- •1. Общая микробиология
- •1.1 Микроскопический (бактериоскопический) метод исследования
- •1.2. Противомикробные мероприятия
- •1.3.Классификация питательных сред
- •1.4.Культуральный метод исследования
- •1.5. Методы выделения чистых культур микроорганизмов
- •1. Метод механического разобщения микроорганизмов:
- •2. Метод заражения чувствительных лабораторных животных (биологический):
- •3. Методы, основанные на избирательной чувствительности микроорганизмов к воздействию внешних факторов:
- •1.6. Определение биохимических свойств микробов
- •1.11. Биологический (экспериментальный) метод исследования
- •1.12. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
- •1.13. Методы генетического анализа микроорганизмов
- •1.14. Методы изучения нормальной микрофлоры
- •2. Частная микробиология
- •2.1. Микробиологическая диагностика пневмококковых инфекций
- •II. Культуральный (бактериологический) метод:
- •2.2. Общие принципы диагностики острых кишечных
- •2.3 Диагностика кишечных эшерихиозов (колиэнтеритов)
- •2.4. Диагностика брюшного тифа, паратифов а и в, сальмонеллезов
- •2.5. Лабораторная диагностика кишечного иерсиниоза
- •2.6. Клебсиеллы. Лабораторная диагоностика склеромы и озены
- •2.7. Лабораторная диагностика холеры
- •2.8. Кампилобактерии. Методы диагностики кампилобактериоза
- •2.9. Диагностика пищевых отравлений бактериальной природы
- •2.10. Лабораторная диагностика газовой гангрены
- •2.11. Лабораторная диагностика столбняка
- •2.12. Лабораторная диагностика ботулизма
- •2.13. Серологическая диагностика сифилиса
- •2.14. Лабораторная диагностика хламидиозов
- •2.15. Микоплазмы, микоплазмозы
- •3. Общая и частная вирусология
- •3.1. Методы культивирования вирусов
- •I. Культуры клеток
- •3.2. Принципы диагностики вирусных инфекций
- •3.3. Лабораторная диагностика вирусных гепатитов
- •3.4. Лабораторная диагностика спиДа
- •4. Другие инфекции
- •4.1. Классификация грибов. Методы диагностики микозов
- •Методы диагностики микозов
- •Лабораторная диагностика кандидомикоза
- •Лабораторная диагностика глубоких микозов,
- •4.2. Возбудители мадуромикоза
- •4.3. Возбудитель пневмоцистоза
- •4.4. Возбудитель донованоза
- •4.5. Возбудитель язвы Бурули
- •4.6. Возбудитель мелиоидоза
- •Лабораторная диагностика
II. Культуральный (бактериологический) метод:
1 этап. Материал (не позднее 1-2 часов с момента забора) засевают на 5% -и кровяной агар, культивируют в эксикаторе со свечой (СО2) 20-24 часа при температуре 37°С;
2 этап. Отбирают подозрительные колонии, дающие а-гемолиз, микроскопируют (окраска по Граму, на капсулу), отсевают в сывороточный бульон;
3 этап. Определяют чистоту культуры (окраска по Граму). Идентификацию проводят по морфологическим, серологическим (р. агглютинации на стекле с поливалентной противокапсульной сывороткой), культуральным, биологическим свойствам. Последние проводят путем посева в среду с оптохином (нет роста), в 10%-й желчный бульон (лизис), внутрибрюшинного заражения мышей (гибель). При необходимости (например, при пневмонии) доказывают этиологическую значимость пневмококка (в частности, определяют КОЕ/мл). Определяют также чувствительность к антибиотикам. Культуральный метод является ведущим методом диагностики, так как он ранний, точный, чувствительный и позволяет выбрать адекватное этиотропное лечение.
III. Серологический метод: определение противокапсульных антител и их динамики в сыворотке крови с помощью РНИФ (с ауто штамма ми), РСК и РИГА (с эталонными штаммами пневмококка). Чаще используют при хронических формах инфекции. Применение метода ограничивается более поздними сроками получения результата и отсутствием готовых диагностикумов.
IV. Биологический метод: внутрибрюшинное заражение белых мышей исследуемым материалом (чаще мокротой). Погибших мышей вскрывают, делают мазки-отпечатки, посевы крови и органов на кровяной агар с последующей идентификацией возбудителя. Метод вспомогательный, ограничивается трудоемкостью, наличием в материале других видов микроорганизмов, патогенных для мышей, низкой чувствительностью мышей к некоторым сероварам пневмококка.
