Добавил:
kiopkiopkiop18@yandex.ru Вовсе не секретарь, но почту проверяю Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Скачиваний:
0
Добавлен:
24.03.2024
Размер:
1.52 Mб
Скачать

2.2.11. Оценка уровня эндогенной интоксикации по методу м.Я. Малаховой

Уровень эндогенной интоксикации (ЭИ) оценивали путем определения олигопептидов (методом микроопределения белка с реактивом Лоури), а также веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ) в плазме, эритроцитах смешанной венозной крови и в плазме, эритроцитах артериальной крови, а также в моче по М.Я. Малаховой (Малахова М.Я., 1995а).

Выделение и идентификация в «чистом» виде составляющих пула ВНСММ показало их неоднородность и выявило биологическую активность, связанную с пептидным компонентом (Тупикова З.А., 1983; Малахова М.Я., 1995 а, б, в). Суть метода определения ВНСММ состоит в осаждении крупномолекулярных белков раствором трихлоруксусной кислоты и регистрации спектральной характеристики водного раствора супернатанта в зоне ультрафиолетовой части длин волн, что позволяет произвести комплексную оценку более 200 веществ, образующихся при нормальном и нарушенном метаболизме.

Раздельное определение ВНСММ и олигопептидов позволяет получать своевременную информацию о развитии эндогенной интоксикации (Ершов А.Л., 1992; Оболенский С.В., Малахова М.Я., Ершов А.Л., 1991).

Для определения ВНСММ в плазме брали 1,0 мл плазмы. Для определения ВНСММ на эритроцитах – 0,5 мл эритроцитарной массы, доводили её до исходного объема крови добавлением 0,5 мл изотонического раствора хлорида натрия, перемешивали. Для определения ВНСММ в моче брали 0,1 мл мочи, добавляли 0,9 мл изотонического раствора хлорида натрия, также перемешивали. В полученные три пробы добавляли 0,5 мл трихлоруксусной кислоты в концентрации 150 г/л, производя осаждение. Через 5 минут пробы центрифугировали при 3000 об./мин в течение 30 минут. Супернатант разводили дистиллированной водой в соотношении 1:9 и фотометрировали против контроля на спектрофотометре производства ЛОМО – СФ-46М. Регистрировали спектр в диапазоне длин волн 200-320 нм.

Расчет результатов производился путем интегрального измерения площади фигуры, образованной осью абсцисс и полученными значениями экстинкций для каждого типа определения: плазмы, эритроцитов, мочи. Измерения производили в условных единицах (у. е.).

С целью анализа спектра плазменного пула ВНСММ дополнительно рассчитывали катаболический пул (величину площади на длинах волн от 200 до 260 нм) характеризующий интенсивность катаболизма (Малахова М.Я., 1995а).

Олигопептиды определяли методом микроопределения белка с реактивом Лоури в плазме, эритроцитах смешанной венозной, артериальной крови, моче (Малахова М.Я., 1995а). Использовались следующие реактивы: Фолина-Чиккольтау, щелочно-медный реактив, раствор альбумина, содержащий 0,25 мг белка в 1 мл. Для построения калибровочной кривой, используемой для расчета содержания олигопептидов, использовали стандартные растворы с определенной концентрацией белка (растворы альбумина). Брали по 1 мл из разведенного в 10 раз супернатанта, приготовленного для определения ВНСММ к спектрофотометрированию, прибавляли 2 мл щелочно-медного реактива и оставляли при комнатной температуре на 10 мин. Затем добавляли 0,2 мл реактива Фолина-Чиккольтау, перемешивали и через 30-40 мин измеряли величину оптической плотности при длине волны 740 нм на спектрофотометре СФ-46М. Расчет количества белка в образце производили по стандартному раствору белка.

Рассчитывали индекс интоксикации (ИИ) – условную величину, представляющую собой произведение концентрации ВНСММ (у.е.) и олигопептидов (ОП) (г/л) в плазме (ИИ плазмы) и эритроцитов (ИИ эритроцитов) артериальной и венозной крови, а так же мочи (ИИ мочи) (Малахова М.Я., 1995а) по формуле:

ИИ = ВНСММ  ОП,

где ИИ - индекс интоксикации, ВНСММ - вещества низкой и средней молекулярной массы, ОП - олигопептиды.

Комплексная оценка эндотоксемии производилась также по индексу эндогенной интоксикации (ИЭИ), получаемому при суммировании ИИ плазмы и ИИ эритроцитов в артериальной и венозной крови (Малахова М.Я., 1995а). Индекс эндогенной интоксикации рассчитывался по следующей формуле:

ИЭИ = (ВНСММ пл.  ОП пл.) + (ВНСММ эр.  ОП эр.),

где ИЭИ - индекс эндогенной интоксикации, ВНСММ пл. - вещества низкой и средней молекулярной массы плазмы, ВНСММ эр. - вещества низкой и средней молекулярной массы эритроцитов, ОП пл. - олигопептиды плазмы, ОП эр. - олигопептиды эритроцитов.