Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

mikra1

.pdf
Скачиваний:
14
Добавлен:
15.02.2016
Размер:
134.14 Кб
Скачать

1 Основные этапы развития 1.Эмпирических знаний до изобретения микпов 2.Морфол-ич ок 200лет.Левенгук в 1675г. впервые описал простейших, 1683г.- основные формы бактерий. 3.Физиолог(с 1875г.)- эпоха Л.Пастера и Р.Коха. Л.Пастеризучение микробиол основ процессов брожения и гниения, развитие промыш микбиол, выяснение роли мик-мов в кругообороте веществ в природе, открытие анаэробных мик-мов, разработка принципов асептики, методов стерилизации, ослабления вирулентности и получения вакцин (вакц штаммов).Р.Кохметод выделения чистых культур на тв пит средах, способы окраски бактерий анилиновыми красит, откр возбуд сиб язвы, холеры. туберкулеза (палочки Коха), совершенствование техники микроскопии.4.Иммунологич период. Мечников- - учение о невосприим-ти (иммунитете), Знания об антителах,, позволившие П.Эрлиху разработать гуморальную теорию иммунитета. В 1892г. Д.И.Ивановский сообщил, что возбудителем мозаичной болезни табака является фильтрующийся вирус. ->днем рождения вирусологии,.5. открытие антибиотиков. В 1929г. А.Флеминг открыл пенициллин и началась эра антибиотикотерапии,..6. Современный молекуляргенетич этап во 2 половине 20 века в связи с достижениями генетики и молекулярной биологии, созданием электрон мик-па. 7.Перспективы развития.Иммунология вплотную подошла к регулированию механизмов самозащиты организма, коррекции иммунодефицитов, решению проблемы СПИДа, онкозаболевания.новые генно-инженерные вакцины,

2. Принципы современной классификации микробов..

При изуч, идентификации и классификации мик-мов чаще всегоизучают:1.Морфологические 2.Тинкториальныеотношение к различным красителям (по Грамму). 3.Культуральные - характер роста на питательных средах. 4.Биохимические - способность ферментировать различные субстраты5.Антигенные6.Физиологическиеспособы питания, тип дыхания 7.Подвижность 8.Способность к спорообразованию 9.Чувствительность к бактериофагам, фаготипирование.10.Химический состав клеточных стенокосновные сахара и аминокислоты, липидный и жинокислотный состав.

Вид-совокупность микроорганизмов, имеющих общее эволюционное происхождение, близкий генотип и максимально близкие фенотипические характеристики. Штаммлюбой конкретный образец данного вида. Штаммы одного вида, различающиеся по антигенным характеристикам, называют сероварами, по чувствительности к специфическим фагамфаговарами, биохимическим свойствамхемоварами, по биологическим свойствамбиоварами и т.д.

3.Основные методы исследования морфологии микроскопический метод: световая, фазово-контрастная, флуоресцентная, электронная;культуральный метод (бактериологический, вирусологический);биологический метод (заражение лабораторных животных);молекулярно-генетический метод (ПЦР - полимеразная цепная реакция)серологический метод - выявления антигенов микроорганизмов или антител к ним;для световой мик-пии красят: методы окраски Грама и Циля-Нильсена По Граму: 1.карболовый генциан виолет 2 мин. 2.Промыть водой. 3.Люголь 1 мин. 4.промыть водой. 5.Спирт 30 сек. 6.вода. 7. водный фуксин 2 мин. 8.вода. По Цилю: карболовый фуксин до появления паров. 2.Дать остыть. 3.Обесцветить 1% серной кислотой 30 сек. 4.вода 5.Метиленовая синька 5 мин. 6.вода.для структур всякие умные вещи бла бла.капсулы-кристаллич фиолетовый и далее 20%cuso4.жгутики протравливание препарата и последующая окраска

.

4. Морфология, ультраструктура и хим состав По форме 1.Шаровидные или кокки.2.Палочковидные.3.Извитые.4.Нитевид ные Бактерии шар-ной формы —в зависимости от плоскости деления и расположения отдельных особей подраз-тся на микрок. (отдельно лежащие к-ки), диплок. (парные к-ки),стреп-ки (цепочки к-ов), стафил. (имеющие вид виноградных гроздьев), тетрак. (образ-ся из 4 кокков) и сарцины (пакеты из 8 или 16 кокков). Палочковидн

1.Бактериипалочки, не образующие спор. 2.Бациллыаэробные спорообразующие микробы. 3.Клостридиианаэробные спорообразующие микробы. Извитые 1.Вибрионы один изгиб. 2.Спириллыимеют 2- 3 завитка 3.Спирохетыимеют различное число завитков..Ультраструктура1.капсулазащитна я полипептидная или полисахаридная

оболочка.Содержит много воды. Ф-ии – защ, антигенная, запас веществ, адгезия. Бывает микро и макрокапсула. 2.Жгутики – необязательные белковые, 3.Пили – микроворсинки, белковые трубочки на поверхности для адгезии,конъюгации.4.Клеточная стенка –., защита, транспорт, антигены,

спорообразование. 5. Цитоплазматическая мембрана6.Цитоплазма7. Мезосомы – выросты цитопл-ской мембраны – деление8. Рибосомы9.Нуклеоид.10.Плазмиды – изолированные фрагменты ДНК.11.Включения12. Споры .Протопласты – полностью лишены клеточной стенки, Сферропласты – частично лишены.L-формы

– без клеточной стенки но способные размножаться.