2.2. Общие принципы диагностики острых кишечных
инфекций, вызываемых микробами семейства
энтеробактерий
К ним относятся: эшерихиозы, вызываемые условно-патогенными и патогенными (энтеропатогенными, энтерогеморрагическими, энтероинвазивными и энтеротоксигенными) кишечными палочками, брюшной тиф, паратифы А и Б, сальмонеллезы, дизентерия, кишечные клебсиеллезы и кишечные иерсиниозы. Методы их микробиологической диагностики включают следующие принципы:
1. Микроскопический метод диагностики, как правило, не приемлем, так как патогенные и непатогенные энтеробактерий имеют общие морфологические характеристики.
2. Для диагностики применяют бактериологический и серологический методы. Выбор метода диагностики зависит от клинических проявлений, места локализации возбудителя и фазы патогенеза болезни. Например, при брюшном тифе самым ранним методом диагностики является бактериологическое выделение возбудителя из крови - гемокультура, что соответствует этапу патогенеза -"бактериемия" (первая неделя клинических проявлений болезни). Начиная со второй недели, в организме человека формируется гуморальный иммунный ответ, поэтому в эти сроки возможна диагностика, основанная на обнаружении антител (постановка реакции агглютинации по Видалю, РПГА, латексагглютинации). Начиная с третьей недели заболевания, возбудитель вновь оказывается в кишечнике и может быть обнаружен бактериологически в испражнениях больного - "метод копрокультуры". На 6-8-й неделе болезни, а также в период реконвалесценции, для диагностики бактерионосительства следует использовать как бактериологическое, так и серологическое исследования (многократное исследование копрокультуры, холекультуры, иногда миелокультуры и обнаружение Ви-антител в сыворотке или копрофильтратах).
Бактериологическая диагностика.
1. Забор материала. Характер материала зависит от первичной или вторичной локализации микроба-возбудителя. Если материалом служат испражнения, что чаще всего бывает, то их берут до начала или после суточного перерыва в антибактериальной терапии. Материал лучше забирать ректальной трубкой, тампоном со стерильной пеленки или стерильной пергаментной бумаги, специальным устройством для забора фекалий (ни в коем случае не допуская его контакта с дезинфектантами). Если материалом служит кровь, то забирают 10,0 мл крови из вены локтевого сгиба.
2. Транспортировка материала осуществляется медицинским работником в системе "стекло, металл" в течение не более трех часов после его забора или в консерванте с сопровождающими документами.
3. Питательные среды, используемые для бактериологического исследования, можно подразделить на три группы:
а) среды обогащения, создающие условия преимущественного размножения выделяемого возбудителя и основанные либо на принципе наличия в среде факторов активации роста данного микроба, либо на принципе подавления роста сопутствующих микробов-антагонистов. Первой группе соответствует среда Рапопорт, второй - селенитовая, магниевая, Мюллера, с пенициллином и т.д.;
б) средь/ дифференциально-диагностические - плотные питательные среды, содержащие дифференцирующий углевод - лактозу и индикатор. Кишечные палочки, разлагающие лактозу (лактозоположительные), растут в виде окрашенных колоний в зависимости от типа среды - в малиново-красный и розовый (среда Эндо, Плоскирева) или темно-синий (среда Левина) цвет. Клебсиеллы пневмонии разлагают лактозу в среде с индикатором бромтимоловым синим и образуют колонии желтого цвета, в то время как колонии лактозоотрицательных биоваров формируют колонии цвета среды. Сальмонеллы и шигеллы на средах Эндо, Левина, Плоскирева также не разлагают лактозу и дают бесцветные колонии;
в) среды накопления чистой культуры. Чаще применяется среда Олькеницкого (трехсахарный агар). Она состоит из столбика, скошенной части и включает лактозу, глюкозу и сахарозу, индикатор, реагенты для определения сероводорода и уреазы. Посев производят уколом в столбик и штрихом по поверхности скошенной части. При росте микробов глюкоза лучше разлагается в столбике, лактоза - на скосе, в результате чего дифференцированно меняется цвет среды. При образовании газа - формируются пузырьки и разрывы в среде, при продукции сероводорода - наблюдается почернение по ходу укола, при продукции уреазы - изменение цвета среды на оранжевый.
4. Идентификация выделенных культур основана на определении:
общего для семейства признака - грам- палочки;
наличия капсулы (у клебсиелл);
цвета колоний на чашечных средах;
подвижности (сальмонеллы и эшерихии подвижны, шигеллы и клебсиеллы
неподвижны);
биохимических свойств;
антигенной структуры;
чувствительности к антибактериальным препаратам;
чувствительности к бактериофагам.
Антигенную структуру определяют по предварительному установлению
серогруппы, чаще с монорецепторными адсорбированными сыворотками,
а затем серовара тоже с адсорбированными сыворотками.
Серологическая диагностика: начинается с получения сывороток от
больных. В них обнаруживаются антитела в реакции агглютинации,
гемагглютинации, латекс-агглютинации или РСК. Диагноз основан на
обнаружении антител в диагностическом титре или нарастании титра антител
в динамике болезни.