что соответствующий аллерген вводят в организм перорально, ингаляционно, наносят на кожу при ее скарификации или вводят внутрикожно. Обычно, спустя 30 минут оценивают немедленные аллергические реакции (ПЧНТ), а через 24-48 час – замедленные (ПЧЗТ).

На пыльцевые, пищевые, лекарственные аллергены чаще наблюдаются немедленные кожные реакции в виде покраснения и припухлости. Замедленные реакции развиваются на бактериальные антигены. Пробу Манту ставят для выявления сенсибилизации к микобактериям туберкулеза (оценка вакцинации и инфицированности). Туберкулин РРD вводят внутрикожно и при положительной реакции через 24-48 час в месте инъекции возникает воспалительная реакция. Она указывает на наличие сенсибилизации к этому антигену. Сильная реакция, или, наоборот, ее отсутствие (анергия) может быть при туберкулезе.

Кожные пробы могут использоваться для выявления иммунодефицитов и оценки резистентности к конкретной инфекции. Большинство людей встречались в течение жизни с антигенами распространенных условно-патогенных бактерий и в норме имеют к ним сенсибилизацию. При постановке внутрикожных проб с аллергенами стафилококка, стрептококка, кишечной палочки, протея, микобактерий туберкулеза (туберкулин) и другими, реакция должна быть положительной хотя бы на один из них. Отсутствие реакции может указывать на иммунодефицит. Аллергены – это антигены или гаптены, которые при повторном проникновении в сенсибилизированный организм вызывает аллергическую реакцию.

Различают неинфекционные и инфекционные аллергены.

К неинфекционным относятся: вещества растений (пыльца – пыльцевая аллергия, плоды – пищевая аллергия); животных и птиц – пищевые аллергены (молоко, яйцо), эпидермальные (шерсть, перо); бытовые аллергены – домашняя пыль (постельные клещи – дерматофагоиды, библиотечная пыль, шерсть домашних животных, синтетические изделия и др.); лекарственные и медикаментозные – практически все лекарства и медикаменты; аллергены насекомых (яды и др.); профессиональные – различные химические вещества (в том числе синтетические изделия), лаки, краски, неорганическая и органическая пыль, аэрозоли веществ.

Аллергены вызывают аллергию, присутствуя в очень низких концентрациях (ниже предельно допустимых концентраций вредных веществ в промышленности). Суммарная доза аллергенной пыльцы, полученной больным за период цветения растения, может составлять 1 мкг.

Инфекционными аллергенами могут служить антигены бактерий, грибов, вирусов и паразитов

41. ИФА.

Иммуноферментный анализ или метод — выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазой или щелочной фосфатазой). После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции — интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител. ИФА применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных болезней, в частности для диагностики ВИЧ-инфекций, гепатита В и др., а также определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом материале в минорных концентрациях (1010-1012 г/л).

Твердофазный ИФА— вариант теста, когда один из компонентов иммунной реакции (антиген или антитело) сорбирован на твердом носителе, напр., в лунках планшеток из полистирола. Компоненты выявляют добавлением меченых антител или антигенов. При положительном результате изменяется цвет хромогена. Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты путем промывания,

I. При определении антител (левый рисунок) в лунки планшеток с сорбированным антигеном последовательно добавляют сыворотку крови больного, антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом, и субстрат/хромоген для фермента.

II. При определении антигена (правый рисунок) в лунки с сорбированными антителами вносят антиген (напр. сыворотку крови с искомым антигеном), добавляют диагностическую сыворотку против него и вторичные антитела (против диагностической сыворотки), меченные ферментом, а затем субстрат/хромоген для фермента. Конкурентный ИФАдля определения антигенов: искомый антиген и меченный ферментом антиген конкурируют друг с другом за связывание ограниченного количества антител иммунной сыворотки.

Другой тест - конкурентный ИФА для определения антител: искомые антитела и меченные ферментом антитела конкурируют друг с другом за антигены, сорбированные на твердой фазе.

Иммуноблоттинг — высокочувствительный метод выявления белков, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИА. Иммуноблоттинг используют как диагностический метод при ВИЧ-инфекции и др.

Антигены возбудителя разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, затем переносят их из геля на активированную бумагуили нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоски с «блотами» антигенов. На эти полоски наносят сыворотку больного. Затем, после инкубации, отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченную ферментом. Образовавшийся на полоске комплекс [антиген + антитело больного + антитело против Ig человека] выявляют добавлением хромогенного субстрата, изменяющего окраску под действием фермента.