Кроме того, в медико-генетических консультациях широко применяется большая группа тестов для раннего выявления наследственной патологии обмена. К ним относятся:
-исследование плотности, прозрачности, реакции и цвета: снижение плотности утренней мочи взятой натощак до 1006 и ниже наблюдается при несахарном диабете, кислая реакция мочи
– при аминоацидопатиях, изменение прозрачности наблюдается при липурии; черно-коричневая окраска мочи при добавлении щелочи имеет место при алкаптонурии, молочно-белый – при липурии, красный – при порфирии, гемоглобинурии, коричневый
– при метгемоглобинурии, порфирии, билирубинурии;
-проба Селиванова: выявляет избыток фруктозы (при фруктоземии);
-тест на кетоновые кислоты: выявление алкаптонурии, фенилкетонурии, болезни «мочи с запахом кленового сиропа», гистидинемии, болезни «сушеного хмеля»;
-иодозидная проба на цистин, гомоцистин: при гомоцистинурии, цистинурии, болезни Вильсона-Коновалова, синдрома де Тони- Дебре-Фанкони;
-проба Пантуса на ионы хлора: при гипо- гиперальдостеронизме, тубулопатиях;
Лильин Е.Т., Богомазов Е.А., Гофман-Кадошников П.Б. Генетика для врачей. 1990
-тест на пролин: при б. Вильсона-Коновалова, , синдромах Жозефа, де Тони-Дебре-Фанкони;
-проба Бенедикта на сахара, фенольные кетокислоты: при галактоземии, с-ме де Тони-Дебре-Фанкони, цистинозе, врожденной непереносимости лактозы, почечном и сахарном диабете;
-проба Гайнеса аналогична предыдущей, но более информативна в отношении сахаров;
-тест с толуидиновым синим на выявление гликозоаминогликан:при мукополисахаридозах;
-проба Сулковича на ионы кальция: при идиопатической гиперкальциемии;
-тест Милона на тирозин: при тирозинозе, синдроме Хартнапа, галактоземии, б.Вильсона-Коновалова, цистинозе;
-проба Легаля на кетоновые тела: при сахарном и почечном диабете, гликогенозах;
-проба Альтгаузена: при гликогенозах
Лильин Е.Т., Богомазов Е.А., Гофман-
- проба на медь: при болезни Вильсона-Коновалова.
Кадошников П.Б. Генетика для врачей. 1990
Разработан массовый биохимический скрининг беременных (исследование альфафетопротеина, хорионического гонадотропина, эстриола, 17- оксипрогестерона и др.) с целью пренатальной диагностики хромосомных синдромов, врожденных аномалий развития.
Массовый скрининг рекомендуется осуществлять при следующих условиях: 1) тестируемое заболевание является частым (распространенность более 1 случая на 20 тыс. новорожденных); 2) наличие методов профилактической терапии (ФКУ, ВГ и др.) и пренатальной диагностики; 3) применяемые экспресс-методы диагностики экономически доступны для региона.
Бочков Н.П. Клиническая генетика: Учебник. - М.: Медицина,1997
2 этап: уточнение диагноза с использованием высокочувствительных методик биохимического анализа (газовая, жидкостная хроматография и др.). Это позволяет определить содержание, активность конкретного субстрата, фермента (энзимодиагностика), продукта промежуточного обмена в жидких средах организма, фибробластах, гепатоцитах, эритроцитах и др. клетках. Результаты этого исследования служат основой для проведения последующей пренатальной диагностики, основанной как на методах аналитической биохимии, так и ДНК-диагностике.
3 этап: окончательный диагноз НБО основан на результатах ДНК- типирования.
Бочков Н.П. Клиническая генетика: Учебник. - М.: Медицина,1997
Близнецовый метод
Близнецовый метод применяется для сравнительной оценки вклада генетических и средовых факторов в процесс формирования нормальных и аномальных признаков у человека. С этой целью проводится анализ идентичности (конкордантности) и различия (дискордантности) этих признаков среди пар моно- и дизиготных близнецов.
Частота двоен составляет примерно 1-2% от общего числа родов, троен - 1:10-15 тыс. родов.
Конкордантность по умственной отсталости у монозиготных близнецов составляет - 97%, по шизофрении - 69%, по эпилепсии - 67%; у дизиготных - соответственно 37, 10 и 30%.
