- •Минобрнауки россии
- •Введение
- •Правила работы и поведения в лаборатории
- •Список необходимого оборудования
- •Порядок выполнения работ и оформления лабораторного журнала
- •Тема 1. Техника микроскопирования (1 ч)
- •Тема 2. Приготовление препаратов микроорганизмов прижизненное изучение микроорганизмов (1 ч)
- •Тема 3. Питательные среды, их приготовление, разливка. Получение элективных культур (1 ч)
- •Тема 4. Экология микроорганизмов. Основы санитарно-бактериологического анализа
- •1000 Л – х микробов
- •Критерии для санитарной оценки воздуха жилых помещений (число микроорганизмов в 1 м3 воздуха) по а.И.Шафиру
- •Тема 5. Получение чистых культур. Изучение особенностей микроорганизмов с целью их идентификации (4 ч)
- •Обнаружение волютина
- •Обнаружение гликогена и гранулезы
- •Тема 6. Изучение ветвящихся и образующих плодовые тела форм бактерий методом элективных культур
- •Тема 7. Трансформация микроорганизмами соединений азота
- •Изучение культуры
- •Закладка элективной культуры азотобактера
- •Изучение культуры
- •Закладка элективных культур первой и второй фаз нитрификации
- •Изучение первой фазы нитрификации
- •Изучение второй фазы нитрификации
- •Закладка элективной культуры
- •Изучение культуры
- •Тема 8. Участие микроорганизмов в круговороте углерода (3 ч)
- •Закладка элективной культуры
- •Изучение культуры
- •Закладка элективной культуры
- •Закладка элективной культуры тионовых серобактерий
- •Закладка элективной культуры десульфатирующих бактерий
- •Изучение культур
- •Рецепты некоторых красителей, индикаторов и растворов
- •Литература
Список необходимого оборудования
Набор красителей и реактивов для окраски препаратов.
Стекла предметные.
Стекла покровные.
Стекла с лунками.
Штатив под пробирки.
Петля бактериальная.
Шпатели стеклянные и (или) металлические.
Банка с ватой.
Пипетки градуированные на 1, 5, 10 мл.
Пипетки пастеровские.
Пинцет, ножницы, скальпель.
Банка с дезинфицирующим раствором для отработанных предметных стекол и пипеток.
Банка с дезинфицирующим раствором для обработки рук.
Микроскоп с осветителем.
Лупа х5.
Масленка с иммерсионным маслом.
Фильтровальная бумага.
Спиртовая или газовая горелка.
Установка для окраски препаратов: промывалка, лоток с мостиком.
Песочные часы на 1 и 2 минуты.
Стерильные пробирки.
Баллоны резиновые.
Карандаш по стеклу.
Порядок выполнения работ и оформления лабораторного журнала
Экспериментальная работа в лаборатории предваряется самостоятельным изучением соответствующего теоретического материала.
В ходе домашней подготовки в лабораторном журнале выполняются конспекты необходимых методик.
Время лабораторной работы должно быть использовано на освоение практических методов исследования объектов.
По результатам работы студент оформляет отчет в лабораторном журнале. Отчет выполняется в следующем порядке:
тема;
конспект необходимых методик;
список реактивов и оборудования;
краткое описание хода работы;
рисунки препаратов;
обработка данных в виде схем и заполненных таблиц;
выводы;
литература.
Тема 1. Техника микроскопирования (1 ч)
Работа 1. Устройство и работа микроскопа
Биологические микроскопы «Биолам Р-11» - «Биолам Р-17» (рабочие), «Биолам С-13» (студенческие), «Биолам Д-11» - «Биолам Д-13» (дорожные) предназначены для исследования прозрачных препаратов в проходящем свете в светлом поле при учебных и лабораторных работах.
Рис. 1. Микроскоп «Биолам РIV4.2»:
1 – основание микроскопа; 2 – коробка с механизмом микрометрической фокусировки; 3 – микрометрический винт; 4 – предметный столик; 5, 6 – винты для перемещения столика; 7 – тубусодержатель; 8 – макрометрический винт; 9 – головка; 10 – насадка монокулярная (тубус с окуляром); 11 – винт для крепления насадки; 12 – револьвер с объективами; 13 – винт, фокусирующий револьвер относительно оси тубуса; 14, 15 – кронштейн кондерсора и его рукоятка; 16 – конденсор с ирисовой диафрагмой; 17 – винт для крепления конденсора; 18 – дополнительная линза; 19 – зеркало
В микроскопах различают две части – механическую и оптическую (рис. 1).
