шпоры по паразитологии

палочки.Приготовленные препараты, не накрывая покровными стеклами, исследуют под малым увеличением микроскопа (X 10, Х8).По окончании исследования стекла погрузить в дезинфицирующий раствор.

Толстый мазок по Като

Выявляются яйца всех видов гельминтов, однако с целью обнаружения яиц карликового цепня (яйца прозрачные) или описторха (мелкие яйца) лаборант должен быть особо внимательным, чтобы их не пропустить.

На листе оконного стекла разложить предметные стекла и под них поместить номерки.Деревянной палочкой набрать кусочек кала размером с горошину (100 мг) и поместить на предметное стекло в центральной его части.Из банки достать пинцетом обработанную по Като пластинку целлофана и наложить на пробу кала на предметном стекле. Резиновой пробкой осторожно придавить целлофан так, чтобы кал

равномерно распределился под ним, не вытекая из края пластинки Препарат оставить для просветления на 60 мин (в жаркую погоду — на 30—40 мин). Затем микроскопировать.Примечание: а) причиной непрозрачности препарата могут быть толстый слой фекалий, плохая обработка пластинки в смеси Като, недостаточный срок выдержки препарата под целлофаномб) длительное просветление глицрином и чрезмерное высыхание препарата также затрудняют обнаружение яиц.

Метод КалантарянНедостатками метода являются дефицит нитрата натрия, а также то, что яйца трематод, онкосферы тениид не всплывают и остаются в осадке. При длительном (более 1—2 ,ч) выдерживании фекалий в растворе яйца некоторых гельминтов начинают набухать и оседают, исчезая из поверхностной пленки.В стеклянную банку или стакан деревянной палочкой внести 2,5—5 г фекалий.Банку поместить в эмалированную кювету, под нее положить листок бумаги с номером.Постепенно приливая насыщенный раствор нитрата натрия, тщательно

размешать фекалии. Уровень жидкости довести почти доверху.Бумажной полоской, согнутой в виде совка, удалить всплывшие на поверхность крупные частицы.На банку наложить предметное стекло и пипеткой добавлять раствор нитрата натрия, пока нижняя поверхность предметного стекла не соприкоснется со слоем жидкости. После этого стекло сдвинуть так, чтобы оно полностью закрывало банку. Под стеклом не должно быть пузырьков.Оставить для отстаивания на 20—30 мин, желательно в вытяжном шкафу.По окончании отстаивания предметное стекло осторожно, но быстро снять, переворачивая влажной поверхностью кверху. Во влажном слое содержатся яйца гельминтов, всплывшие в поверхностную пленку.В препарат для предупреждения высыхания добавляют пипеткой 2—3 капли водного раствора глицерина, микроскопируют.Примечание: во избежание загрязнения столика микроскопа влажным стеклом ширина его должна быть больше, чем диаметр отверстия банки. Это способствует и более полному снятию яиц из поверхностной пленки.

Приготовление толстой капли крови

Толстую каплю в отличие от мазка крови не фиксируют. Под влиянием водного раствора краски нефиксированные эритроциты гемолизируются, препарат становится прозрачным. Это ускоряет и облегчает нахождение паразитов, так как в одном поле зрения можно исследовать гораздо больший объем крови, чем в мазке.Несколько чистых предметных стекол положить на стол.Ватой, смоченной 70 % этанолом, протереть концевую фалангу IV пальца левой руки пациент.После высыхания этанола проколоть кожу пальца с ладонной стороны копьем, ставя плоскость копья поперечно к линиям кожного рисунка.Выступившую первую каплю крови снять сухой ватой.Нажимая на боковые поверхности пальца по направлению к месту прокола (палец пациента при этом держат опущенным) выдавить крупную каплю крови.Предметным стеклом, держа его за боковые ребра, прикоснуться и снять выступившую каплю крови, которую располагают отступя на 2—

2,5 см от узкого края стекла.Круговыми движениями стекла размазать каплю, доводя ее размер до 1,5 см в диаметре.Точно так же приготовить толстую каплю на другой половине стекла. Расстояние между каплями должно быть не менее2 см.В промежутке между каплями нанести на стекло полоску крови, на которой после высушивания написать простым карандашом номер по списку или фамилию пациента. Делать подобную надпись на поверхности толстой капли недопустимо, так как это портит препарат и затруднит микроскопическое исследование.Стекла в горизонтальном положении положить на стол (в кювету) для просушивания, предохраняя от попадания прямых солнечных лучей, пыли и мух.Ранку на пальце обработать ватой, смоченной этанолом.

