Микробиологические показатели безопасности материалов и изделий медицинского назначения1)

Микробиологические показатели	Допустимые значения
Общее количество мезофильных аэробных и факуль­тативно-анаэробных бактерий (МАФАнМ), КОЕ2) в 1 г (см3) продукции	не более 102
Дрожжи, дрожжеподобные, плесневые грибки, КОЕ2) в 1 г (см3) продукции	Отсутствие
Бактерии семейства Enterobacteriaceaeв 1 г (см3) продукции	Отсутствие
Патогенные стафилококки в 1 г (см3) продукции	Отсутствие
Psedomonasaeruginosa	Отсутствие

Примечания.

1) Требования распространяются на нестерильные изделия.

2) КОЕ - колониеобразующих единиц в 1 г или 1 см³ продукции

1.2. Выявление Legionella pneumophila в объектах окружающей среды

В настоящее время род Legionellaвключает около 50 видов бактерий, обитающих в пресноводных водоемах в ассоциациях с сине-зелеными водорослями и в организмах свободноживущих простейших. Большинство видов не представляет опасности для человека.

В воде легионеллы размножаются, что происходит в диапазоне температур, равных 25-45 ^оС. Условия для размножения легионелл в искусственных водных системах (системы охлаждения и кондиционирования, градирни, компрессорные устройства, джакузи, медицинское оборудование и др.) более благоприятны, чем естественные, что и приводит к накоплению высоких концентраций бактерий. Основной фактор передачи – водный мелкодисперсный аэрозоль, образуемый системами водных коммуникаций.

Болезнь легионеров (острая пневмония с токсическим синдромом) вызывает L. pneumophila. Поражения респираторного тракта также спорадически вызываютL. micdadeiиL. bozemanii. Оппортунистические заболевания могут вызыватьL.micdadei,L.longbeachae, L.dumoffiiи L.bozemanii, особенно при нарушениях клеточного иммунитета. Остальные виды не патогенны для человека.

Санитарно-микробиологическому исследованию на обнаружение возбудителя болезни легионеров (L. pneumophila) подлежат в порядке надзора:

1. Системы кондиционирования и вентиляции, водонагревательные и охладительные системы

2. Медицинское оборудование и инструментарий

3. Бассейны

4. Аквапарки

5. Джакузи

6. Фонтаны

Выявление L. pneumophilaпроводят также в ходе проведения противоэпидемических мероприятий и при эпидемиологическом расследовании вспышек болезни легионеров.

Отбор проб. Пробы воды объемом 0,5-1,0 дм³отбирают в стерильные емкости. Для дехлорирования воды используют кристаллы гипосульфита натрия.

Поверхностные и глубинные пробыотбирают специальными батометрами.

Смывы с объектов(оборудования для кондиционирования и вентиляции, водонагревательных и охладительных систем, медицинского инструментария) забирают тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором и помещают в ту же пробирку.

Поскольку легионеллы способны к образованию биопленок на синтетической и резиновой поверхности водопроводного, промышленного, лабораторного и иного оборудования, связанного с циркуляцией и хранением воды, биопленки также забирают для исследования. Соскобы влажных биопленок с поверхности, находящейся под водой или на границе воды и воздуха, берут сухими тампонами и помещают во флакон или в пробирку. С высохшей поверхности биопленки забирают тампонами, увлажненными стерильным физиологическим раствором и помещают в пробирку со стерильным физиологическим раствором. Доставку проб осуществляют при температуре 6-24 ^оС.

Подготовка проб к исследованию. В случае сильной загрязненности образцы воды фильтруют через ватно-марлевый или бумажный фильтр с помощью стеклянной воронки. Затем воду пропускают через мембранный фильтр, который переносят после фильтрации в стерильный флакон с 10 см³физиологического раствора. Содержимое флакон 1-2 мин перемешивают на встряхивателе или 10 мин на качалке и затем центрифугируют 30 мин при 6000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют. К осадку добавляют 1 см³стерильного физиологического раствора и переносят в стерильную пробирку.

Для снижения уровня загрязненности сконцентрированной пробы посторонней микрофлорой одну её часть прогревают 30 мин при 50 ^оС, а другую обрабатывают кислотным буфером КСl-HCl(рН 2,2) в течение 4 мин.

Образцы биопленок, смывы с поверхностей концентрируют с помощью центрифугирования, кислотной и термической обработок.

Проведение анализа. Концентрированные, обработанные кислотным буфером и прогретые образцы засевают по 0,1 см³ на чашки с буферным угольно-дрожжевым агаром (БУДРАГ) с ростовой и селективной добавкой. Помещают в термостат при 37^оС до 10 дней во влажной атмосфере в присутствии СО₂. Исследование посевов начинают с 2 суток. Колонии легионелл на селективной среде имеют вросший центр, зернистую или блестящую поверхность; окрашены в серовато-голубоватый или зеленоватый цвет. Идентифицируют легионеллы по морфологическим, тинкториальным (грамотрицательные палочки), антигенным свойствам (реакция латекс-агглютинации с моновалентными и групповыми сыворотками, иммунофлуоресцентная микроскопия с мечеными антителами), а также идентификацией ДНК бактерий в полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Определение количества легионелл в исследуемом материале. Для определения количества легионелл проводят посев исследуемой концентрированной пробы без тепловой и кислотной обработки. Подсчитывают число колоний легионелл, выросших на чашке. Количество легионелл определяют по формуле

Х _c^{а х b} _s х 1000 см³

где

Х — количество легионелл на литр в исследуемой пробе

a— количество колоний легионелл, выросших на чашке

b— объем концентрата пробы (по завершении этапов фильтрации и центрифугирования) в см³

c— объем, высеянный на чашку, в см³мл

s— объем исходной пробы в дм³

Рекомендуемые значения для оценки уровня контаминации Legionella pneumophila объектов окружающей среды.

1. Присутствие L. pneumophilaв воде различных объектов окружающей среды, воде бассейнов, аквапарков, джакуззи, систем кондиционирования воздуха и др. в концентрациименее 1 х 10² микробных клеток на дм³является допустимым и не требует проведения профилактических мероприятий.

2. Концентрация легионелл в диапазоне от 1 х 10² до 9 х 10³ микробных клеток на дм³не представляет эпидемической опасности, но требует ежемесячного микробиологического контроля и проведения профилактических мероприятий.

3. При обнаружении легионелл в концентрации 1 х 10⁴ микробных клеток на дм³ и вышеделают вывод о колонизации данного объекта легионеллами в концентрации, представляющей эпидемическую опасность и требующей дезинфекционных и профилактических мероприятий.