- •Руководство для студентов к практическим занятиям по микробиологии
- •Этапы приготовления препарата
- •Алгоритм приготовления мазка
- •Способ грама
- •Правила иммерсионной микроскопии
- •Диагностика туберкулеза легких бактериоскопическим методом
- •Метод циля-нильсена (инструкция 1999год)
- •Метод циля-нильсена
- •Обнаружение капсул по методу бурри
- •Окраска по методу ожешко
- •Метод раздавленной капли
- •Метод висячей капли
- •2009 Год
Обнаружение капсул по методу бурри
Смешать на предметном стекле немного культуры и каплю туши, разведенной 1:10 (рис. № 6)
Ребром шлифовального стекла сделать тонкий мазок, также как мазок крови: каплю туши наносят на предметное стекло на расстояние одной трети от левого края. В эту каплю бак. петлей вносят культуру. Затем краем специально отшлифованного стекла, наклонив его под углом 45О, прикасаются к капле туши с культурой. Прижимая отшлифованное стекло к предметному продвигают его вперед. Мазок заканчивается «метелочкой»
Сбросить шлифовальное стекло в дез. средство
Высушить на воздухе
Бактериоскопировать (рис. № 7)
ОБНАРУЖЕНИЕ КАПСУЛ ПО МЕТОДУ БУРРИ-ГИНСА
Приготовить мазок на предметном стекле по методу Бурри
Высушить на воздухе
Фиксировать химическим способом: погружение стекла в емкость со спиртом или сулемой – 10 мин, или со смесью Никифорова (спирт и эфир 1:1) – 15-20 мин
Осторожно промыть водой
На мазок нанести фуксин Пфейффера – 3-5 мин
Промыть Н2О
Высушить на воздухе
Микроскопия с иммерсией.
Внимание! Фильтровальной бумагой не пользоваться, чтобы не повредить препарат.
Препарат по Бурри – Гинсу под микроскопом: фон черный, клетки бактерий красные, капсулы неокрашенные (красители не воспринимают) (рис. № 8).
Рис. №7. Окраска по Бурри и Бурри-Гинсу
Рис. №8. Капсула у Klebsiella pneumoniae
ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №4
Выявление спор по методу Ожешко.
Студент должен знать:
- классификацию микроорганизмов,
- строение, состав и значение спор,
- процесс спорообразования,
- примеры споровых микробов,
- классификация бактерий по расположению спор,
- методы выявления спор,
- особенности окраски по методу Ожешко, красители и реактивы
- цель применения и сущность метода,
- цель обработки препарата кислотами.
Студент должен уметь:
- выявление спор у бактерий методом Ожешко,
-микроскопия окрашенных препаратов с использованием иммерсионной системы,
- соблюдение мер безопасной работы с живыми культурами микробов,
- обработка рабочего места и рук дез. веществами.
Этапы самостоятельной аудиторной работы:
Подготовить препарат из культуры и окрасить его по методу Ожешко
Препараты, подготовленные и демонстрационные, промикроскопировать с иммерсией
Обработать рабочие места и руки
Зарисовать результаты микроскопирования и записать алгоритм метода в дневник
Окраска по методу ожешко
На высушенный мазок (нефиксированный!) + несколько капель 0,5% НCl, держать над пламенем спиртовки до образования паров
Высушивают и фиксируют физическим способом
Окрашивают по методу Циля-Нильсена:
На фиксированный препарат + фильтровальная бумага + фуксин Циля. Подогреваем до отхождения паров + краситель (2 раза)
Н2О
5% Н2SО4 (погружая 2-3 раза)
Н2О
Метиленовый синий 1 % - 3-5 мин
Н2О
Микроскопия с иммерсией
Метод Ожешко сходен с методом Циля-Нильсена, но отличается использованием раствора соляной кислоты в качестве протравы, разрыхляющей оболочку споры, которая плохо воспринимает красители.
Кислотоустойчивые споры окрашиваются в розово-красный, а бактериальная клетка в голубой цвет (рис. № 9).
Рис. №9. Споры у Bacillus subtilis
ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №5
Определение подвижности микроорганизмов
методами нативных препаратов.
Студент должен знать:
- строение, состав и значение жгутиков,
- классификация бактерий по расположению жгутиков,
- примеры жгутиковых микробов,
- факторы, влияющие на скорость движения микробов,
- методы определения подвижности микробов,
- особенности темнопольной микроскопии,
- принцип строения влажной камеры, ее предназначение,
- особенности культур, используемых в данных методах.
Студент должен уметь:
- техника микроскопии нативных неокрашенных препаратов в темном поле,
- выявление подвижности микроорганизмов,
- методика приготовления висячей капли,
- методика приготовления раздавленной капли,
- соблюдение мер безопасной работы с живыми культурами микробов,
- обработка рабочего места и рук дез. веществами.
Этапы самостоятельной аудиторной работы:
Подготовить препараты висячая и раздавленная капли из культуры, выращенной на жидкой питательной среде
Препараты бактериоскопировать в темнопольной микроскопии
Обработать рабочие места и руки
Записать результаты микроскопирования и алгоритмы методов в дневник