Бочков Н.П. Клиническая генетика: Учебник. - М.: Медицина,1997
Существует несколько подходов в близнецовых исследованиях:
1)диагностика зиготности, основанная на анализе сходства и различия признаков в паре (метод полисистемного сходства): сравнение цвета и плотности трабекул радужных оболочек, особенности строения лицевой и др. областей (разрез глазных щелей, форма ушных раковин, носа, черепа, характер оволосения, пигментация и т.д.);
2)экспериментальное изучение близнецов: сравнение по антигенному составу, белковым фракциям, активности ферментов, по характеристикам видов обмена (углеводный, липидный и др.), по гаплотипам HLA, по исследованию вкусовой чувствительности (например на фенилтиокарбамид), по результатам параклинических методов диагностики (РКТ, ЭМГ, ЭЭГ, допплерография и др.);
Лильин Е.Т., Богомазов Е.А., Гофман- Кадошников П.Б. Генетика для врачей. 1990
3)анкетирование близнецов (при масштабных популяционных исследованиях);
4)метод контроля по партнеру: применяется у монозиготных близнецов, позволяет сравнить влияние средового фактора (напр. лекарственного препарата) на одного из близнецов в паре, при отсутствии такого же воздействия на другого близнеца. Подобный подход позволяет более быстро и достоверно получить необходимые результаты исследования эффективности лекарственного препарата.
Лильин Е.Т., Богомазов Е.А., Гофман-Кадошников П.Б. Генетика для врачей. 1990
Молекулярно-биологический (молекулярно-генетический) метод
Один из важнейших современных диагностических методов клинической генетики, позволяющий установить окончательный диагноз на пренатальной, доклинической и субклинической стадиях моногенного заболевания. В настоящее время он все шире применяется с целью диагностики гетерозиготного носительства, мультифакториальной патологии (вариантов артериальной гипертензии, сахарного диабета, онкопатологии и др.), а также возбудителей инфекционных заболеваний (герпес, токсоплазмоз, грипп, цитомегаловирус, ВИЧ, атипичная пневмония и др.). Перспективы профилактики заболеваний связаны именно с этим методом. Кроме того, метод необходим для разработки и внедрения этиотроного лечения как моно- так и полигенных заболеваний. В судебной практике метод широко применяется для идентификации личности и решения проблемы спорного отцовства.
Козлова С.И., Демикова Н.С., Семанова Е., Блинникова О.Е. Наследственные синдромы и медико-генетическое консультирование. Изд. 2-е. - М.: Практика, 1996
ДНК-типирование подразумевает определение первичного генетического дефекта. По меньшей мере для 1000 форм на сегодня картированы мутантные гены и для большинства из них установлены типы мутаций. Исследования подобного рода обладают очень высокой достоверностью. Внедрение ДНК-исследований в практику здравоохранения очень важно, так как позволяет существенно повысить эффективность медико-генетического консультирования.
Козлова С.И., Демикова Н.С., Семанова Е., Блинникова О.Е. Наследственные синдромы и медико-генетическое консультирование. Изд. 2-е. - М.: Практика, 1996
Внутри метода выделяют прямые и косвенные подходы ДНК-диагностики. Прямые методы ДНК-типирования проводятся в том случае, когда известна
точная локализация мутантного гена. Для исследования достаточно материала от пораженного члена семьи.
1) Метод "блот-гибридизации", предложенный в 1975 году Саузерн. Сущность его заключается в расщеплении ДНК специфическими рестриктазами, "узнающими" определенные нуклеотидные последовательности. После этого полученные фрагменты ДНК разделяют методом электрофореза в агарозном или полиакриламидном геле, далее - фиксируют на нитроцеллюлозном фильтре и подвергают гибридизации с олигонуклеотидным зондом, меченым изотопом, который комплементарно связывается с фрагментом ДНК. После отмывки несвязанной с фильтром радиактивной метки проводится экспозиция исследуемого фрагмента на рентгеновской пленке и анализируется полученный результат, что позволяет определить перестройки внутригенных нуклеотидных последовательностейКозлова С.И., Демиковалибо тесноН.С., СемановасцепленныхЕ., с мутантным геном.
Блинникова О.Е. Наследственные синдромы и медико-генетическое консультирование. Изд. 2-е. - М.: Практика, 1996
