3 курс / Фармакология / Диссертация_Горбунова_Ю_В_Психотропная_и_нейропротективная_активность

131

Таким образом, курсовое 14-ти дневное введение соединения VMA-10- 18 животным, с хроническим НМК, приводило к улучшению координации движений, мышечной силы, мелкой моторики и сенсорной чувствительности,

по сравнению с показателями группы контроль-ишемия и сопоставимы с показателями животных, получавших глиатилин.

Влияние курсового введения соединения VMA-10-18 на поведение животных с ХНМК в тесте «Принудительного плавания по Порсольту».

Возникновение депрессии у больных с цереброваскулярными заболеваниями считается неврологической проблемой и встречается более,

чем у 20% пациентов, перенесших острые или хронические НМК.

Современные принципы лечения тревожно-депрессивных расстройств при хронической ишемии головного мозга включают в себя большой спектр медикаментозных препаратов, таких, как нейрометаболические и нейпропротективные средства, антидепрессанты и транквилизаторы. Но,

несмотря на многообразие используемых препаратов в лечении аффективных расстройств при ХНМК ни один из этих препаратов полностью не удовлетворяет требованиям врачей и пациентов. Поэтому разработка соединения для лечения и профилактики ХНМК, чьим дополнительным

(плеойтропным) эффектом будет уменьшение тревожно-депрессивных расстройств, актуальна и перспективна. При изучении нейропсихотропных эффектов соединения VMA-10-18 было установлено, что оно обладает антидепрессивными свойствами, поэтому мы посчитали целесообразным изучить антидепрессивное действие у животных с ХНМК, для чего и было оценено поведение животных в тесте «Принудительного плавания по Порсольту».

У животных с ХНМК, получавших 2% крахмальный гель, на 7 и 14 дни

«лечения» в тесте «Порсольт» были отмечены признаки тревожно-

депрессивного поведения (Таблица 56), о чем свидетельствовало увеличение

132

времени иммобилизации, снижение времени активного плавания и количества совершенных животными прыжков. Курсовое введение соединения VMA-10- 18 способствовало уменьшению времени иммобилизации, при этом животные данной группы выполняли большее количество прыжков, что свидетельствует об антидепрессивном действии у соединения VMA-10-18. Препарат сравнения глиатилин не влиял на показатели животных в тесте «Принудительного плавания по Порсольту».

Таблица 56 - Влияние соединения VMA-10-18 на поведение животных в тесте «Принудительного плавания по Порсольту» у животных с ХНМК

Примечание: *- р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю ЛО группы; # - р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю группы контроль-ишемия (критерий Дана).

Таким образом, при моделировании ХНМК у животных наблюдались признаки депрессивных наслоений (сокращение латентного периода двигательной активности, увеличение времени иммобилизации, уменьшение времени активного плавания и количества совершенных прыжков). При курсовом применении соединение VMA-10-18 оказывало антидепрессивное действие, вызывая статистически значимые изменения специфических показателей: уменьшение продолжительности иммобилизации, повышение количества прыжков. Препарат сравнения глиатилин не оказывал значимого влияния на животных в тесте принудительного плавания по Порсольту.

Выявленный антидепрессивный эффект у соединения VMA-10-18 в условиях ишемии и расширяет терапевтический потенциал его применения у больных с НМК, имеющих тревожно-депрессивные расстройства.

133

Оценка когнитивной функции в тестах УРПИ и ТЭИ у животных с ХНМК, получавших VMA-10-18 и глиатилин

НМК сопряжены с ухудшением когнитивных функций, в частности затруднениями формирования памятного следа и его воспроизведения. Для изучения сохранности памятного следа были использованы тесты УРПИ и ТЭИ, в которых обучение (формирование памятного следа) осуществляли на

7 и 14 дни после формирования ХНМК до введения исследуемых веществ.

В результате обучения и первого тестирования установлено, что животные с ХНМК чаще и быстрее, после помещения в установку заходили в темный отсек (УРПИ), а также значимо дольше по времени решали задачу экстраполяционного избавления (ТЭИ), что свидетельствует о снижении когнитивных функций у стресированных животных.

Через 21 и 28 дней после моделирования ХНМК (на 7 и 14 день после введения соединения VMA-10-18 или препарат сравнения) животные,

получавшие соединение VMA-10-18, в тесте УРПИ – совершали меньшее количество заходов в темный отсек, при этом у животных зашедших в темный отсек латентный период захода был значительно больше, чем у животных группы негативного контроля (Таблица 57).

Таблица 57 - Влияние соединения VMA-10-18 на поведение в тесте «Условная реакция пассивного избегания» животных с ХНМК

Примечание: ЛП захода – латентный период захода животного в темный отсек в тесте УРПИ (с); *- р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю ЛО группы; # - р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю группы контроль-ишемия (критерий Дана).

