12963-metodicheskie_ukazaniya_biohim_ch1

Энергетический обмен. Обмен углеводов и липидов

альдегид, последний восстанавливается в этиловый спирт под действием алкогольдегидрогеназы за счет восстановленной формы кофактора — НАДН (Н+).

Техника выполнения.

а) Заполнение бродильного аппарата. 1 г свежих пекарских дрожжей или 0,5 г сухих дрожжей растирают в ступке, приливая небольшими порциями 5% раствор глюкозы в количестве 20 мл. Затем смесь переносят в бродильный аппарат (аппарат Эйхгорка) так, чтобы закрытое колено было заполнено полностью, а расширенная его часть только до половины. С заполненной трубкой прибор помещают в термостат при температуре 37оС на 30—50 мин. Когда произойдет накопление газа в верхней части закрытого колена прибора, можно проделать качественные реакции на СО2 и на спирт.

б) Обнаружение СО2. В бродильный аппарат наливают 10% раствор едкого натра до краев сосуда и, закрыв отверстие большим пальцем, перемешивают содержимое прибора. СО2 поглощается щелочью, создавая вакуум, и кожа пальца присасывается к отверстию прибора.

в) Обнаружение этилового спирта с помощью йодоформенной пробы. 2—3 мл жидкости из бродильного аппарата отфильтровывают в пробирку, добавляют несколько капель 10% раствора йода до получения желтого окрашивания и слегка нагревают. Через некоторое время ощущается характерный запах йодоформа.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА

Впишите в таблицу «Энергетический эффект аэробного распада глюкозы» количество использованных (–АТФ) или синтезированных (+АТФ) молекул АТФ. Подсчитайте суммарный энергетический эффект окисления 1 молекулы глюкозы до СО2 и Н2О.

ЛИТЕРАТУРА

•Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П. Основы патохимии.– СПб., 2000

•Маршалл В.Д. Клиническая биохимия.– М., 2000

31

Энергетический обмен. Обмен углеводов и липидов

ЗАНЯТИЕ № 12

ТЕМА: ПЕНТОЗОФОСФАТНЫЙ ПУТЬ. РЕГУЛЯЦИЯ ОБМЕНА УГЛЕВОДОВ

Цель: Рассмотреть современные представления о путях и механизмах регуляции обмена углеводов в организме человека. Обратить особое внимание на регуляцию отдельных путей метаболизма, особенности метаболизма углеводов в конкретных тканях и на уровне целого организма. Рассмотреть возможные нарушения углеводного обмена. Оценить биологическое значение пентозофосфатного пути метаболизма глюкозы. Составить представление о возможных причинах нарушения углеводного обмена и последствиях этих нарушений.

ВОПРОСЫ ДЛЯ РАССМОТРЕНИЯ:

1.Аллостерическая регуляция гликолиза и глюконеогенеза в печени.

2.Гормональная регуляция гликолиза, глюконеогенеза и обмена гликогена. Взаимосвязь с ритмом питания.

3.Пути обмена лактата в печени и мышцах. Цикл Кори.

4.Пентозофосфатный путь превращения глюкозы. Биологические функции. Схема процесса. Лимитирующая реакция. Окислительный и неокислительный этапы. Обратимость неокислительной стадии реакции.

5.Особенности обмена глюкозы в разных тканях (эритроциты, мозг, печень, мышцы, жировая ткань).

6.Метаболизм галактозы, фруктозы и лактозы. Наследственные нарушения обмена. Гликогенозы и агликогенозы.

7.Нарушения углеводного обмена. Гипо- и гипергликемия. Инсулин и углеводный обмен. Сахарный диабет.

Вопросы, выделенные курсивом, не рассматриваются на стоматологическом факультете.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА

Заполнить таблицу «Регуляция обмена углеводов гормонами».

32

Энергетический обмен. Обмен углеводов и липидов

Заполнить таблицу «Аллостерические регуляторы гликолиза и глюконеогенеза в печени».