Окраска толстой капли крови по Романовскому

Предметные стекла с сухими толстыми каплями крови положить на подставку над кюветой препаратами кверху. Стекла не должны соприкасаться.В стакан налить дистиллированную воду или, лучше, фосфатный буферный раствор и добавить пипеткой краску

Романовского из расчета 1 каплю на 1 мл воды.Пипеткой нанести разведенный рабочий раствор краски так, чтобы она полностью покрыла препараты без образования пузырьков.Оставить краску на препаратах на 30 мин, следя за тем, чтобы краска не стекла с препаратов, добавляя ее при необходимости пипеткой.По окончании процедуры каждое стекло, не сливая с него краски, осторожно промыть слабой струей воды, например из стакана (сильная струя воды может смыть толстую каплю), до тех пор, пока промывная вода не станет бесцветной.Примечание. Если сначала слить краску, а затеи промывать, то образовавшаяся пленка краски может испортить препарат или послужить причиной диагностической ошибки.

Предметные стекла поместить в подставку для просушки в вертикальном или наклонном положении, предохраняя от попадания пыли и солнечных лучей.После просушивания препараты исследовать под микроскопом с масляной иммерсией. Оценить качество толстой капли и

ее окраски.Совместно с преподавателем провести микроскопию готовых препаратов малярийных плазмодиев в мазке и толстой капле крови.

Взятие и исследование соскоба кожи для обнаружения чесоточных клещей

На коже пациента найти места, поражения чесоточными клещами и протереть место отбора соскоба ватой, смоченной 70 % эталоном.

Метод извлечения клеща иглой

Под контролем лупы иглой вскрыть слепой конец чесоточного хода на месте буроватого точечного возвышения.Острие иглы продвинуть по направлению чесоточного хода, пытаясь при этом вывести наружу и извлечь клеща, который своими присосками прикрепляется к игле.Клеща перенести на предметное стекло в каплю 20 % раствора гидроксида натрия, накрыть покровным стеклом и рассмотреть.

Метод тонких срезов

Острым лезвием или скальпелем срезать участок рогового слоя эпидермиса с чесоточным, ходом или пузырьком.Срез перенести на предметное стекло в каплю 20 % раствора гидроксида натрия, через 5 мин рассмотреть препарат под микроскопом (можно обнаружить клеща, яйца, оболочки или экскременты клеща).

Метод соскоба патологического материала

Лезвием, скальпелем или ложкой Фолькмана соскабливают чесоточный элемент.Содержимое переносят на предметное стекло в каплю глицерина или 20 % раствора гидроксида натрия.Накрывают покровным стеклом и оставляют на 10 мин, затем микроскопируют.

Метод послойного соскоба (глубокого соскоба кожи по Н.Е.Соловьеву)

Глазной ложкой с заостренными краями поочередно с 3—4 однородных свежих элементов делают соскоб. Соскабливают легкими

движениями, послойно, продолжая операцию и после появления капли крови.Материал переносят на предметное стекло в каплю 20 % раствора гидроксида натрия с глицерином в равных объемах.Накрывают покровным стеклом, слегка прижимая и подвигая вправо и влево.Микроскопируют при опущенном конденсоре микроскопа (Х10, Х8) через 10—20 мин, а при отрицательном результате еще через 2, 4, 24 ч после приготовления.

Метод «щелочного препарирования кожи»

10 % раствор гидроксида натрия (калия) наносят на чесоточные высыпания на коже на 2 мин.Мацерированный эпидермис соскабливают скальпелем, переносят на предметное стекло в каплю воды и исследуют под микроскопом.

Метод исследования с молочной кислотой

Каплю молочной кислоты наносят на чесоточный ход, пузырек, папулу, корочку и т. д. на 5 мин.Разрыхленный эпидермис соскабливают

острой глазной ложкой до появления крови с захватом участка на границе ее здоровой кожей.Материал переносят на предметное стекло в каплю молочной кислоты, накрывают покровным стеклом, изучают.Строение клещей, обнаруженных любым из указанных методов, изучают при среднем увеличении микроскопа (X10, X40).

Взятие и исследование соскоба кожи для обнаружения клещей-железниц

Вату смочить очищенным керосином и наложить тонким слоем на участок кожи, где предполагается наличие клещей (прежде всего на высыпные элементы)Через 3—5 минут снять вату и ложкой Фолькмана произвести соскабливание обследуемого участка кожи и высыпных элементов.Материал перенести на предметное стекло, добавить в сколько капель керосина для просветления.Через 2—3 минуты предметное стекло с препаратом перенести на столик микроскопа и исследовать.Примечание: под влиянием керосина просветляется препарат, сам же

клещ не просветляется, что облегчает его обнаружение.

Окраска мазка раствором Люголя

Цисты окрашиваются в золотисто-коричневый цвет. На фоне цитоплазмы заметны ядра, видны их строения и число. Хорошо виден гликоген, окрашивающийся в разные оттенки коричневого цвета. При окраске раствором Люголя вегетативные формы погибают и определяются с трудом.

На предметное стекло нанести по 1 – 2 капли раствора Люголя в двух местахДеревянной палочкой набрать фекалии каждый раз из дру­гой части пробы и растереть в приготовленных каплях на пред­метном стекле до получения равномерной эмульсии.Препараты накрыть покровными стеклами и поочередно микроскопировать при среднем увеличении.По окончании работы предметные стекла с мазками поместить в посуду с дезинфицирующим раствором, убрать рабочее место и вымыть руки.