5. Основные различия прокариот и эукариот,У прокариот нет ядра, кольцевая ДНК (кольцевая хром-ма) расп-на прямо в цит-ме (нуклеоид).У эукариот есть оформленное ядро (насл-ная информация [ДНК] отделена от цит-мы ядерной оболочкой).1) нет ядра,-> нет и митоза/мейоза. Бактерии разм-ся делением надвое.2) У прокариот из органоидов имеются только рибосомы (мелкие, 70S), а у эукариот кроме рибосом (крупных, 80S) имеется множ др органоидов: митохондрии, эпс, клет центр, .3) Клетка прокариот гораздо меньше клетки эукариот: по ди-ру в 10 раз, по объему – в 1000 раз.

1)У прокариот ДНК кольцевая, а у эукариот линейная

2)У прокариот ДНК голая, почти не соединена с белками, а у эукариот ДНК соединена с белками в соотношении 50/50, образуется хромосома

3)У прокариот ДНК лежит в специальной области цитоплазмы, которая называется нуклеоид, а у эукариот ДНК лежит в ядре. Вирусы — это всегда внутрикл

паразиты. Они способны размнож-ся только в чужой клетке, потому что сами состоят только из одного типа нукл киc-ты и белковой или белково-липидной оболочки.Вирусы собственного обмена веществ не имеют. Они внедряются в клетку и заставл ее изготавливать копии вируса. Идет про-тво

копий нукл кис-ты и копий вирусных белков, из которых в конце собирается новая вирусная частица. При этом клетка чаще всего гибнет из-за прекращения продукции собственных белков, накопления токсических вирусных компонентов и повреждения клеточных лизосом. Прокариота - простейший клет. организм.

6. Споры и капсулы.

Капсула бактерии — слизистая структура толщиной более 0,2 мкм, прочно связанная с клеточной стенкой бактерий и имеющая чётко очерченные внешние границы. Она выявляется при специальных методах окраски по Бурри-Гинсу создающих негативное контрастирование веществ капсулы: тушь создаёт тёмный фон вокруг капсулы.Капсула состоит из полисахаридов или полипептидов, содержит много воды.Многие бактерии образуют микрокапсулу — слизистое образование толщиной менее 0,2 мкм, выявляемое лишь при электронной микроскопии.Функции – защитная, антигенная, запас веществ, адгезия. Окраска по РомановскомуГимзе.Споры – форма сохранения наследственной информации и и

бактериальной клетки в неблагоприятных условиях внешней среды. Мало воды, много кальция, жиров. Окраска по Цилю-Нильсену

7. Размножение бактерий.

1-я — фаза

задержки

размножения, — хар-ся началом

интенсивного

роста

клеток, но скорость их

деления

 

остается

невысокой;2-я

- логарифмическая, или лог-фаза, —

хар-

ся постоянной

макс

скоростью

деления

клеток и значительным увеличением числа клеток в популяции;• 3-я — стационарная фаза — наступает тогда, когда число клеток в популяции перестает увелич. Это связано с тем, что наступает равновесие между числом вновь образ-ся и гибнущих клеток. Число живых бак-ных клеток в популяции на единицу объема питательной среды в стационарной фазе обозначается как М- концентрация.Этот показатель является характерным признаком для каждого вида

бактерий;

4-я

фаза

отмирания

(логарифмической

гибели) — хар-тся

преобладанием в популяции числа погибших клеток и прогрессивным снижением числа

жизнеспособных

клеток

популяции. Прекращение

роста

численности

(размножения)

популяции

мик-мов наступает в связи с истощением питательной среды и/или накоплением в ней продуктов метаболизма микробных клеток. Поэтому, удаляя продукты метаболизма и/или заменяя питательную среду, регулируя переход микробной популяции из стационарной фазы в фазу отмирания,

можно создать открытую

биологич

сис-

му, стремящуюся

к

устранению

динамического

равновесия

на

определенном уровне развития популяции.

9. Условия культивирования микробов. Выращ мик-ов в лаб условиях приянто наз-ть культивиров, а рост на питат среде - культурой данных микробов.Важн задача куль-ния - изолир и выделить колонии по возм-ти всех мик-мов, содер-ся в смеси, выделить чистую культуру дл дальнейш изучения морф, физ-ч и биохим особ-тей ,необх для опред видимой принад-ти микробв. В микрбиол чист наз культуру микроба, происходящ от 1 клетки или споры. При этом полагают, что из 1 бактер-ой клетки выраст-ет 1 колония. Самый распростр способ выделен чистых культур - культивир на пит средах путем посева, пересева. Нужно:1.Исп всех необх для соответ микробов питат комп.2.Оптим темпер, рН, rH2, конц ионов, степень насыщ О2, газ состав ,давлМик-мы культив на питат средах при оптим те-ре в термостатах, обеспеч услов инкубации.По те-му оптимуму роста 3 группы мик-мов.1.Психрофилы- ниже +20 град. 2.Мезофилыот 20 до 45 градусов ( 37).3.Термофилывыше +45 .Среды