РЕФЕРАТЫ

•Наследственные нарушения обмена углеводов: галактоземия, непереносимость фруктозы, непереносимость дисахаридов, гликогенозы и агликогенозы.

•Гликирование и гликозилирование и связанные с ним патологические состояния.

ЛИТЕРАТУРА

•Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П. Основы патохимии.– СПб., 2000

•Камышников В.С. Справочник по биохимической лабораторной диагностике. Т.2.– Минск, 2000

•Маршалл В.Д. Клиническая биохимия.– М., 2000

33

Энергетический обмен. Обмен углеводов и липидов

ЗАНЯТИЕ № 13

ТЕМА: ХИМИЯ ЛИПИДОВ. ПЕРЕВАРИВАНИЕ И ВСАСЫВАНИЕ ЛИПИДОВ. ЛИПОПРОТЕИНЫ

Цель: Рассмотреть строение и функции основных липидов организма человека; процессы переваривания и всасывания жиров и фосфолипидов; ресинтез жиров в энтероцитах; транспорт экзогенных жиров в составе хиломикронов; современные представления о строении и функциях липопротеинов. Познакомиться с качественными реакциями на холестерин и структурные компоненты фосфолипидов.

КОНТРОЛЬНАЯ РАБОТА: «СТРУКТУРА И БИОЛОГИЧЕСКАЯ РОЛЬ ЛИПИДОВ »

1.Предельные (С4 – C24; для стом. фак – С14, С16, С18,) жирные кислоты, непредельные жирные кислоты (пальмитолеиновая, олеиновая, линолевая, линоленовая, арахидоновая). Обозначение с помощью цифровых символов положения и количества двойных связей в ненасыщенных жирных кислотах.

2.Моно-, ди– и триацилглицеролы.

3.Глицерофосфолипиды (фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилсерин, фосфатидилинозитол).

4.Сфинголипиды (сфингомиелины, цереброзиды, ганглиозиды).

5.Свободный и эстерифицированный холестерин.

6.Желчные и парные желчные кислоты (холевая, дезоксихолевая, хенодезоксихолевая, литохолевая, таурохолевая, гликохолевая).

ВОПРОСЫ ДЛЯ РАССМОТРЕНИЯ НА ЗАНЯТИИ:

1.Липиды. Определение. Классификация. Биологическая роль.

2.Особенности строения и биороль высших жирных кислот (ВЖК) животного происхождения. Эссенциальные жирные кислоты. Биороль.

3.Триацилглицеролы (ТАГ), строение, биороль.

4.Фосфолипиды, особенности строения и физико-химических свойств. Биороль.

5.Сфинголипиды (сфингомиелины, цереброзиды, ганглиозиды). Биороль.

6.Стерины. Холестерин и его эфиры. Биороль.

7.Суточная потребность в липидах. Незаменимые факторы питания, поступающие

ворганизм человека в составе липидов пищи.

8.Переваривание ТАГ пищи панкреатической липазой. Переваривание фосфолипидов, эстерифицированного холестерина.

9.Всасывание продуктов гидролиза жиров в слизистую оболочку кишечника. Образование мицелл.

10.Желчные кислоты, их структура, синтез, биороль. Конъюгация желчных кислот.

11.Ресинтез ТАГ и образование эфиров холестерина в стенке кишечника.

12.Нарушения переваривания и всасывания липидов. Стеаторея.

34

Энергетический обмен. Обмен углеводов и липидов

13.Образование хиломикронов (ХМ) и транспорт экзогенных жиров в лимфу и кровь.

14.Использование экзогенных жиров тканями. Действие липопротеинлипазы на ХМ. Судьба жирных кислот, глицерола и остаточных хиломикронов.

15.Липопротеины (ЛП) плазмы крови. Классификация ЛП по плотности и электрофоретической подвижности. Особенности строения и липидного состава липопротеиновой частицы. Основные аполипопротеины, их функции.

16.Функции ЛП плазмы. Место образования и превращения различных видов ЛП.

17.Дислипопротеинемии. Гиперхиломикронемия, гипертриглицеридемия..

