Гашиш

10. Укажите особенности ХТА гашиш.

ГАШИШ (hash) - смола (смолка), производимая каннабисом в определенный период вегетации, зеленого, темно-коричневого или черного цвета. Содержание ТГК обычно 2%, но м. достигать и 9-10% ГАШИШ (hash) - смола (смолка), производимая каннабисом в определенный период вегетации, зеленого, темно-коричневого или черного цвета. Содержание ТГК обычно 2%, но м. достигать и 9-10%

Объекты ХТА:

У живого лица - моча, кровь, волосы, слюна, пот, меконий новорожденных. Неметаболизированные компоненты гашиша м.б. обнаружены на пальцах и зубах через несколько часов после последнего приема.

У трупа – моча, кровь, желудок, тонкая и толстая кишка с содержимым, почка, головной мозг, печень с желчным пузырем, селезенка, легкие (особенно при курении), смывы с пальцев и ротовой полости (зубов), где каннабиноиды концентрируются и сохраняются.

ИЗОЛИРОВАНИЕ.

Во флакон помещали 1 мл метанола + 2 мл мочи и 150 мкл 50% NaOH (+50 мкл р-ра внутреннего стандарта - спиртовой р-р 1 мкг/мл -8-ТГК-кислоты, для ГХ-МС-анализа) и перемешивали. Флакон плотно укупоривали и помещали в термоблок на 10 мин при 60°С. После охлаждения флакон вскрывали + 6 н. НС1 до рН 2-3 и дважды экстрагировали 5 мл смеси н-гексан-этилацетат (7:1). Верхний слой отделяли, переносили во флакон, выпаривали до сухого остатка в токе теплого воздуха (40°С).

Для выявления каннабиноидов в моче требуются простые, недорогие и эффективные методы, особенно на этапе предварительного исследования.

ХТА-идентификацию каннабиноидов осуществляют хромогенными реакциями, методами иммуноанализа (ИХА, ИФА, ПФИА), ТСХ, ГХ-МС, ВЭЖХ, УФ-спектрофотометрии. Несмотря на то, что при ХТА каннабиноиды или их метаболиты м.б. определены практически во всех органах, применение данных методов является ограниченным из-за естественных потерь токсикантов.

Качественные реакции.

В суд.-мед.практике иногда возникают ситуации, когда необходимо ответить на вопрос, является ли образец гашишем. Заключение не д. основываться только на таких признаках, как внешний вид, цвет, запах, которые широко варьируют. Объективным критерием м. служить быстрая «проба на гашиш», основанная на реакции фенольных соединений (всегда присутствующих в конопле) с диазотированными ароматическими аминами.

Цветные реакции. Наиболее характерным красителем на каннабиноиды в различных объектах ХТА является прочный синий ББ, который при истохим. реакции легочной ткани потребителя каннабиса дает характерное оранжевое окрашивание (85% случаев).

К оптимальным методам предварительного исследования можно отнести одностадийный иммунохроматографический анализ (ИХА) и ТСХ с использованием хроматографических пластинок.

Минусами использования ряда распространенных методов анализа каннабиноидов является высокая стоимость расходных материалов и оборудования.

1. ИХА- Тест (тест-полоски). Используется для экспресс-определения каннабиноидов в моче.

Во флакон помещали 2 мл мочи комнатной температуры, определяли рН по универсальной индикаторной бумаге (рН 4,5-8,0). В мочу на 30 с помещали тестовую пластинку, ее вынимали и помещали на ровную горизонтальную поверхность. Результат определяли через 5-10 мин. При наличии 1 окрашенной полосы в контрольной зоне фиксировали положительный результат. При наличии 2 полос в контрольной и тестовой зонах независимо от яркости окраски фиксировали отриц. результат. Порог чув-сти - 100 нг/мл мочи.

Плюсы метода ИХА: высокая специфичность и скорость исследования (5-10 мин), отсутствие необходимости пробоподготовки объекта и наличия спец. навыков персонала, не требует серийности и затрат на оборудование и реактивы. Метод не имеет привязки к оборудованию и экономически выгоден в плане организации и проведения исследования.

Минусы ИХА: только как предварительный метод, требует документирования результатов тестирования.

2.ТСХ. Сухой остаток растворяли в 100 мкл хлороформа, замывали стенки флакона и количественно наносили в зону 1 ТСХ-пластинки, предварительно активированной при 80°С 30 мин. В качестве метчика в зону 2 наносили 2-3 мкл спиртового р-ра 11-нор--8-тетрагидроканнабинол-9-карбоновая кислота, -8-ТГК-кислоты.

Пластинку хроматографировали в системе гексан-изобутанол-ледяная уксусная кислота. Фронт пробега растворителя 8 см. После подсушивания на воздухе пластинку обрабатывали свежеприготовленным 0,1% прочного синего ББ в 70% этаноле, сушили в токе теплого воздуха и обрабатывали 10% водным NaOH. ТГК-кислота проявляется красно-фиолетовым пятном с Rf = 0,36±4, параллельно аналогично окрашенному пятну стандарта. Предел обнаружения 20 нг/мл.

Плюсы метода ТСХ: высокая специфичность и селективность, минимальные затраты на оборудование и реактивы.

Минусы метода ТСХ: необходима пробоподготовка.

3.ПФИА-исследование. В картридж помещали 0,2 мл образца мочи и исследовали на флюоресцентно-поляризационном анализаторе TD_XFL_X ("Abbott"), с каждой серией образцов исследовали нижний и верхний контроль. Предел значимости результата - 25 нг/мл.

Плюсы метода ПФИА: высокая специфичность и чув-сть, скорость исследования (15-20 мин), отсутствие необходимости пробоподготовки и полуколич. оценка содержания суммы каннабиноидов.

Минусы метода ПФИА: высокая стоимость оборудования и расходных материалов, серийность.

4.Иммуноферментный метод

5.Метод ВЭЖХ, ГЖХ

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ.

1. Метод газохромато-масс-спектрометрии (ГХ-МС) для подтверждения наличия основного метаболита ТГК и его колич. определения. Дериватизацию образца мочи проводили диметилсульфоксидом, 25% метанольного р-ра тетраметиламмония гидроксидом и йодметаном. Гексановый экстракт дериватизационной смеси упаривали до сухого остатка, который растворяли в этилацетате и вводили в инжектор хромато-масс-спектрометра. Калибровочную кривую строили с использованием калибраторов и контролей "Cannabinoids U" для флюоресцентно-поляризационного анализатора ТВ_ХРЦ, ("Abbott") по точкам с концентрацией ТГК-кислоты: 10, 25,40, 50, 80,135 нг/мл.

2. Метод Газовой хроматографии. Определение проводят по площади или высоте пика анализируемого в-ва и внутренного стандарта. В качестве внутренного стандарта использует аналог исследуемого в-ва, меченного стабильным изотопом, в частности, дейтерированные соединения.

3. ВЭЖХ. Определение конц конабиодов проводят, используя метод добавок, метод внутренного или внешного стандарта.

2