классифц по консист, составу, происхожд,, назнач и загряз. Матер-ла !Консист: плотные (тв), полужид и жид. Состав: белков, безбелк и минерал . проис-ние : искуств и естеств (природн) .Искусств делят-> животные (МПА) или (МПБ)] и растите (настои сена и соломы, отвары злаков, дрожжей или фруктов, пивное сусло .).Естеств пит среды могт содерж компты жив-го (, кровь, сыв-ка, жёлчь) или растит ( кусочки овощей и фруктов) проис-ния. По назнач: консервир среды (для первич посева и транспор-ки), среды обогащ (для накопл опред группы бактер), среды для культивир,среды для выделен и накопл (консервирующие, обогащения и элективные) и среды для идент-ции (диффере и элективно-дифференц).

8. Энергетический метаболизм бак. основывается на фототрофии, использовании света через фотосинтез, или на хемотрофии, использовании хим веществ для получения энергии. Хемотрофы делятся на литотрофов, кот исп неорган доноры электронов для дыхания, и органотрофов, кот исп органич соед-ия в качестве доноров электронов. Чтобы использовать хим соед как источник энергии, электроны берутся из возобновл веществ и перемещают к акцепторам электронов в процессе окис-вос р-ии. Эта реакция высвоб энергию, кот может исп для проведения метаболичных реакций. В аэробных организмах в качестве акцептора электронов испол кислород. В анаэробных организмах вместо него исп другие неорг вещества, напр нитраты, сульфаты или углекислота. Фак анаэробы могут переключ между процессами аэроб и анаэр дых, то есть разными акцепторами электронов, в зав-ти от естественных условий, в которых они находятся. Литотрофные бак-рии могут исп неорг вещ-ва как источник энергии. Общими неорган донорами электронов явля водород, угарный газ, аммиак

10. Микробные ферменты, их испМик-мы синтезируют оксидоредуктазы, трансферазы, лиазы, гидролазы, изомеразы и лигазы. Определение caхаролитических, протеолитических и др ферментов, образуемых опред видами и даже вариантами бактерий, широко применяется для их идентификации. Вместе с тем ряд ферментов (нейроминидаза, гиалуронидаза, коагулаза и др.) способствуют проявлению патогенных свойств поскольку субстратом их действия явл вещ-ва клеток и тканей орг-ма чел-каОдни ферменты ми-мов лок-я в их цитме, цит-ской мембране и периплазматическом простравстве, другие, например гидролазы, выделяются в окружающую среду. На этом основано деление ферментов на экзо- и эндоферменты. Функц назнач

экзоферментов связано с расщеплением макромолекул в окруж среде до более простых соединений, кот затем трансп-тся в микробную клетку. Некоторые ферменты, лок-ые в цитоплазме, функ-ют независимодруг от друга, другие тесно связаны между собой, обеспечивая протекание метаболических реакций в опред последсти. Внутриклеточные ферменты, объединенные структурно и функционально, составляют мультиферментные комплексы.Ферменты, которые постоянно синтезируются в микробных клетках в опред концентрациях, наз конститутивными. К ним относятся ферменты гликолиза. Ферменты, концентрация которых резко возрастает в зав-ти от наличия соответствующего субстрата, называют индуцибельными - беталактамаза — фермент, разрушающий пенициллин.

 

 

контролем чистоты выделенной культуры).

 

12. Выделение и культивир строгих анаэр.

 

 

Метод Цейсслера применяется для выдел

 

11. Понятие о чистой культре микроба,

чист культур спорообраз анаэробов.

 

штамме, клоне. Штаммлюбой конкретный

производят посев на среду Китт-Тароцци,

 

образец данного вида. Штаммы одного вида,

прогрев 20 мин при 80 °C (для уничтож

 

различающиеся по антигенным хар-ам, наз

вегетативн формы), заливают среду

13. Понятие об асептике, антисептике,

сероварами, по чувств-сти к специфическим

вазелиновым маслом и инкубируют 24 ч в

стерилизации и дезинфекции.

фагам - фаговарами, биохимическим

термостате. Затем производят посев на

Асептика – совокуп всех методов

свойствамхемоварами, по биологическим

сахарно-кров агар для получ чистых культур.

направленных на уничтожение или резкое

свойствамбиоварами. Колониявидимая

После 24-час-го культивир интересующие

снижение численности.

изолированная структура при размножении

колонии изучаются — их пересеивают на

Дезинфекция – мероприятия, направленные

бактерий на плотных питат средах, может

среду К-Т. и (с послед контролем чистоты

на уничтожение или резкое подавление

развиваться из одной или неск родительских

выделенной культуры).Метод Фортнера —

численности патогенных и условно-

клеток. Если колония развилась из одной

посевы производят на чашку Петри с

патогенных мик-мов во внешней среде и на

родит клетки, то потомство наз клон.

утолщенным слоем среды, разделённым

объектах. (методы – химический,

Культурався сов-ть мик-мов одного вида,

пополам узкой канавкой, вырезанной в агаре.