18.Качественные реакции на холестерин. Сущность реакций. Значение. Реакция Либермана-Бурхарда. Техника проведения.

19.Гидролиз лецитина (фосфатидилхолина) и обнаружение продуктов гидролиза. Техника проведения опыта, схема гидролиза.

Вопросы, выделенные курсивом, не рассматриваются на стоматологическом факультете.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

Опыт № 1: Гидролиз лецитина и обнаружение продуктов гидролиза.

Техника выполнения. Навеску лецитина (0,5 г) помещают в пробирку, наливают 10мл 30% раствора NаОН, закрывают пробкой с обратным холодильником и выдерживают 30мин на кипящей водяной бане. Содержимое пробирки охлаждают под проточной водой и анализируют продукты гидролиза:

а) холин обнаруживают по образованию в процессе гидролиза триметиламина, который придает гидролизату запах селедочного рассола.

б) фосфорную кислоту обнаруживают реакцией с молибдатом аммония. К 0,5 мл гидролизата добавляют 1 мл раствора молибдата аммония. Реакционную смесь кипятат. Отмечают появление интенсивного желтого окрашивания раствора, обусловленного образованием фосфомолибдата аммония.

в) непредельные высшие жирные кислоты обнаруживают реакцией с йодом. К 0,5мл гидролизата по каплям добавляют раствор йода. Отмечают обесцвечивание раствора.

г) глицерин обнаруживают по образованию глицерата меди. К 0,5 мл щелочного гидролизата добавляют 0,5 мл 1 % раствора сульфата меди (опытная пробирка). В контрольной пробе смешивают равные объемы 10 % раствора NаОН и раствора сульфата меди. Сравнить окраску растворов в опытной и контрольной пробирках.

В выводе записать схему щелочного гидролиза лецитина.

Опыт № 2: Качественная реакция на холестерин Либермана–

Бурхарда.

Принцип метода. Цветные реакции на холестерин основаны на его дегидратации под действием концентрированной серной кислоты с последующим превращением в

35

Энергетический обмен. Обмен углеводов и липидов

непредельные углеводороды с сопряженными двойными связями. Эти соединения дают окрашенные продукты с серной кислотой и уксусным ангидридом.

Ход определения. Реакцию Либермана–Бурхарда следует проводить параллельно с хлороформным экстрактом головного мозга и с раствором холестерина в хлороформе.

К 1 мл хлороформного экстракта головного мозга (пробирка № 1) или к 1 мл раствора холестерина в хлороформе (пробирка № 2) добавить по 10 капель уксусного ангидрида и по 2капли концентрированной серной кислоты. Растворы перемешать. Жидкость приобретает красную окраску, затем цвет быстро меняется последовательно на красно-фиолетовый, фиолетовый, аметистово-синий, синий и зеленый.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА

Заполнить таблицу.

ЛИТЕРАТУРА

•Васьковский В.Е. Липиды. Соросовский образовательный журнал, 1997, №3, с. 32.

•Камышников В.С. Справочник по клинико–биохимической лабораторной диагностике. Т.2.– Минск: Беларусь, 2000.– 463 с.

•Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Липиды, липопротеиды и атеросклероз.– СПб.: Питер, 1995.– 304 с.

•Свистунова О.И., Титов В.Н. Желчные кислоты крови: патобиохимия и диагностическое значение (обзор литературы). Клиническая лабораторная диагностика, № 1, 1994, стр.15-19.

36

Энергетический обмен. Обмен углеводов и липидов

ЗАНЯТИЕ № 14

ТЕМА: ОБМЕН ЛИПИДОВ 1

Цель: Рассмотреть метаболизм жирных кислот и его регуляцию; биосинтез триацилглицеролов в печени и жировой ткани; регуляцию липогенеза и липолиза; обмен фосфолипидов.

ВОПРОСЫ ДЛЯ РАССМОТРЕНИЯ НА ЗАНЯТИИ:

1.Катаболизм жирных кислот (ЖК), его этапы (β-окисление, ЦТК, митохондриальная дыхательная цепь).