134

В тесте ТЭИ животные, получавшие соединение VMA-10-18, быстрее решали задачу экстраполяционного избавления, что свидетельствует о сохранении памятного следа у животных с экспериментальным НМК,

получавших соединение VMA-10-18 (Таблица 58). Таким образом,

представленные данные свидетельствуют о том, что соединение VMA-10-18 у

животных с ХНМК улучшало когнитивные функции. Для уточнения и расширения данных о влиянии его на обучение и память было проведено исследование в тесте «Барнс».

Таблица 58 – Влияние соединения VMA-10-18 на поведение в «тесте экстраполяционного избавления» животных с ХНМК

Примечание: ЛП - латентный период подныривания; # - р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю группы контроль-ишемия (критерий Дана).

Влияние курсового введения соединения VMA-10-18 на формирование референтной пространственной памяти животных с хроническим НМК в тесте Барнс

Референтную пространственную память животных с ХНМК исследовали в лабиринте Барнс на 14 день после моделирования ишемии.

Животные группы контроль-ишемия и группы ЛО получали за 60 мин. до теста 2% крахмальный гель, опытные группы – соединение VMA-10-18 или препарат сравнения. На 14-й и 15-й день проводили обучение в тесте и далее на 21-й и 28-й день (на 7 и 14 день лечения) воспроизведение теста.

135

Рисунок 7. Количество ошибок, совершенных животными с ХНМК в тесте Барнс (через 21 и 28 дней после моделирования ХНМК), получавших с 15 по 28 день соединение VMA-10-18

Примечание: *- р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю ЛО группы; # - р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю группы контроль-ишемия (критерий Дана).

При тестировании (Рисунок 7) через 7 и 14 дней после введения веществ

(что соответствует 21-му и 28-му дню течения ХНМК), животные группы контроль-ишемия совершали большее число ошибок референтной

(долговременной) памяти по сравнению с ЛО, что может свидетельствовать о большем ишемическом повреждении головного мозга, что проявлялось в ослаблении у них внимания, зрительно-пространственной ориентации.

Напротив, при курсовом применении соединение VMA-10-18 у крыс с НМК уменьшало выраженность когнитивных нарушений, что подтверждалось в меньшем количестве ошибок и лучшей пространственной ориентации животных в лабиринте по сравнению с показателями крыс, получавших 2%

крахмальный гель.

5.2.3. Изучение влияния курсового введения соединения VMA-10-18 на уровень кровотока в сонных артериях и в проекции средней мозговой

артерии

Степень тяжести неврологических нарушений в условиях церебральной ишемии в значительной степени зависит от кровообращения мозга. Поэтому мозговой кровоток (МК) можно расценивать как интегральный показатель,

136

снижение уровня которого коррелирует с выраженностью психоневрологических отклонений.

Для нормальной работы головного мозга требуется большое количество энергии. Питательные вещества и кислород доставляются в клетки нервной ткани с кровотоком, который поступает через четыре мощные магистральные артерии: две сонные и две позвоночные. У основания мозга ветви этих сосудов образуют замкнутый круг, названный виллизиевым. Значительный стеноз сонных артерий снижает объем поступающей крови к головному мозгу, и,

вследствие этого, доставку кислорода и питательных веществ.

На первом этапе была проведена оценка сохранности кровотока в сонных артериях у крыс с ХНМК. Исходные показатели кровотока по ОСА у крыс были сопоставимы, во время проведения операции по моделированию ХНМК мы добивались снижения уровня кровотока по ОСА в среднем на 50-

60%, а в головном мозге (в проекции средней мозговой артерии) – на 40-45%

от изначальных значений (Рисунок 8).

Рисунок 8. Уровень кровотока в общих сонных артерий у животных с ХМНК

Примечание: *- р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю ЛО группы (критерий Дана).

Через 28 дней после моделирования ХНМК было отмечено, что уровень кровотока в ОСА у крыс группы контроль-ишемия в среднем оставался ниже на 33-36%, чем у ЛО животных. У животных, получавших в течение 14 дней

137

соединение VMA-10-18, кровоток в ОСА был выше, чем у животных группы контроль-ишемия, но эти различия не достигали статистической значимости.

При оценке уровня МК установлено, что у животных с хроническим НМК он был на 34% ниже, чем у ЛО животных (Рисунок 9). Курсовое 14-ти дневное введение соединения VMA-10-18 улучшало мозговое кровообращение у крыс, повышая его уровень на 20-25% по сравнению с животными с ХНМК, получавшими 2% крахмальный гель.

Рисунок 9. Уровень МК в проекции средней мозговой артерий у животных с ХНМК

Примечание: * - р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю ЛО группы; # - р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю группы контроль-ишемия (критерий Дана).

Введение соединения VMA-10-18, а также препарата сравнения глиатилина не оказывало значимого влияния на уровень МК в проекции средней мозговой артерии крыс с ХНМК.