физический, механический, биологический)

выросших на плотной или жидкой

Одну половину засевают культуру аэробных

Вещества: Галоидсодержащие,

питательной среде.

бактерий, на другую — анаэробных. Края

кислородсодержащие, спирты,

Чистой культурой микробов наз

чашки заливают парафином и инкубируют в

альдегидосодержащие.

совокупность мик-мов одного вида, имеющие

термостате.Первонач-но наблюд рост

Антисептика – подаление патогенных и

одинаковые морфологич, биохимические и

аэробной микрофлоры, а затем (после

условнопатогенных бактерий на коже и

культуральные свойства. Существуют 2

поглощения О2) — рост аэробной резко

слизистых.Стерилизация – освобождение

основных метода разведения исследуемого

прекращается и нач-ся рост

объекта от всех микроорганизмов путем

материала:1) на пов-ти плотной пит среды;2)

анаэробной.Метод Вейнберга исп для получ

химического и физических методов. Методы

предварительное разведение материала в

чистых культур облигатных анаэробов.

стерилизацииТермическая: паровая и

физ растворе. Метод на поверхности

Культуры, выращ на среде Китта-Тароцци,

воздушная (сухожаровая).Химическая:

плотной среды исп для выделения чистых

переносят в сах бульон. Затем одноразовой

газовая или химическими растворами

культур аэробныхи фак анаэробных м-мов. С

пастеровской пипеткой материал переносят в

(стерилянтами)Радиационная стерилизация

этой целью для посева берут ряд чашек

узкие пробирки с сахарным мясо-пептонным

— применяется в промышленном

Петри с плотной средой. В первую чашку

агаром, погружая пипетку до дна пробирки.

вариантеМетод мембранных фильтров —

наносят исследуемый материал и

Засеянные пробирки быстро охлаждают, что

применяется для получения небольшого

распределяют его по поверхности шпателем.

позволяет фиксировать бактериальный

количества стерильных растворов, качество

Затем производят посев последовательно на

материал в толще затвердевшего агара.

которых может резко ухудшиться при

поверхность Среды в остальных чашках.

Пробирки инкубируют в термостате, а затем

действии других методов

Количество материала,внесенного в среду,

изучают выросшие колонии. При

стерилизации(бактериофаг, селективные

при этом последовательно убывает.

обнаружении интересующей колонии на её

питательные среды, антибиотики)

 

месте делают распил, материал быстро

 

 

отбирают и засеивают на среду Китта-

 

 

Тароцци (с последующим

 

14. Действие физических факторов на микроорганизмы. .Стерилизация — обработка объектов, при кот достиг-ся полное уничтож всех мик-мов. В рез-те стерилиз объект становсвобод как от патогенных, так и от сапрофитных микробов. в основе лежит дей-е физич или хим факторв. Критерием гибели мик-мов явл необратимая утрата спос-ти к размножПрокаливание на огне —бактер- чских петель, металлич и стекл предметов. применяется огранич-но ввиду их порчи. Стерилизац сухим жаром или горяч воздухом произ-тся в сушильных шкафах или печах Пастера при т. 160—170°С в теч 1—1,5 ч. стерилизуют лаб-ую посуду, инструменты, минер масла .Кипячением в теч-е 30 мин

.убивает вегетатив форм. микр-ов. Споры многх бактерий при этом сохр, выдерж кипячение в теч неск часов. Для унич вирусов —в теч 45—60 мин. подверг шприцы, хир инстр, иглы, резин трубки. В автоклаве. Это 2-стенный металлич котел, + герметич

закрыв крышку. Под котел налив воду. Вода нагрев и образ-ся пар .по спец патрубку, соед с котлом , поступв рабоч камеру котла.Пар вытесн воздух(вых через клапан). как воздух полн-ю вытеснен из камеры , из выпуск-го клапана пойдет насыщ «сухой пар», крышку герметически закрывают. Стерилизация текучим паром пров-тся в аппарате Коха или в автоклаве при незавинч крышке и открытом выпускном кране. На дно аппарата Коха наливают воду и нагревают до 100°С. Образующ-чся пар движ вверх через заложенный материал и стерилизует его. Стерилизация фильтрованием через бактериальные фильтры для освобождения жидкостей от бактерий. используют в тех случаях, когда жидкость портится от нагрев, при необ-ти отделения бактериальных клеток от растворимых продуктов их жизнед-сти (экзотоксины, антибиотики и др.), фагов, вирусов. В механизме стерилизации фильтрованием играют роль размер пор и адсорбция микробов на стенках пор фильтров.

Химическая стерилизация применяется в том случае, если объекты нельзя автоклавировать. Обычно это питательные среды, содержащие термолабильные вещества..1.Температура: термофилы (50-60) психрофилы (10-15) мезофилы (3537)2.Реакция среды – нейтр и слаб-щел кисл3.Влажность –4.Радиация, ультразвук и давление.