•активация ЖК под действием ацил-КоА-синтетазы.

•транспорт ацил-КоА через внутреннюю мембрану митохондрий (МТХ) с участием карнитина.

•β-окисление ацил-КоА в матриксе МТХ,

•связь β-окисления с циклом трикарбоновых кислот и дыхательной цепью.

2.Особенности окисления ЖК с нечетным количеством атомов углерода.

3.Особенности окисления ненасыщенных ЖК.

4.Подсчет суммарного выхода АТФ при окислении ЖК.

5.Окисление глицерина, его энергетический эффект.

6.Энергетический эффект распада триацилглицеролов.

7.Биосинтез ВЖК.

•образование ацетил-КоА и его транспорт из митохондрий в цитоплазму.

•синтез малонил-КоА. Ацетил-КоА-карбоксилаза, регуляция её активности.

•синтетаза ЖК как многофункциональный белок, локализация в клетке, строение. Ацилпереносящий белок (АПБ). Роль фосфопантотеиновой простетической группы.

•реакции, катализируемые синтетазой ЖК. Синтез бутирил АПБ. Образование пальмитата. Источники водорода для синтеза ЖК.

8.Синтез ЖК из пальмитиновой кислоты. Элонгация с образованием С18 – С24 ЖК.

Образование непредельных ЖК.

9.Регуляция метаболизма ВЖК (β-окисления и биосинтеза ВЖК).

10.Биосинтез ТАГ в жировой ткани и печени. Образование липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП) в печени, транспорт жиров в другие ткани.

11.Мобилизация жира в жировой ткани (липолиз). Триацилглицерол, диацилглицеролмоноацилглицероллипазы. Гормональная регуляция синтеза и мобилизации жиров.

Ожирение.

12.Метаболизм фосфолипидов (ФЛ). Обмен глицерофосфолипидов. Биологическое значение различных фосфолипаз. Биосинтез фосфатидилхолина, фосфатидилэтаноламина, фосфатидилсерина.

13.Обмен сфинголипидов. Синтез церамида и его производных. Катаболизм сфингомиелина и гликосфинголипидов, генетические дефекты энзимов.

37

Энергетический обмен. Обмен углеводов и липидов

14.Значение определения концентрации метаболитов липидного обмена в сыворотке крови. Гиперлипидемия (гиперлипемия) алиментарная и патологическая.

15.Определение уровня общих липидов в сыворотке крови по цветной реакции с сульфофосфованилиновым реактивом. Принцип метода. Ход определения. Норма. Клинико-диагностическое значение.

Вопросы, выделенные курсивом, не рассматриваются на стоматологическом факультете.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

Опыт № 1:Определение общих липидов в сыворотке крови по

цветной реакции с сульфофосфованилиновым реактивом.

Группу общих липидов плазмы (сыворотки крови) составляют нейтральные жиры (триацилглицеролы), фосфолипиды (ФЛ), свободный или неэстерифицированный холестерин (НЭХС), эфиросвязанный холестерин (ЭХС), гликолипиды, неэстерифицированные (свободные) ЖК (НЭЖК). Подавляющее большинство перечисленных соединений (прежде всего ФЛ, ХС, ТАГ) образуют ассоциаты (липидно-белковые комплексы, ЛП) с белками – апопротеинами. Большая часть НЭЖК образует комплексы с альбумином крови. Содержание общих липидов в сыворотке крови здоровых людей составляет 4–8 г/л.

Гиперлипидемия (гиперлипемия) – увеличение концентрации общих липидов плазмы как физиологическое явление может наблюдаться через 1–4 ч после приема пищи. Концентрация липидов в крови изменяется при ряде патологических состояний. Гиперлипемия отмечается у больных сахарным диабетом, при нефротическом синдроме, остром и хроническом гепатитах, атеросклерозе, наследственных гиперлипопротеинемиях, а также других заболеваниях.