5.2.4. Изучение влияния курсового введения наиболее соединения VMA- 10-18 на функциональное состояние эндотелия крыс с ХНМК

Литературные данные последних лет, со всей очевидностью,

свидетельствуют о том, что эндотелиальная дисфункция (ЭД) лежит в основе цереброваскулярной патологии [Рябченко А.Ю., 2014]. Эндотелий играет ключевую роль в регулировании сосудистого тонуса за счет продукции вазоактивных веществ, наиболее важным из которых является оксид азота –

«маэстро», управляющий продукцией всех эндотелиальных факторов. ЭД

138

проявляется в первую очередь нарушением эндотелиозависимой вазодилатации, которую в условиях эксперимента, возможно оценить по степени изменения показателей мозгового кровотока при введении модификаторов синтеза эндогенного оксида азота.

Поэтому изучение функционального состояния эндотелиальной системы мозговых сосудов в постишемический период у животных, курсом принимавших соединение VMA-10-18, позволит оценить один из возможных

аспектов его церебропротекторного действия.

Вазодилатирующая функция эндотелия была оценена в условиях

модификации синтеза эндогенного NO при введении ацетилхолина

(активатора eNOS) и нитро-L-аргинина (ингибитора eNOS).

В ходе исследования было установлено, что у животных с ХНМК наблюдалась статистически менее значимая реакция на введение ацетилхолина (Рисунок 10А) и нитро-L-аргинина (Рисунок 10Б), чем у ЛО животных, тогда как реакция эндотелий независимая на нитроглицерин во

всех экспериментальных группах практически не отличалась.

А Б

Рисунок 10. Изменение мозгового кровотока (%) в проекции средней мозговой артерии при введении ацетилхолина (А), нитро-L-аргинина (Б) у животных с ХНМК

Примечание: *- р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю ЛО группы; # - р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю группы контроль-ишемия (критерий Дана).

Введение ацетилхолина животным с ХНМК, получавших соединение VMA- 10-18, вызывало увеличение кровотока на 157%, чем у группы контроль-ишемия.

(Рисунок 10А). У животных группы препарата сравнения – глиатилин на 7,4%.

139

Блокада синтеза оксида азота введением нитро-L-аргинина данным животным способствовала более выраженному снижению церебрального кровотока по сравнению с животными с ХНМК без лечения (Рисунок 10Б). Полученные результаты свидетельствуют о том, что под действием соединения VMA-10-18 у

животных с ХНМК увеличивается стимулируемая и базальная продукция оксида азота.

Таким образом, по влиянию на функциональное состояние эндотелия мозговых сосудов более выраженным действием обладает соединение VMA-10-18.

5.2.5. Изучение влияния соединения VMA-10-18 на утилизацию глюкозы мозгом при ХНМК

Ишемизированная ткань мозга испытывает энергодефицит, более того, в

результате снижения аэробного окисления глюкозы в ней развивается лактат-

ацидоз, что приводит к дальнейшему каскаду нарушений клеточного метаболизма.

Вещества, увеличивающие потребление глюкозы мозгом, уменьшают повреждение ишемизированной нервной ткани. В связи с чем было изучено влияния соединения

VMA-10-18 и препарата сравнения глиатилина на метаболизм глюкозы в ткани ишемизированного мозга у животных с ХНМК.

Было установлено, что соединение VMA-10-18 статистически значимо увеличивает утилизацию глюкозы мозгом у животных с ХНМК (Рисунок 11).

Рисунок 11. Влияние соединения VMA-10-18 и глиатилина на утилизацию глюкозы мозгом у животных с хронической ишемией головного мозга

Примечание: * - р<0,05 - различия статистически значимы по отношению к группе -ЛО животных; # - р<0,05 - различия статистически значимы по отношению к группе животных контроль-ишемия (критерий Дана).

140

Среди различных форм НМК по распространенности одно из первых мест занимает хроническая цереброваскулярная недостаточность. Хроническая ишемия мозга – особая разновидность сосудистой церебральной патологии, обусловленная медленно прогрессирующим диффузным нарушением кровоснабжения головного мозга с постепенно нарастающими разнообразными дефектами его функционирования. За последние 10 лет, по данным Министерства здравоохранения РФ, число больных с хроническими формами нарушения МК выросло. Развитие и прогрессирование ХНМК в клинической практике зачастую сопровождаются эмоциональными нарушениями у больных с преобладанием тревожных и депрессивных компонентов. Их наличие снижает приверженность пациентов к терапии, негативно влияет на эффективность проводимых лечебных и профилактических мероприятий. Вместе с тем коррекция указанных нарушений нередко осложнена тем, что пациенты с ХНМК вынуждены одновременно принимать несколько лекарственных препаратов с риском развития нежелательного лекарственного взаимодействия. Поэтому наличие у нейропротекторного средства (анксиолитических и антидепрессивных свойств)

позволит снизить риск полипрагмазии и повысит эффективность проводимой терапии. Проведенное исследование позволило установить, что соединение VMA- 10-18 способно снижать выраженность эндотелиальной дисфункции и улучшать мозговое кровообращение, очевидно это обуславливает снижение выраженности когнитивного нарушения. Соединение VMA-10-18 в условиях ХНМК оказывало анксиолитическое действие, что будет несомненно полезным при его применении у лиц с НМК, имеющих тревожно-депрессивные наслоения.