15. Бактериофаг. Получение, титрование Это вирусы, избирательно поражающие бактериальные клетки. Чаще всего бактериофаги размножаются внутри бактерий и вызывают их лизис. большинство фагов состоит из головки, воротничка и хвостового отростка, заканчивающегося базальной пластинкой, к которой прикреплены фибриллы.Содержание головки

— это ДНК (иногда РНК). Хвостовой отросток имеет цилиндрический стержень, окруженный сократительным чехлом. В оболочку фаговой частицы и отросток входит белок, состоящий из полиаминов: спермин, путресцин, кислоторастворимый пептид. Фаг получают путем добавления в котлы с бульонными культурами специального

производственного фага, который выдерживают сутки при 37°С, затем фильтруют. Проверяют на чистоту, стерильность, безвредность и активность (силу действия).Титрование бактериофага - определение активности бактериофага по способности различных разведений его

взвеси лизировать бактериальные культуры в жидких питательных средах или образовывать негативные колонии в бактериальном газоне на плотных питательных средах. Применение: фаготипирование и

дифференцировка бактерий, лечение.

16. Фазы взаимодействия фага с бак. Клеткой. К клет стенке бактерий фаги прикреп концевыми нитями отростков. Затем оболочка бактерии раств-ся с пом-ю фермента лизоцима, белковый чехол хвостового отростка сокращается и через канал хвостового отростка нукл кис-та вводится (впрыскивается) в цитоплазму клетки. После проникн нукл кис-ы внутрь клетки бактерии следует Си-фаза, или фаза смены информации. В этот период фаговые частицы не обнаруживаются, однако в клетке развиваются процессы, обусловл. фаговым геномом. Начи-ся синтез иРНК и ранних белков, необх для синтеза ДНК фага и других структурных компонентов зрелого фага. Синтез ДНК фага осущ-ся с пом клеточной ДНКполимеразы и сопровожд полным распадом ДНК бактерии и ее утилизацией. Если ДНК бактерии не хватает, фаговая ДНК синтезируется из компонентов среды. ДНК фага можно обнаружить в клетке через 8—9 мин после заражения. С 9-й минуты начинают синт-ся специфичные фаговые белки. На последнемэтапе взаим-ия фага с бактерией происходит самосборка фаговых частиц, кот состоит в необратимом объединении фаговой ДНК и сформировавшейся белковой оболочки. После происходит лизис бактерии

и зрелые фаги выходят в окруж среду. Полный цикл развития фага составляет 30— 90 мин. За этот период образуется 200 и более фаговых частиц, которые способны заражать новые клетки. Лизогения — совместное существование бактерий и бактериофагов, при котором бактериофаг является составной частью нормально развивающейся бактериальной клетки.

17. Генетический аппарат у бактерий. . Нуклеоид - ядерное вещество,

распыленное в цитоплазме клетки. Не имеет ядерной мембраны, ядрышек. В нем локализуется ДНК, представл двухцепочечной спиралью. Обычно замкнута в кольцо и прикреплена к цитоплазматич мембране. виды изменчивости микроорганизмов.Диссоциация — измельчение гладких форм колоний (S- форма) в шероховатые (R-форма). Такой переход от S- к R-форме совершается под влиянием бактериофага и других внешних условий. С изменением формы микроор-ма меняются его некоторые морфолог и физиологич свойства.

Адаптация — приспособл к новым условиям существования, это временные изменения. Трансформация — передача опред свойств одного микроор-ма другому посредством дезоксирибонуклеиновой (ДНК) или рибонук кислот (РНК) .Мутация — вновь возникающее изменение свойств мик-ма, передающ по наследству.Бактерии с измененн признаками наз мутантами. Спонтанные мутации возникают под влиянием неизвестных причин и лежат в основе эволюции мик-мов. Факторы, вызыв мутации, наз мутагенами. Различ физич, хим и биол мутагены. Фенотипич изменчивость - модификации - не затрагивает генотип. Модификации затрагивают боль-во особей популяции. Они не передаются по наследству и с теч-м времени затухают, т.е. возвр-ся к исход фенотипу через большее (длител модификации) или меньшее (кратковрем модификации) число поколений.Генотипич изменчивость затрагивает генотип. В ее основе лежат мутации и рекомбинации.

18. Генетические рекомбинации:

Процесс образов геномов, содерж генетич материал от 2 родит-х форм.у бактерий осущ

врез-е (назв бил.). Рекомбинации:законные и незак. З. рек-я требует налич протяженных, комплементаручастков ДНК в рекомбинир-х молекулах. Она про-дит только между близкородств видами мик-мов.Н.р. не требует наличия протяж ком.уч. ДНК. Трансформация — процесс поглощения клеткой орг-ма свободной молекулы ДНК из среды и встраивания её в геном, приводит к появл у клетки новых для нее признаков, хар-ных для организма-донора ДНК. Клетки, способные воспринимать донорную ДНК, наз-ся компетентными. Сост-е комп-ти непродолж. возникает в опред период роста бактер культуры.В сост ком-ти клет стенка бактерий стан-ся проницаемой для высокополимерных фрагментов ДНК. трансформ-мый фрагмент ДНК связ-ся сбелком,,образ. трансформасому, в кот. он перен-ся в бактер-ю клетку..После проникнов внутр клетки трансформирующая ДНК деспирализуется. ->происх-ит физич включ любой из 2нитей ДНК донора в геном реципиента.Трансдукция — процесс переноса бактериальной ДНК из 1 клетки в другую бактериофагом. Неспецифич: трансдуцир фаги явл только переносчиком генетич материала от одних бактерий к другимСпецифич: хар-ся способ-ю фага переносить опред гены от б.-донора к б.- реципиенту. Абортивная: принесенный фагом фрагмент ДНК бактерии донора не включ-ся

