- •Введение
- •Учебный модуль
- •Студент должен знать:
- •Раздел 1
- •Основы медицинской
- •Бактериологии и микробиологии
- •Практическая работа № 1
- •Практическая работа № 2
- •Практическая работа №3
- •Практическая работа №4
- •Рецепты приготовления простых (основных) сред и изотонического раствора натрия хлорида
- •Рецепты приготовления сложных сред
- •Контрольные вопросы.
- •Практическая работа №5
- •Часть 1
- •Практическая работа №5
- •Часть 2
- •Контрольные вопросы
- •Раздел 2
- •Основы медицинской
- •Вирусологии
- •Практическая работа №6
- •1. Заражение лабораторных животных.
- •2. Заражение куриных эмбрионов.
- •3. Культивирование вирусов в культурах клеток.
- •Однослойные культуры клеток.
- •2. Перевиваемые культуры клеток.
- •3. Полуперевиваемые культуры клеток.
- •Раздел 3
- •Основы медицинской
- •Паразитологии
- •Практическая работиа №7
- •Малярийный плазмодий
- •Кровяные формы малярийных плазмодиев
- •Практическая работа № 8
- •Раздел 4
- •Основы общей
- •Микробиологии
- •Практическая работа №9
- •Контрольные вопросы.
- •Раздел 5 основы иммунологии. Практическая работа №10
- •Контрольные вопросы.
- •Практическая работа № 11
- •Контрольные вопросы.
- •Практическая работа №12.
- •Проведение основного опыта
- •Контрольные вопросы.
- •Практическая работа №13
- •Контрольные вопросы.
- •Практическая работа №14
- •Опсонофагоцитарная реакция
- •Контрольные вопросы
- •Практическая работа № 15
- •Контрольные вопросы.
- •Практическая работа №16
- •Список используемой литературы:
Практическая работа №4
Способы сбора материала
Кровь (ранняя диагностика)
|
В количестве 10-20 мл берут стерильным шприцем из локтевой вены и засевают у постели больного во флаконы с элективной средой (среда Раппопорт или 10-20% желчный бульон). Во флаконы со средой Раппопорт помещают поплавок, в который попадает образовавшийся газ, что позволяет предположить накопление в среде возбудителей паратифов. Флаконы с посевом ставят в термостат. На следующий день посевы вынимают из термостата, просматривают и, независимо от внешне выраженных признаков роста, производят высев на плотные среды Эндо и Плоскирева. При отсутствии роста флаконы оставляют в термостате еще на 7 дней. Отсутствие роста после 7-го дня позволяет дать отрицательный ответ. Культура, выделенная из крови, называется гемокультурой.
|
Испражнения (исследование с первых дней заболевания и до выписки из стационара)
|
3-5 г испражнений помещают в баночку или пробирку с 30% глицериновой смесью. Производят посев на дифференциальные среды Эндо, Плоскирева, висмут-сульфитный агар или на одну из сред обогащения (селенитовую, Мюллера или Кауфмана) с последующим (через 24 ч) высевом на дифференциальные среды. Таким образом, посев на эти среды производят дважды с интервалом в I день. Сохранять собранный материал в глицериновой смеси можно 6-8 ч (лучше на холоде). |
Моча (исследование с первых дней заболевания)
|
Мочу лучше брать стерильно катетером. При отсутствии такой возможности делают так: до взятия мочи наружное отверстие мочеиспускательного канала обмывают изотоническим раствором натрия хлорида. 1-ю порцию мочи сливают. После этого 20-50 мл мочи собирают в стерильную посуду и центрифугируют или отстаивают. Производят посев осадка на дифференциальные среды Эндо, Плоскирева, висмут-сульфитный агар и на одну из сред обогащения - селенитовую, Мюллера или Кауфмана с последующим (через 24 ч) пересевом на дифференциальные среды. Посевы ставят в термостат. На следующий день при наличии подозрительных колоний выделяют чистую культуру. Далее по общей схеме. |
Содержимое розеол
|
Участок кожи с выраженными розеолами протирают спиртом, промывают изотоническим раствором натрия хлорида и стерильным скальпелем скарифицируют поверхность розеол. На скарифицированный участок кожи наносят каплю 10-20% желчного бульона, который смешивается с содержимым розеол. Несколько капель этой смеси насасывают пастеровской пипеткой. Тонкий конец пипетки запаивают и отсылают в лабораторию. |
