3. Автоклав

Найбільш швидкий та надійний спосіб стерилізації, при якому гинуть найстійкіші мікроорганізми та спори бактерій – стерилізація насиченою парою під тиском. За допомогою цього методу стерилізують поживні середовища, які не містять білків та вуглеводів, посуд, різноманітний заражений матеріал із патогенними видами мікроорганізмів.

Обробку насиченою парою проводять у автоклаві, що являє собою циліндр із подвійними стінками і герметичною кришкою. В автоклав завантажують матеріал, що підлягає стерилізації. Наливають воду через лійку, стежачи за її рівнем у водомірному склі (рівень позначений).

Тиск, атм	Температура,С0
0,5	110
1,1	121
1,5	126
2,0	132

Потім закривають кришку, загвинчують її герметично. Приладпід׳єднуютьдо електричногоструму, доводять воду до кипіння. Пара, що утворюється, витискує повітря і разоміз ним виходить через випускний кран. Спочатку струмінь пари переривчастий, потім, коли повітря повністю витіснене, пара виходить безперервним струмом. Після цього закривають випускний кран. Пара опиняється в замкненому просторі і починається підвищення тиску та температури. За підвищенням тиску стежать за манометром. Коли манометр покаже потрібний тиск (1,5 – 2 атм), відмічають час. Якщо в автоклаві тиск піднімається вище, то запобіжний клапан автоматично відкривається, пара виходить зі свистом. Цесвідчитьпро те, що прилад на деякий часнеобхідновідключити від електромережі. Необхідно, щоб зазначений тиск утримувавсявпродовж20 хв. Після закінчення цього часу прилад відключають від електромережі і чекають, коли стрілка манометра впаде до 0. Після цього відкривають випускний кран і трішки відгвинчують кришку. Показникам тиску відповідає певна температура:

Для контролю роботи режиму автоклавата ефективності стерилізації користуються такими методами:

а) фізичні – максимальні термометри;

Рисунок 25 – Автоклав-75

б) хімічні – різні хімічні речовини, які мають певну температуру плавлення (бензойна кислота – 121⁰С, резорцин – 110⁰С);

в) біологічні тести – пробірки зі смужками фільтрувального паперу або бавовняної тканини, попередньо заражені спорами бактерій або термостійкими штамами бактерій (мікобактерій).

Автоклав застосовують для багаторазової стерилізації проточною парою. Уцьому випадку кришку не загвинчують, щоб забезпечити вільний вихід пари.

4 . Піч Пастера Піч Пастера використовується для стерилізації скляного посуду сухим жаром. Скляний посуд попередньо загортають у папір. Чашки Петрі, піпетки можна стерилізувати в металевих футлярах.

Режим стерилізації при температурі:

+ 150⁰- 2 год,

+ 160⁰- 1 год,

+ 180⁰- 30 хв.

Не можна стерилізувати в печі Пастера рідини та пристосування з гумовими прокладками.

Для контролю температури у пічці Пастера в пробірки насипають порошок сахарози. При температурі + 150⁰С відбувається карамелізація сахарози.

Рисунок 26 – Сухожарова шафа

Робота 2. Дослідження ефективності стерилізації шовного матеріалу

У першу пробірку зі стерильним пептонним бульйоном був внесений стерильний шовний матеріал, у іншу – нестерильний. Після інкубації пробірок у термостаті при температурі 37 ºС у одній із пробірок спостерігаються зміни. Врахуйте дослід, результати внесіть у протокол.

Робота 3. Врахувати ефективність проведеної стерилізації перев’язувального матеріалу

Для врахування цього досліду попередньо штучно контамінували 2 марлевих тест-об’єкти шляхом занурення першого у завись добової культури кишкової палички, другої у суспензію тижневої культури антракоїдів, на 1–3 хв. Обидва тест-об’єкта стерилізували у автоклаві при 1,1 атм. 40 хвилин. Після завершення автоклавування кожен тест-об’єкт переносили у окрему пробірку зі стерильним МПБ. Посіви 24 години інкубували в термостаті. Оцініть знезаражувальну дію такого режиму автоклавування за наявністю/відсутністю росту. Результат внесіть у протокол.

Робота 4. Визначити антибактеріальну дію дезінфікуючих розчинів

Для перевірки ефективності антибактеріальної дії дезінфекційних речовин були взяті стерильні диски з фільтрувального паперу, кожен із них був змочений у розчині фенолу, «Дезактину» та інших дезінфекційних речовин. Такі паперові диски, просочені певним видом дезінфекційноїречовини, помістили на поверхню поживного середовища в чашці Петрі, попередньо засіяної культурою стафілокока.

Надалі цю чашку інкубували в термостаті при температурі 37°С 18 – 24 години.

На практичному занятті врахуйте результати досліду та внесіть їх у протокол. Результати досліду враховуються за розміром зони затримки росту бактерій навколо паперового дискапросоченого дезречовиною.