вхро-му бактр реципиент, а располаг в цитоплазме. Конъ-ция - однонаправл перенос части генетич матер-ла при непосредств контакте 2 бак-ых клеток. 1 этап явл прикрепл клетки-донора к реципиентн клетке с пом. половых ворсинок.Затем между обеими клетками обр-ся конъюгационный мостик через кот из клетки-донора в клеткуреципиент могут передаваться F-фактор и другие плазмиды, наход-ся в цитоплазме бактерии-донора в автономном состоянии.Транспозиция - перемещ опред генетич элементов из одного места на хромосоме в другое.Генная инженерия — совокуп приёмов, методов и технологий получения рекомбинантных РНК и ДНК,выделения генов из организма(кл

еток), осуществл-я манипуляций с генами и введения их в другие организмы.

19. Нехромосомные генетические факторы у бактерий .Плазмиды — внехромосомные мобильные генетич структуры бактерий, представл собой замкнутые кольца двунитчатой ДНК несущие от 40 до 50 генов. Выделяют автономные (не связанные с хромосомой бактерии) и интегрированные (встроенные в хромосому) плазмиды.Автономные

существуют в цитоплазме бактерий и способны самост-о репродуцироват-я; в клетке может присутствовать несколько их копий.Интегрированные плазмиды репродуцся одновременно с бактериал.

хромосомой. Интеграция плазмид происходит при наличии

гомологичных последовательностей ДНК, при которых возможна рекомбинация хромосомной и плазмидной ДНК (что сближает их с профагами).Плазмиды также подразделяют на трансмиссивные (например, F- или R-плазмиды), способные передаваться посредством конъюгации, и нетрансмиссивные.iS-последовательности — короткие фрагменты ДНК.Они не несут структурных (кодирующих тот или иной белок) генов, а содержат только гены, ответственные за транспозицию (способность IS-последовательностей перемещаться по хромосоме и встраиваться в различные ее участки). ISпоследовательности одинаковы у разных бактерий.Транспозоны —это молекулы ДНК, более крупные, чем IS-после- довательности.Помимо генов, ответственных за транспозицию, они содержат и структурный ген, кодирующий тот или иной признак. Транспозоны легко перемещаются по хромосоме. Их положение сказывается на экспрессии как их собственных структурных генов, так и соседних хромосомных. Транспозоны могут существовать и вне хромосомы, автономно, но неспособны к автономной репликации.Бактериофааги — вирусы, избирательнопоражающие бактериальные кл етки. Чаще всего бактериофаги размножаются внутри бактерий и вызывают их лизис. Как правило, бактериофаг состоит из белковой оболочки и генетического материала одноцепочечной или двуцепочечной нуклеиновой кислоты (ДНК или, реже, РНК). Размер

частиц приблизительно от 20 до 200 нм

20. Молекулярные методы диагнос(пцр) (ПЦР) — эксперимент-ый метод молекулярной биологии, позволяющий

добиться значительного увеличения малых концентраций опред фрагментов нукл к-ты (ДНК) в биологич материале (пробе).

Помимо амплификации ДНК, ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с нукл к-ми (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК) и широко исп-ся в биологич и мед практике, н-р, для диа-ки заболеваний (наследственных, инфекц-х), для установ отцовства, для клонированиягенов, выделения новых генов.Денатурация 2-цеп- ую ДНК-матрицу нагревают до 94—96 °C чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется денатурацией, так как разруш водородные связи между 2 цепями ДНК.Отжиг Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия наз-ся отжигом.Элонгация ДНКполимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки.

Это — стадия элонгации. Полимераза начинает синтез второй цепи от 3'-конца праймера, который связался с матрицей, и движется вдоль матрицы в направлении от 3' к 5'.При проведении лигазной цепной реакции исп-ся способность ДНК лигаз восстанавливать фосфодиэфирные связи в одноцепочечных разрывах 2-цеп-ных молекул ДНК. Для этого синтезируют 2 олигонуклеотида, комплементарные непрерывной последовательности нуклеотидов ДНК, которые после гибридизации с такой последовательностью примыкают друг к другу и разделены лишь одноцепочечным разрывом. При этом 3'- конец предшествующего нуклеотида должен содержать свободную 3'-ОН-группу, а в 5'- положении 5'-конца олигонуклеотида, следующего за ним, должна находиться фосфатная группа.

.

21. Учение о микробном антагонизме. Антагонизм микробный — угнетение роста одного микроба другим..Механизм антагонистического д-я микробов м.б. связан с различ причинами:образованием токсич продуктов метаболизма, а.б. .А.б. - вещ-ва микробного происхождения, облад способностью задерживать развитие и вызывать гибель различных мик-мов, главным образом бактерий..Похарактеру воздействия на бактер клетку а.б. можно разделить на 3 группы:бактериостатич(бактерии живы, ноневсостояни размножаться),

бактерициды (бактерии погибают, но физич продолжают присутств в среде), бактериолитические (бактерии погибают, и разрушаются бактер. Клет. стенки).