Дуоденальное содержимое |
Исследование желчи можно производить на любом этапе заболевания. Желчь собирают натощак путем дуоденального зондирования в стерильные пробирки, раздельно порции А, В и С. Посев можно производить из отдельных порций и из их смеси. Полученную желчь инкубируют в термостате. На следующий день производят посев на дифференциальные среды. При отсутствии роста после первого высева желчь оставляют в термостате на 10 дней, периодически производят высевы через дня. |
Рвотные массы |
Если рвотные массы густой консистенции, их разводя изотоническим раствором натрия хлорида в соотношении 1:10.2- 3 капли из верхнего слоя засевают на дифференциальные среды обогащения. Далее по общей схеме. Промывные воды желудка и рвотные массы исследуют обычно при токсикоинфекциях. Они, как правило, имеют кислую реакцию поэтому перед, посевом их нейтрализуют 5-10% раствором бикарбоната натрия (питьевая сода). |
Пищевые продукты
|
Жидкие или полужидкие продукты тщательно размешивают, 2-3 капли засевают на дифференциальные среды и среды обогащения. При исследовании плотных продуктов стерильным шпателем ил ножом берут 5-10г из глубины, эмульгируют в изотоническом растворе натрия хлорида в соотношении 1:5 или 1:10 и засеваю на дифференциальные среды и среды обогащения При вырастании подозрительных колоний дальнейшее исследование ведут по общей схеме. |
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
Питательные среды широко применяются в микробиологической практике для выращивания разных микроорганизмов с исследовательской целью, для диагностики инфекционных заболеваний, для получения из микробов различных продуктов жизнедеятельности (токсинов, антибиотиков) и т. д. Любая питательная среда должна отвечать следующим требованиям: содержать все необходимые для роста и размножения микроба вещества в легко усвояемой форме, быть изотоничной, иметь оптимальную влажность, вязкость, рН, оптимальный окислительно-восстановительный потенциал, быть стерильной и прозрачной.
Питательные среды готовят из естественных продуктов животного и растительного происхождения (мяса, молока, сыворотки крови, дрожжей и др.) или искусственно полученные из этих продуктов веществ (пептона, дрожжевого экстракта и др.), или химически чистых соединений с точно известным составом (аминокислоты, углеводы, витамины, минеральные соли).
Большое значение имеет наличие в составе питательных сред факторов роста. К ним относятся витамины, пуриновые и пиримидиновые основания, аминокислоты.
В бактериологической практике чаще всего используют питательные среды комбинированного состава. Многие питательные среды выпускаются в виде порошка. Для приготовления питательной среды его растворяют в кипящей воде. По целевому назначению питательные среды можно разделить на основные, дифференциально-диагностические и элективные.
К основным относятся мясо-пептонный бульон и агар, которые применяются для выращивания многих патогенных и непатогенных гетеротрофных бактерий. При приготовлении элективных сред ставится задача создать максимально благоприятные условия для роста микроба одного вида,
Целевое назначение дифференциально-диагностических сред состоит в возможности распознания отдельных видов бактерий по их ферментативным свойствам.
Все большее значение приобретают синтетические питательные среды, приготовленные из растворов химически чистых органических и неорганических соединений. По консистенции питательные среды могут быть жидкими, плотными и полужидкими. Для получения плотных и полужидких сред к ним добавляют агар-агар. Последний представляет собой продукт переработки особого вида морских водорослей и в застывшем состоянии придает среде плотность. Для приготовления плотных сред добавляют- 2,5%-агар-агара, а для получения полужидких 0,15 - 0,7%. В некоторых случаях для получения плотных питательных сред используют желатин. Такие среды, как свернутая сыворотка крови, свернутый яичный белок, сами по себе являются плотными.