Принцип метода. Продукты гидролиза липидов, образующиеся под действием серной кислоты, взаимодействуют с фосфованилиновым реактивом с образованием красного окрашивания. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию общих липидов в сыворотке крови.

Техника выполнения. Реактивы: (1) стандартный раствор (общие липиды 8 г/л) – реактив 1; (2) раствор ванилина (ванилин и кислота ортофосфорная) – реактив 2;

(3) кислота серная концентрированная. Готовят опытную, стандартную и контрольную пробы, как указано в таблице.

38

Энергетический обмен. Обмен углеводов и липидов

Перемешивают и оставляют стоять 50 мин при температуре от 15–25 С. Не позднее чем через 60 мин измеряют оптическую плотность пробы (А1) и стандарта (А2) против контрольного раствора в кювете толщиной 0,5 см при длине волны 510–550 нм.

Расчёт: Соп (г/л) = Сст × А1 /А2

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА

Заполнить таблицу «Метаболизм жирных кислот»

ЛИТЕРАТУРА

•Васьковский В.Е. Липиды. Соросовский образовательный журнал, 1997, №3, с. 32.

•Камышников В.С. Справочник по клинико–биохимической лабораторной диагностике. Т.2.– Минск: Беларусь, 2000.– 463 с.

•Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Липиды, липопротеиды и атеросклероз.– СПб.: Питер, 1995.– 304 с.

39

Энергетический обмен. Обмен углеводов и липидов

ЗАНЯТИЕ № 15

ТЕМА: ОБМЕН ЛИПИДОВ 2

Цель: Рассмотреть биосинтез и катаболизм кетоновых тел; метаболизм холестерина; составить представление о возможных нарушениях обмена липидов и клиникодиагностическом значении определения холестерина в сыворотке крови и кетоновых тел в моче.

ВОПРОСЫ ДЛЯ РАССМОТРЕНИЯ НА ЗАНЯТИИ:

1.Кетоновые тела. Строение и биороль. Синтез ацетоацетата и β-гидроксибутирата в митохондриях печени.

2.Использование кетоновых тел внепеченочными тканями в качестве источника энергии. Энергетическая ценность ацетоацетата и β-гидроксибутирата.

3.Биохимический механизм развития кетонемии и кетонурии. Образование ацетона.

4.Пути поступления, использования и выведения холестерина из организма.

5.Биосинтез холестерина, его этапы. Синтез мевалоната. Синтез сквалена. Циклизация сквалена и образование ланостерола. Превращение ланостерола в холестерин. Локализация процессов в клетке.

6.Регуляция биосинтеза холестерина. Естественные и синтетические ингибиторы гидроксиметилгглутарил-КоА редуктазы.

7.Биосинтез желчных кислот в печени и кишечнике, регуляция синтеза. Энтерогепатическая циркуляция желчных кислот. Конъюгированные желчные кислоты. Роль желчных кислот в поддержании гомеостаза холестерина в организме. Желчнокаменная болезнь.

8.Липопротеины низкой плотности (ЛПНП) и липопротеины высокой плотности (ЛПВП) как транспортные формы холестерина в крови, их роль в обмене холестерина. Атерогенные и антиатерогенные ЛП. Рецепторы ЛПНП.

9.Липидный спектр плазмы крови. Дислипопротеинемии, типы. Гиперхолестеролемия как фактор риска атеросклероза. Ген рецептора ЛПНП: структура и типы мутаций. Биохимические основы лечения и профилактики гиперхолестеролемий.

10.Эйкозаноиды (простагландины, тромбоксаны, простациклины, лейкотриены), биосинтез, строение, номенклатура, биологические функции. Ингибиторы циклооксигеназ I и II и липоксигеназы.

11.Определение концентрации общего холестерина в сыворотке крови энзиматическим колориметрическим методом. Принцип метода. Техника выполнения. Уровень холестерина в сыворотке крови взрослого. Интерпретация полученных данных.

12.Обнаружение кетоновых тел в моче. Техника. Клиническое значение.

Вопросы, выделенные курсивом, не рассматриваются на стоматологическом факультете.

40