группы:Пенициллины — вырабатываются колониями плесневого грибка Penicillinum; Цефалоспорины — обладают схожей структурой с пенициллинами. Исп по отнош к пенициллинустойч бактериям.

Макролиды –бактериостатич. Д-е.. Тетрациклины — исп для лечения инфекций дых. и мочевыводящих путей, лечения тяж инфекцийтипа сибирскойязвы, туляремии, бр уцеллёза. Действие — бактериостатическ. Аминогликозиды — для лечения тяжелых инфекций типа заражения крови или перитонитов. Действие — бактерицидное.Левомицетины — бактериостатич.Гликопептиды

бактерицидное д-е. Противогрибковые — разруш мембрану клеток грибков и вызывают их гибель. Действие — литическое..По мехму д-я:1.Наруш синтеза клеточной стенки 2. Нарушениефункционирования мембран: нарушение целостности мембраны, 3. Подавление синтеза нукл ки-т.4Наруш синтеза пуринов и пиримидинов5. Наруш синтеза белка: ингибирование активации и переноса а|r, функций рибосом (стрептомицин,тетрациклин,)Аб.По спектру действия, по направленности, по хим составу, по происхождению.

22. Определение чувствительности микробов

23. Механизмы возникновения и

к аб(мик).Для определения чувст-ти

 

распространения лекар уст.

микробов к а.б. :диффузия в агар (метод

Резистентность микроорганизмов к

дисков) и метод последов-х разведений в

антибиотикам может

жид или плот питат среде.Метод дисков.

быть природной и приобретённой.

Испытуемую культуру засевают сплошным

 

Истинная

природная устойчивость характеризуется

газоном на пов-ть чашки Петри с мясопепт.

 

 

отсутствием у микроорганизмов мишени действия

агаром. Затем на пов-ть агара помещают

 

диски, пропитанные растворами а.б.-в

антибиотика или недоступности мишени вследствие

 

первично низкой проницаемости или

Диски готовят из спец. картона диаметром 6

 

мм.. Д-е а.б. оценивают по феномену

ферментативной инактивации. При наличии у

задержки роста вокруг диска после

бактерий природной устойчивости антибиотики

клинически неэффективны. Природная

 

инкубации в термостате при 37°С в течение

 

18—24 ч. В зав-ти от диаметра зоны

резистентность является постоянным видовым

признаком микроорганизмов и легко прогнозируется.

 

задержки роста различ степень чувств-ти

 

испытуемого штамма: чувствительные

Под приобретённой устойчивостью понимают

 

свойство отдельных штаммов бактерий сохранять

(более 10 мм), малочув. (менее 10 мм) и

 

 

жизнеспособность при тех концентрациях

устойчивые (отсутствие зоны). Вместо дисков

 

 

антибиотиков, которые подавляют основную часть

при определении чув-ти микробов можно исп.

 

цилиндрики (фарфоровые или

микробной популяции. Возможны ситуации, когда

большая часть микробной популяции проявляет

 

металлические), куда заливают растворы

 

антибиотика разной концентрации.

приобретённую устойчивость. Появление у бактерий

приобретённой резистентности не обязательно

 

Метод последовательных разведений а.б. .

 

Готовят серию двукратных разведений

сопровождается снижением клинической

 

эффективности антибиотика. Формирование

антибиотика в жидкой или плотной питат

 

 

резистентности во всех случаях обусловлено

среде, а затем в пробирки или на пов-ть

 

чашек Петри с каждым из разведений

генетически: приобретением новой генетической

 

информации или изменением уровня экспрессии

засевают испытуемую культуру микробов.

 

После инкубации в термостате опред

собственных генов.Известны следующие

 

биохимические механизмы устойчивости бактерий к

минимальную подавляющую концентрацию

 

 

антибиотикам:Модификация мишени

антибиотика (МПК) по отсутствию роста в

 

пробирке или на чашке с одним из

действияИнактивация антибиотикаАктивное

выведение антибиотика из микробной

разведений.Первую наименьшую

клеткиНарушение проницаемости внешних структур

концентрацию антибиотика (из серии

последовательных разведений), где

микробной клеткиФормирование метаболического

«шунта».

 

визуально не определяется бактериальный

 

рост принято считать минимальной

 

 

ингибирующей концентрацией (МИК).

 

 

МИК - наименьшая концентрация

 

 

антибиотика которая in vitro полностью

 

 

подавляет видимый рост бактерий.