К механической части относятся штатив с предметным столиком и тубус.
Оптическая часть включает две системы: осветительную (зеркало, конденсор с ирисовой апертурной диафрагмой и откидной линзой) и наблюдательную (объектив и окуляр).
Зеркало при больших увеличениях повернуто к свету плоской стороной.
Конденсор состоит из двух линз, которые собирают параллельные лучи света, отраженные от зеркала, в пучок в плоскости препарата. Ирисовая диафрагма предназначена для регулирования интенсивности освещения.
Объектив – система линз в металлической оправе. Увеличение зависит от кривизны фронтальной линзы. Чем больше кривизна фронтальной линзы, тем больше увеличение. Коррекционные линзы объектива компенсируют искажения изображения различного характера.
Увеличение микроскопа определяется произведением увеличений объектива и окуляра. Наибольшее увеличение: 15 х 90 = 1350 раз.
Отчетливость изображения определяется разрешающей способностью. Разрешающая способность микроскопа – это минимальное расстояние между двумя точками наблюдаемого объекта, при котором они не сливаются в одну, а видны раздельно. Предел разрешения светового микроскопа – 0,2 мкм. Повысить разрешающую способность можно двумя путями: либо освещая объект более короткими лучами света (УФЛ), либо увеличивая показатель преломления среды, граничащей с линзой до показателя преломления стекла – при использовании иммерсионных систем.
Работа 2. Правила работы с иммерсионной системой.
Микроскопирование препарата дрожжевых клеток
При использовании иммерсионного (маслянопогруженного) объектива (МИ-90; ОИ-90) достигается увеличение в 900-1350 раз. При этом на препарат наносят кедровое масло, показатель преломления которого близок к показателю преломления стекла, и между конденсором, стеклом и фронтальной линзой устанавливается гомогенная среда.
Ход работы
Установить оптимальную освещенность поля, пользуясь осветительным прибором и объективом малого увеличения. Конденсор поднят до упора, ирисовая диафрагма открыта.
Установить препарат и рассмотреть его под объективом сухой системы.
Прикрыть диафрагму до минимума. Приподнять объектив, сменить его на иммерсионный объектив и нанести каплю кедрового масла на препарат.
Погрузить в масло фронтальную линзу объектива, глядя на препарат сбоку.
Глядя в окуляр, вращать макровинт на себя до появления объекта в поле зрения.
Уточнить фокус микровинтом.
Изучить и зарисовать препарат.
По окончании работы аккуратно снять иммерсионное масло салфеткой, смоченной в бензине.
Для использования иммерсионной системы в полную силу каплю кедрового масла наносят и на верхнюю линзу конденсора.
Работа 3. Микроскопия в темном поле.
Знакомство с конденсором ОИ-13
Метод основан на освещении объекта косыми лучами света, которые не попадают в объектив, и поэтому поле зрения выглядит черным. Детали препарата частично отражают лучи и становятся видимыми, даже если их диаметр меньше разрешающей способности объектива.
Рис. 2. Схема и рисунок конденсора ОИ-13
Сферическое зеркало 1 и линза-кардиоид 2 склеены и вставлены в оправу 3 конденсора ОИ-13 (рис. 2). Оправа ввернута в цилиндр 4, укрепленный на кольце внутри корпуса 5 конденсора. Конденсор снабжен пружинящим упором и двумя центрировочными винтами 6.
Ход работы
Настроить освещение, пользуясь объективом малого увеличения.
Установить конденсор темного поля и закрепить стопорным винтом.
Нанести на верхнюю линзу конденсора иммерсионную жидкость.
Установить препарат на предметном столике. Толщина предметного стекла до 1,2 мм.
Поднять конденсор до соприкосновения иммерсионной жидкости с предметным стеклом.
Поместить в выходной зрачок объектива х90 диафрагму, снижающую апертуру до 0,85.
Сфокусировать микроскоп на объект с эффектом темного поля.
Перемещением конденсора добиться минимального размера освещенного пятна.
С помощью винтов 6 привести центр зоны с темнопольным эффектом в центр поля микроскопа.
Включить объектив с иммерсией и провести наблюдение.