 

 

Терапевтическая концентрация –

 

 

определенная максимальная концентрация в

 

организме, которая вызывает антимикробное

 

действие

 

 

24. Сан-бак исслед воздуха;

1. Метод естественной седиментации Открытую чашку Петри с питательной средой оставляют на горизонтальной поверхности на определенное время . Затем чашку закрывают и после инкубации в термостате проводят подсчет выросших колоний 2. Метод принудительной

сдиментации микроорганизмов из воздуха онован на использовании импакторов, которые осаждают частицы на поверхность плотных питательных сред. Метод импакции с использованием аппарата Кротова заключается в прокачивании воздуха через щель в крышке, расположенной над поверхностью вращающейся чашки Петри с питательной средой. 3. Фильтрационный метод основан на пропускании исследуемого воздуха через жидкость или мембранные фильтры, с последующим мерным высевом в питательные среды, а при вирусологическом исследовании - в культуру клеток.//- общее микробное число (ОМЧ) - количество бактерий в пересчете на 1 м3 воздуха, выросших при посеве на

поверхности питательного агара через 48 часов-

 

палочкам — постоянным обитателям

 

кишечника человека и животных.Сан-бак

 

исследования проводятся в строгом

 

соответствии со специальными

 

государственными общесоюзными

 

стандартами, приказами, методическими

 

рекомендациями, правилами, которые

 

позволяют дать оценку соответствия

26. Сан-бак обслед лечеб и детс

выявленной в окружающей среде

Метод смывов позволяет определить как

микрофлоры гигиеническим требованиям. В

присутствие жизнеспособных микр-в на пов-

нормативных документах отражены правила

тити объекта, так и их количество на 1 см2.

отбора проб, количество материала, условия

Смывы берут с исследуемой поверхности

транспортировки, методы и цель

ватным тампоном или марлевой салфеткой,

исследования, а также критерии оценки

удерживаемой пинцетом. Непосредственно

полученных результатов.

перед взятием смыва тампонили салфетку

 

смачивают стерильным физ ра-ром и

 

тщатпротирают им исследуемую

 

поверхность. После взятия смыва тампон

 

тщательно встряхивают в пробирке с опред

 

кол-вом стерильной жидкости (физ ра-ра или

 

питательной среды).При исследовании

 

на бактерии кишечной группы смывы

 

засевают в среду Кесслер (глюкозо-

 

пептонная среда с генцианвиолетом и

 

лактозой) или на 0,1% пептонную воду с

 

последующим высевом на среду Эндо.

 

Мегод отпечатков предусматривает

 

непосредственный контакт плотной

 

питательной среды с исследуемым.Метод

 

бакпечаток. Для отпечатков с поверхности

 

нередко используют контактные чашки

 

'бактотест" (так называемые бакпечатки). Это

 

выполненные из пластмассы чашечки Петри

 

малого диаметра (3,5 см), которые снабжены

 

плотно закрывающимися крышками. Чашки

 

"бактотест" заранее заливают доверху

 

средой Эндо или другими плотными средами

 

и закрывают крышками. Для взятия

 

отпечатка снимают крышку и прижимают пов-

 

ть среды к исслед объекту. Затем вновь

 

закрывают чашки ''бактотест" и инкубируют

 

их в термостате.

 

25. Сан-бакт исслед продуктов Оценивают безоп.продукта для чел.Микробиологические показатели неспецифической микрофлоры, определяемые в пищевых продуктах, подразд на 4 группы .Для проведения исследований используют качественные и количественные методы.Качественными методами определяют характер технологической микрофлорыи возбудителей порчи продуктов.Количественными методами определяют общее количество МАФАМ - мезофильных аэробов и факультативно-

анаэробных микроорганизмов в 1 г.Молоко исследуют на:МАФАМ и их количество;титр и индекс БГКП , S.aureus.Количество МАФАМ определяют путем посева в чашки Петри с расплавленным агаром 1 мл исследуемого молока. После инкубации при 30 °С в течение 72 часов подсчитывают все выросшие

колонии..При исследовании молочных продуктов и молока на БГКП условнопатогненные и патогенные возбудители, ориентируются на массу продукта в которой нормативные документы не допускают содержание этих бактерий.Для пищевых продуктов, в отличие от других объектов, к БГКП относят - грамотрицательные. оксидазонегативные, не образующие спор. С целью определения БГКП в молоке и молочных смесях делают посев определенных объемных разведений. среду Кесслер, которая по составу почти аналогична глюкозо-петонной среде, но содержит генциан-виолет для ингибирования кокковых бактерий. Из

забродивших проб делают высевы на среду Эндо, затем проводят идентификацию выделенных бактерий.

27. Цели и задачи сан микр. Основной задачей санитарной

микробиологии является предупреждение возникновения инфекционных заболеваний, т. е. осуществление постоянного контроля за водой, воздухом, почвой, пищевыми продуктами и т. д. с целью выявления патогенных мик-мов, либо выявление санитарно-показательных мик-мов, кот явл косвенными показателями зараженности окружающей среды. Санитарнопоказательные микмы — это постоянные обитатели поверхностей и полостей тела человека и животных, выделяющихся из организма теми же путями, что и патогенные. Поэтому, чем больше выявлено санитар-но- показательных мик-мов, тем большая вероятность попадания в объекты внешней среды патогенных микроорганизмов.Для каждого объекта внешней среды имеются определенные санитарно-показательные микр-мы — критерии оценки по бактериологическим показателям. Например, в отношении кишечных инфекций роль таких индикаторов принадлежит кишечным

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]